siRNA下调鞘氨醇激酶-1对结肠癌LOVO细胞凋亡和侵袭的影响及其机制的研究

目的研究siRNA下调鞘氨醇激酶-1（Sphk1）的表达对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭以及ERK和p38通路的影响。方法采用siRNA抑制Sphk1的表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,Western杂交检测蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞Sphk1 mRNA表达,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂（uPA）的分泌。结果 Sphk1 siRNA显著抑制Sphk1 mRNA和蛋白表达,并可诱导细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。抑制Sphk1的表达可降低ERK和磷酸化ERK蛋白的表达,并促进p38和磷酸化p38蛋白的表达,同时可抑制细胞MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论抑制Sphk1可能是通过抑制ERK并激活p38 MAPK通路,下调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭并促进细胞的凋亡。     

鞘氨醇激酶1调控p38和c-Jun氨基末端激酶通路影响结肠癌HT-29细胞的凋亡迁移与侵袭

目的 探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)和N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)诱导和抑制人结肠癌HT-29细胞SphK1的活化和表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测SphK1的活性,Western blot检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化.结果 PMA和DMS能分别诱导和抑制SphK1活性和表达,在24 h内呈一定的时间依赖性.PMA能抑制细胞的凋亡,100 nmol/L PMA作用0、6、12、24 h后,细胞凋亡率分别为(9.35±0.84)%、(7.61±0.48)%、(5.53±0.76)%和(0.56±0.33)%.DMS能显著抑制细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,50 μmol/L DMS作用0、6、12、24 h后,细胞凋亡率分别为(9.18±0.94)%、(12.06±1.41)%、(19.80±2.36)%和(31.85±3.60)%.对照组、PMA组和DMS组的迁移细胞数分别为68.75±6.15、109.33±11.63和10.83±2.48,侵袭细胞数分别为55.42±4.50、90.58±7.06和9.58±2.39,与对照组比较,PMA组迁移和侵袭细胞数明显增多,而DMS组则显著减少.对照组、PMA组和DMS组的p38表达强度分别为0.20±0.03、0.08±0.02和0.31±0.03,磷酸化p38(p-p38)表达强度分别为0.19±0.02、0.09±0.02和0.38±0.05,应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)的表达强度分别为0.26±0.03、0.12±0.03和0.43±0.06,PMA显著抑制p38、p-p38和SAPK/JNK蛋白的表达,而DMS则促进p38、p-p38和SAPK/JNK蛋白的表达.结论 SphK1可促进结肠癌HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并抑制细胞的凋亡,其机制可能是通过抑制p38和SAPK/JNK通路而发挥作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sphingosine kinase 1 (SphK1) on the proliferation, apoptosis, migration and invasion of colon cancer TH-29 cells and to explore its molecular mechanisms. Methods Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) was used to induce the activity of SphK1 and N, N-dimethylsphingosine (DMS) was used to suppress the activity of SphK1. Cell prolieration and apoptosis were detected by MTT assay and flow cytometry, respectively. The migration and invasion capabilities of the cells were assessed in Transwell chambers. The activity of SphK1 was assayed by autoradiography. Western blot was used to evaluate the protein expression of SphK1, p38, phosphorylated p38 (p-p38) and SAPK/JNK. Results PMA and DMS were able to induce and suppress the activity and protein expression of SphK1 in a time-dependent manner, respectively. PMA enhanced and DMS suppressed the cell viability in a time- and dose-dependent manner. Being treated with 100 nmol/L PMA or 50 μ mol/L DMS for0, 6, 12, 24 h, the cell apoptosis rates of PMA group were (9.35 ±0.84)%, (7.61 ±0.48)%,(5.53 ±0.76) % and (0.56 ±0.33 ) %, contrastlv, that of DMS group were (9.18 ±0.94) %, ( 12.06 ±1. 41 ) %, ( 19.80± 2.36) % and (31.85 ± 3.60) %, respectively. Compared with the control group, the cell migration and invasion capabilities of the PMA group were significantly enhanced, and that of the DMS group were significantly suppressed. The migration cell number of control, PMA and DMS groups were 68.75 ±6.15, 109.33 ± 11.63 and 10. 83 ±2.48, the invasion cell number of control, PMA and DMS groups were 55.42 ± 4.50, 90. 58 t 7.06 and 9.58 ± 2.39, respectively. With the elevating activity and expression of SphK1, the protein expressions of p38, p-p38 and SAPK/JNK were strikingly suppressed. On the contrary, after treating with DMS the protein expressions of p38, p-p38 and SAPK/JNK were enhanced.Conclusions SphK1 potently enhances the prolieration, migration and invasion of colon cancer HT-29 cells, meanwhile suppresses the cell apoptosis. The suppressing of the p38 and SAPK/JNK signalling pathways may be one of its molecular mechanisms.     

