穿心莲八氢番茄红素脱氢酶ApPDS的基因克隆及功能鉴定

采用RT-PCR和RACE技术从穿心莲植株中克隆得到了八氢番茄红素脱氢酶(PDS)的全长cDNA,预测有一个1 752 bp的完整开放阅读框(序列已登录GenBank,登录号KP982892),编码584个氨基酸。序列同源性分析,穿心莲PDS编码的氨基酸序列与芝麻、广藿香、黄芩等其他植物的PDS有很高的同源性,该蛋白包含一个共有的氨基酸脱氢酶的辅酶结构域NAD(H)-binding domain。利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析,发现PDS基因在穿心莲的根、茎、叶、花中均有表达,表达量为叶> 花> 茎> 根。用病毒诱导基因沉默(VIGS)的方法在穿心功莲体内鉴定ApPDS的功能,构建VIGS载体pTRV2-PDS,经农杆菌浸染穿心莲叶片,植物表型观察、定量RT-PCR检测ApPDS基因的表达,结果观察到叶片轻微变黄和明显的基因下调,鉴定了ApPDS在体内的功能。该研究首次克隆并鉴定了穿心莲PDS基因,为进一步研究穿心莲中新基因尤其是穿心莲内酯类二萜生物合成基因的功能奠定了基础。     

千里光橙花叔醇合酶SsNES的功能鉴定北大核心CSCD

通过对千里光转录组数据筛选得到一个较短的萜类合酶基因。对其进行系统进化树和序列比对分析,初步确定为一个橙花叔醇合酶,命名为SsNES (GenBank登录号MH518312)。通过蛋白同源建模表明SsNES虽然序列较短,但具有完整的保守功能域,并且能正确折叠。通过对该基因的克隆,原核表达载体的构建,成功在大肠杆菌中表达出可溶性蛋白;用大肠杆菌代谢工程鉴定SsNES的体外催化功能,结果表明SsNES可以催化反式法尼烯焦磷酸(FPP)生成反式橙花叔醇。在千里光茎叶的提取物中也检测到反式橙花叔醇,表明该基因作为橙花叔醇合酶在千里光中行使功能;通过RT-PCR表达模式的分析,SsNES在茎中表达最高,其次是花、叶,在根中不表达;在水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、丙甲菌素(Ala)的处理后该基因均能在6 h时就被诱导表达,表明该基因可能参与到千里光应对胁迫响应的防御过程中。SsNES生化功能的鉴定不仅为倍半萜合酶的研究提供多样性,也解析了千里光中橙花叔醇的生物合成,为千里光萜类化合物介导的病虫害防御提供理论基础。     

DSA定位下不同原因食管气管瘘内支架置入的临床应用

目的：探讨内支架置入在不同原因食管气管瘘中的应用,总结支架处理的手术难点和临床疗效。方法12例经碘水造影确诊食管气管瘘患者,其中食管癌术后吻合口瘘6例,选择两端球头直径至少大于体部6 mm的支架;食管支架置入后瘘2例,采用咳嗽动态显影和导丝的应用确认瘘口位置;放疗后瘘4例均先使用球囊导管预扩张。在数字减影血管造影（DSA）下准确定位后行支架置入。结果11例支架置入成功,瘘口完全封堵,肺部感染得以控制,术中无并发症,其中1例支架置入后15 d出现大出血死亡;另外1例置入支架后瘘口仍存在,1个月后死于肺部感染。结论对于不同原因食管气管瘘患者,关键是选择合适类型和直径的支架,同时支架置入后疗效确切,并发症少。     

MSCTA 在主动脉夹层成像中的应用

目的：探讨多层螺旋CT血管造影（ MSCTA ）在主动脉夹层成像中的应用价值。评价三维重建图像对主动脉夹层的破口、内膜瓣和真、假腔的显示能力。方法49例主动脉病变的患者作为研究对象,对所有患者行CT增强扫描。重建方法为容积再现（VR）、最大密度投影法（MIP ）、多平面重建法（MPR）、曲面重建（CPR）,分别计算各种重建方法对破口、内膜瓣和真、假腔的显示率。结果 MPR,CPR,VR对破口的显示率分别为95．92％,95．92％,18.37％,对内膜瓣的显示率均为100％。 MIP不能直接显示破口和内膜瓣。 MPR,CPR,VR对真、假腔的显示率均为100％, MIP为67．35％。 MSCTA同时可以发现主动脉之外的疾病。结论 MSCTA适用于主动脉夹层的显示,所采集的数据能够满足3D图像后处理的需要。 MPR和CPR对主动脉夹层显示最好,VR次之,MIP最差。     

