VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究

目的　研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。　方法　琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。　结果　VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。　结论　 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失     

三氧化二砷对肝癌细胞系HepG2生长及核基质蛋白的影响

目的 探讨三氧化二砷对人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２的生长及核基质蛋白的影响。方法 应用生长指数分析和高分辨ＳＤＳ－聚丙烯酰胺交双向电泳比较用Ａｓ２Ｏ３处理后的ＨｅｐＧ２细胞主核基质蛋白的改变。结果 Ａｓ２Ｏ３抑制ＨｅｐＧ２的生长,双向电泳显示经Ａｓ２Ｏ３处理后ＨｅｐＧ２细胞内出现新的核基质蛋白,并且该蛋白是细胞特异性的。结论 核基质蛋白是某些抗癌药物的作用靶子,Ａｓ２Ｏ３抑帛 癌细胞的生长可望有用于临床     

树突状细胞对LPAK抗人肝癌细胞的促进作用

目的观察人血树突状细胞（DC）联合LPAK细胞（L）体外抗人肝癌BEL-7402细胞（B）的杀伤效应,并对死亡细胞进行形态学分析.材料和方法LD组为DC＋L＋B,L组为L＋B,二组均采用L：B为5：1和10：1两种放靶比,应用TUNEL法及杀伤细胞检测技术,比较LD和L组的抗肿瘤效应。结果人血DC联合LPAK细胞与单用LPAK细胞的抗肿瘤活性比较,LD组＞L组（P＜0.01）,但二者均能诱导BEL-7402细胞调亡;调亡的肿瘤细胞是TUNEL阳性,在LD组较L组明显增多。结论DC能明显增强LPAK细胞对人肝癌细胞的杀伤活性,但不改变LPAK细胞诱导肿瘤细胞调亡的死亡模式。     

人食管癌细胞核基的研究

目的 研究人食管癌细胞株ＥＣ１和ＥＣ１８的核基质开矿及蛋白成分。方法 应用细胞的选择性抽提、ＤＧＤ包埋－去包埋剂电镜制样观察核基质形态，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向电泳和免疫印迹等分析核基质蛋白成分。结果 抽提后，两种细胞内均存在精细的核基搏击蛋白成分，也有各自的牧民性核基质蛋白。在免疫印迹分析中，使用抗人ＮｕＭＡ单克隆抗体检测到两株这癌细胞中都存在ＮuＭＡ蛋白。结论 在食管癌细胞中，存在特异     

人血树突状细胞联合LPAK细胞体外诱导肝癌细胞株凋亡的形态学观察

研究人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)联合LPAK(lymphokine and PHA activatedkiller)细胞体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的作用,并进行形态学分析。实验分LD(BEL-7402 LPAK DC),L(BEL-7402 LPAK),D(BEL-7402 DC)和 B(BEL-7402)四组,采用中性红摄入比色法检测细胞毒活性,原位末端标记(TUNEL)技术、电镜技术观察细胞的光镜形态和超微结构。结果显示,D组与B组比较吸光度值无显著性差异(P>0.05),即无杀伤活性;LD组与L组比较,细胞毒活性为LD组>L组(P<0.01)。光镜下凋亡的肿瘤细胞呈TUNEL阳性,细胞核染成棕黄色或深棕色,大小不等,形态也不一;电镜下肿瘤细胞核染色质凝聚、固缩和胞质浓缩,凋亡小体多见;少部分LPAK细胞内形成自噬体,发生自噬性凋亡。结论提示,人血DC联合LPAK细胞能有效地诱导肝癌细胞凋亡,在此过程中LPAK细胞同时发生自噬性凋亡。     

核基质研究现状与展望

引言Berezney和Coffey首先报导了真核细胞内核基质蛋白的存在。核基质是细胞桩内的一种动态非染色质结构，它调节DNA的功能并提供调控核酸功能活动的场所．近年来研究表明，视网膜母细胞瘤基因产物与棱基质间的互相作用对细胞周期的调节显得十分重要。核基质蛋白数量庞大且可变化，因化学修饰．浓度或某种新型蛋白出现而使核基质蛋白发生改变，     

In vitro study on the morphology of human blood dendritic cells and LPAK cells inducing apoptosis of the hepatoma cell line

Objective To observe in vitro effects and morphological changes of human peripheral blood dendritic cells (DCs) on the ability of lymphokine and phytohaemagglutinin um (PHA) activated killer (LPAK) cells to induce apoptosis of the human hepa toma cell line (BEL-7402, B).Methods Experimental groups were divided into LD group （DCs+L+B）, L gro up （L+B）, D group （DCs+B） and B group. The methods of neutral red u ptake, ordinary light microscopy, electron microscopy, TDT mediated X-dUTP nick end labeling (TUNEL) were used.Results The difference between the D group and the B group was not distinct (P&gt;0.05 ). The difference between the LD group and the L group was distinct, with DCs+ LPAK &gt;LPAK (P&lt;0.01) in cytotoxity. Apoptotic cells were TUNEL positive in light microscopy, and apoptotic nuclei were stained yellow brown and dar k brown, with size and shape varying from cell to cell. Ultrastructural cha nge in apoptotic tumor cells comprised of compaction and condensation of nuclear chromatin, and condensation of cytoplasm and apoptotic bodies. At the sam e time, LPAK cells manifested the characteristics of autophagic apoptosis, and t here were some autophagic bodies in it. Conclusions The combination of human blood DCs and LPAK cells could induce apoptosis of BEL -7402 cells effectively, with some LPAK cells manifesting the characteristics o f autophagic apoptosis.     

人血管内皮细胞的体外培养及其特性

用胶原酶消化法定内皮细胞从人脐带静脉内膜分离,并培养在含有内皮细胞生长因子的RPMI1640培养基内,细胞在体外培养中可以传至第6—10代。细胞呈相互密切接触地单层生长。细胞大,呈多边形,且在培养中可以形成毛细血管芽。用单克隆抗体方法检查,胞浆第因子呈阳性反应。在透射电镜下于胞浆内查见WeibeI—PaIade氏小体。内皮细胞的培养有利于研究癌转移及血管疾病。     

恶性肿瘤细胞浸润视网膜内界膜的超微结构研究

In order to observe the process of invasion, retina of rat was used as a model to substitute the inner limiting membrane of retina for the basement membrane. Retina invaded by esophageal carcinoma cells and B16 melanoma cells upon the inner limiting membrane was studied by scanning and transmission electron microscopy. The results showed that the inner limiting membrane was destroyed by the two kinds of tumor cells mentioned above. The process of destruction was followed by a series of transformation in the inner limiting membrane, i.e. folding, swelling, thickening, and granulation. The inner limiting membrane was dissolved focally as a result of transformation, and then tumor cells invaded the retina through these dissolved regions. It seems that, like a barrier, the inner limiting membrane plays a similar role as the basement membrane.     

人血管平滑肌细胞系的建立及其特性

血管平滑肌细胞是血管壁的主要组成部分,具有特殊的生理功能。在体外培养建立血管平滑肌细胞系,将使动脉粥样硬化等疾病的阐明成为可能,在癌细胞侵袭血管壁而形成转移的研究中,亦有重要意义。本文报告人脐带动脉中层平滑肌组织,体外培养建立了人的血管平滑肌细胞系、研究其生化及形态特性,讨论其应用。材料及方法一、人血管平滑肌细胞的采集性培养按Okker-Reitsma G. H法略加简化。用刚分娩后的人脐带6条,各长约25-35厘米分离出动脉管约5厘米长,剥弃动脉壁外层后,横切为数断,每段长约2毫米。用缓冲液冲洗后,纵向切开