过表达CBX7调控PTEN/Akt信号通路干预上皮-间充质转化抑制胃癌细胞迁移、侵袭

目的 探讨染色体盒蛋白同源物7(CBX7)对胃癌细胞上皮-间充质转化（EMT）、迁移、侵袭的影响及相关作用机制。方法 将CBX7过表达质粒和阴性对照质粒、CBX7 siRNA和阴性对照siRNA转染至体外培养的人胃癌细胞SGC7901。采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中CBX7的mRNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell小室检测细胞侵袭情况,Western blot法检测细胞中EMT相关蛋白和磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达。结果 与pcDNA-NC组比较,pcDNA-CBX7组SGC7901细胞存活率、迁移率及侵袭数均显著下降/减少,细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、PTEN蛋白表达量均显著升高,N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达量、p-Akt/Akt均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。与si-NC组比较,si-CBX7组SGC7901细胞存活率、迁移率及侵袭数均显著升高/增加,细胞中E-cadh...     

生长抑素联合大黄对急性胰腺炎患者的疗效及对肠道黏膜屏障和菌群多样性的影响

目的:探讨生长抑素联合大黄对急性胰腺炎患者的疗效及对肠道黏膜屏障和菌群多样性的影响。方法:选择2021年1月—2022年6月期间就诊的96例急性胰腺炎患者为研究对象，按照随机数字表法将所有患者分为大黄组(n=48)和对照组(n=48)。将同期就诊的健康体检人群作为健康对照组(n=48)。所有患者均在基础治疗的基础上予以生长抑素静脉推注，大黄组在此基础上加用生大黄饮剂。比较两组患者的疗效，同时于入院时及治疗后7 d时收集大黄组、对照组及健康对照组大便标本，对肠道菌群情况进行检测，分析治疗前后两组患者的大便菌群变化情况以及与健康对照组之间的关系。同时对治疗前后两组患者的肠道黏膜屏障功能进行评估并分析之间的差异。结果:治疗后1、3及7 d时，大黄组患者的急性生理与慢性健康Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分、淀粉酶、白细胞及C反应蛋白均低于对照组(P<0.05)。大黄组患者的腹痛、腹胀消失时间及住院天数均少于对照组，转ICU及手术占比均低于对照组(P<0.05)。治疗后7 d时，大黄组患者的二胺氧...     

曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE3细胞增殖抑制作用

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE3细胞周期阻滞与凋亡影响及作用机制.方法 以不同浓度TSA作用鼻咽癌CNE3细胞株,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率;流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞调亡情况及细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶相互作用蛋白1(p21)mRNA表达的变化.结果 100～500 nmol/L TSA对CNE3细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,抑制率为17.74%～44.33%;400,500 nmol/L TSA可在DNA合成期(S)、DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)诱导CNE3细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡,24 h凋亡率为(14.67±0.21)%,(18.73±1.80)%,48 h凋亡率分别为(16.3±0.96)%,(39.17±1.27)%,与对照组(9.16±1.05)%比较差异均有统计学意义(P<0.05);TSA可诱导CNE3细胞内p21基因表达.结论 TSA可明显抑制CNE3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与p21基因异常表达有关.     