胰岛素泵在糖尿病急症中的应用

随着生活水平的提高,人口老年化的进展,糖尿病已成为严重威胁人类健康的最常见的慢性病之一。糖尿病患者经常合并有各种急性病变,最常见的急症有糖尿病酮症酸中毒（diabetes mellitus ketoacidosis,DKA）,高渗性非酮症性糖尿病昏迷（non-ketotic hyperosmolar diabetic coma,NHDC）。这些急性并发症多在感染、饮食失控、胰岛素使用不当、精神因素、应激等情形下诱发,严重威胁患者生命。目前治疗上仍以小剂量胰岛素、补液及支持对症治疗为主。在小剂量胰岛素的使用方法上,目前已开始广泛使用胰岛素泵来治疗糖尿病及其并发症。本文对胰岛素泵在糖尿病急症中的应用作一综述。     

miR-15a/miR-16-1增强Raji细胞对阿糖胞苷的敏感性

目的探讨miR-15a和miR-16-1寡核苷酸能否增强Raji细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的敏感性。方法将化学合成的miR-15a和miR-16-1寡核苷酸利用脂质体2000转染入Raji细胞后,联合Ara-C,CCK8法检测Ara-C的IC50值变化;锥虫蓝细胞计数法检测细胞增殖活性;Hoechst染色观察细胞的凋亡形态;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法测凋亡率。结果miR-15a和miR-16-1寡核苷酸转染Raji细胞后,再加入Ara-C,24h Ara-C的IC50值分别为10.41和10.86,明显低于单用Ara-C组(15.43)和随机序列联用Ara-C组(14.92,P<0.05)。锥虫蓝拒染法结果显示,转染后各时间点miR-15a/miR-16-1+Ara-C组较单用miR-15a/miR-16-1组、单用Ara-C组及随机序列+Ara-C组明显抑制了Raji细胞的生长,Hoechst染色可见大量凋亡细胞;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法检测显示,miR-15a+Ara-C组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为20.93%和25.27%,miR-16-1+Ara-...     

人pre-miR-15a真核表达载体的构建及其对Raji细胞生长的抑制作用

目的 构建人pre-miR-15a真核表达载体,并研究其对Raii细胞的生长抑制作用.方法 将pre-miR-15a与目标载体(PGCSIL-GFP)定向连接,转化细菌感受念细胞,PCR鉴定阳性克隆,并测序.利用脂质体法将该载体转染Raji细胞,实验分为空白对照组、阴性对照质粒组和pre-miR-15a组(n=5).RT-PCR检测Bel-2 mRNA表达,间接免疫荧光法检测Bcl-2蛋白表达,台盼蓝细胞计数法检测细胞增殖活性.结果 PCR 阳性克隆鉴定及测序结果 均与日的序列一致.倒置荧光显微镜下见绿色荧光表达;RT-PCR法示各组间Bcl-2 mRNA表达差异无显著性(P>0.05);间接免疫荧光法示pre-miR-15a组的Bcl-2蛋白表达量较空白对照组和阴性对照质粒组显著降低(P<0.05);台盼蓝拒染法示pre-miR-15a组Raji细胞生长受抑.结论 本实验成功构建了per-miR-15a真核表达载体,且pre-miR-15a可以抑制Raji细胞生长.     

人工老化对青川产北柴胡种子生理生化特性的影响

目的 探究青川产北柴胡种子的劣变机制,揭示其不耐贮藏的原因。方法 采用人工老化的方法处理柴胡种子,并分析老化过程中种子的抗氧化酶活性、电导率和营养物质量变化。结果 随老化时间延长,老化种子的过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、抗氧化酶（CAT）活性持续下降;可溶性糖和可溶性蛋白的量降低,老化3 d后均处于低量水平;种子浸出液电导率下降;经老化处理1 d的种子即已丧失萌发能力。结论 青川产北柴胡种子劣变机制包含氧化损伤、膜损伤和营养物质过度消耗3条途径,种子不宜长期贮藏,且贮藏要避免高温、高湿环境。     

奥沙利铂联合替吉奥治疗进展期胃癌的疗效分析

目的：探讨奥沙利铂联合替吉奥治疗进展期胃癌的安全性和有效性。方法胃癌患者27例均采用以下方案化疗：奥沙利铂130mg/（m2·d）,静脉滴注3h;替吉奥胶囊口服80mg/（m2·d）,分2次（早、晚餐后）,1~14d;21d为1个疗程,化疗≥2个疗程后评价疗效和不良反应。结果完全缓解（CR）0例（0%）、部分缓解（PR）14例（51.85%）、疾病稳定（SD）10例（37.03%）、疾病进展（PD）3例（11.11%）,有效率为51.85%,临床获益率为88.88%。主要不良反应为骨髓抑制、胃肠道反应和外周神经毒性。结论奥沙利铂联合替吉奥方案治疗进展期胃癌的近期疗效较好,不良反应可以耐受。     

Pre-miR-15a增强Raji细胞对阿糖胞苷的敏感性

MicroRNA(miRNA)是22个左右核苷酸组成的内源性RNA,通过切割mRNA或翻译抑制两种机制,在转录后水平对基因表达进行负性调控.它广泛地参与细胞的生长、发育、分化、增殖和凋亡.我们前期的研究表明,转染miR-15a寡核苷酸人人淋巴瘤细胞系Raji,可负性调控BCL-2的表达,进而诱导Raji细胞的凋亡[1].本实验转染miR-15a的前体(precursor of miRNA 15a,pre-miR-15a)并联合阿糖胞苷(eytambine,Ara-C),探讨pre-miR-15a能否提高Raji细胞对Ara-C的敏感性.