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目的探究核因子κB(NF-κB)是否通过分拣蛋白Sortilin影响荷脂THP-1巨噬细胞脂质代谢和泡沫化。方法 NF-κB激活剂PMA或其特异性抑制剂PDTC孵育荷脂THP-1巨噬细胞,qRT-PCR检测Sortilin mRNA水平,Western blot检测Sortilin蛋白表达;沉默荷脂THP-1巨噬细胞Sortilin同时加入PMA孵育,胞内胆固醇流出行液体闪烁计数器检测,胞内脂质含量行高效液相色谱法检测,胞内脂滴情况用油红O染色显示。结果 PMA孵育处理荷脂THP-1巨噬细胞后Sortilin mRNA水平及蛋白表达上调,PDTC孵育处理后Sortilin mRNA水平及蛋白表达下调;PMA孵育处理荷脂THP-1巨噬细胞内脂质流出减少,脂质蓄积程度增加,泡沫细胞形成加剧,而PMA与Sortilin shRNA共处理后,其胞内脂质流出增多,胞内脂质蓄积程度减轻,泡沫细胞形成受抑。结论 NF-κB通过促进Sortilin表达,导致巨噬细胞内脂质流出受抑,胞内脂质蓄积程度加重,从而加剧泡沫细胞形成。 相似文献
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目的探讨分拣受体Sortilin对THP-1巨噬细胞内脂质代谢的影响。方法用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育THP-1巨噬细胞。Western blot检测荷脂后THP-1巨噬细胞中Sortilin表达变化;THP-1巨噬细胞Sortilin高表达和沉默后,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,油红O染色观察胞内脂滴情况。结果 THP-1巨噬细胞Sortilin表达呈ox-LDL剂量和时间依赖性增加;以50 mg/L ox-LDL处理24 h后THP-1巨噬细胞Sortilin表达水平达到高峰。与对照组相比,Sortilin过表达后巨噬细胞胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴明显增多,而Sortilin沉默后则刚好出现相反的结果。结论 Sortilin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。 相似文献
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目的 探讨Sortilin对荷脂THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白表达及胞内脂质流出的影响。 方法 采用Western blot和qRT-PCR检测细胞内ABCA1蛋白和mRNA表达水平;Co-IP实验检测Sortilin和ABCA1的结合情况;高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量变化;油红O染色观察细胞内脂滴情况。 结果 Sortilin下调细胞内ABCA1蛋白水平,但对其mRNA水平无显著影响;Co-IP结果表明Sortilin能与ABCA1结合;与对照组相比,Sortilin过表达后荷脂巨噬细胞内胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴肥大,数量明显增多,Sortilin沉默后荷脂巨噬细胞胆固醇流出增加,胞内脂质含量减少,脂滴瘦小,数量减少;溶酶体抑制剂氯喹共处理可部分逆转Sortilin过表达对巨噬细胞ABCA1蛋白和胆固醇流出的抑制作用。 结论 Sortilin下调巨噬细胞ABCA1蛋白水平,抑制胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。 相似文献
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目的 探讨Sortilin对荷脂THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白表达及胞内脂质流出的影响。 方法 采用Western blot和qRT-PCR检测细胞内ABCA1蛋白和mRNA表达水平;Co-IP实验检测Sortilin和ABCA1的结合情况;高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量变化;油红O染色观察细胞内脂滴情况。 结果 Sortilin下调细胞内ABCA1蛋白水平,但对其mRNA水平无显著影响;Co-IP结果表明Sortilin能与ABCA1结合;与对照组相比,Sortilin过表达后荷脂巨噬细胞内胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴肥大,数量明显增多,Sortilin沉默后荷脂巨噬细胞胆固醇流出增加,胞内脂质含量减少,脂滴瘦小,数量减少;溶酶体抑制剂氯喹共处理可部分逆转Sortilin过表达对巨噬细胞ABCA1蛋白和胆固醇流出的抑制作用。 结论 Sortilin下调巨噬细胞ABCA1蛋白水平,抑制胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。 相似文献
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