鞘氨醇激酶-1激活ERK通路介导人结肠癌细胞株LoVo侵袭与迁移的实验

目的研究Sphk1对人结肠癌LoVo细胞侵袭与迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法将人结肠癌LoVo细胞分成Sphk1激活组,Sphk1抑制组,空白对照组。以Phorbol 12-myristate 13-acetate（PMA）为Sphk1激活剂（终浓度为100 nM）,N,N-dimethyl-D-eryt-hro-sphingosine（DMS）为Sphk1抑制剂（终浓度为50 μM）,NaCl（终浓度为0.9%）为空白试剂处理LoVo细胞24 h后,用Transwell Boyden小室模型测定LoVo细胞的相对侵袭率与迁移率;用Western　blot方法测定细胞Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2蛋白水平的变化;用ELISA方法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9及uPA的蛋白含量;用半定量RT-PCR检测细胞中MMP-2、MMP-9和uPA的mRNA水平。结果Sphk1激活剂可促进LoVo细胞侵袭与迁移,同时明显增强LoVo细胞中Sphk1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达,并促进MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。Sphk1抑制剂则抑制LoVo细胞侵袭与迁移,同时抑制Sphk1、ERK1/2与p-ERK1/2的蛋白表达,并抑制MMP-2、MMP-9及uPA的mRNA表达与蛋白分泌。结论Sphk1可促进人结肠癌细胞株LoVo细胞的侵袭与迁移,其机制可能与激活ERK1/2信号通路从而促进MMP-2、MMP-9及uPA mRNA表达与蛋白分泌有关。     

溶血磷脂酸在消化系肿瘤中的作用

溶血磷脂酸是一种细胞间磷脂类信号分子,通过G蛋白偶联受体参与多种肿瘤的发生和发展,本文就溶血磷脂酸的结构及生物学作用在消化系肿瘤发生、发展中的作用机制进行探讨.     

曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及作用机制。方法以不同浓度(300、400、500 nmol/L)TSA作用鼻咽癌CNE2细胞株,采用流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析TSA作用后鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)表达的变化。结果以300、400、500 nmol/L TSA分别诱导CNE2细胞凋亡,作用24 h后凋亡率分别为12.52%±1.57%、19.69%±3.00%、19.63%±2.68%;48 h后凋亡率为24.50%±4.45%、36.24%±3.92%、34.82%±6.45%;与对照组(0 nmol/L TSA)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现,TSA可诱导CNE2细胞内p21基因表达明显增加(P<0.01)。结论 TSA能明显诱导CNE2细胞凋亡,其作用机制可能与p21基因的异常表达有关。     

鞘氨醇激酶-1调控ERK和NF- κB通路促进HT-29细胞的增殖和侵袭

目的 探讨鞘氨醇激酶-1(Sphk1)对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和侵袭转移的影响及其作用机制.方法 采用(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)诱导人结肠癌HT-29细胞Sphk1的活化和表达,N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)抑制Sphk1的活化和表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,γ-32P-ATP掺入法检测Sphk1的活性,Western杂交检测蛋白的表达,Transwell小室模型观察细胞迁移和侵袭能力的变化,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMp-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌.结果 PMA和DMS能分别有效地诱导和抑制HT-29细胞Sphk1活性和蛋白的表达;同时,PMA能促进细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡;DMS则抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞的凋亡.诱导Sphk1的活化以及表达可促进细胞ERK、p-ERK和NF-kBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMp-9和uPA的分泌,而抑制Sphk1则抑制ERK、p-ERK和NF-kBp65的蛋白表达以及MMP-2、MMP-9和uPA的分泌.结论 Sphk1可能是通过激活ERK和NF-k B通路,上调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞的凋亡.