基质金属蛋白酶-2C端片段pex的克隆、测序及真核表达载体的构建

目的 :克隆小鼠基质金属蛋白酶 - 2 ( MMP- 2 ) C端片断 pex编码区的 c DNA序列 ,并构建其真核表达载体 ,为进一步研究其抑制肿瘤作用奠定基础。方法 :根据基因 Gen Bank中 MMP- 2基因的碱基序列 ,利用 RT- PCR的方法从 NIH3T3细胞中分别扩增信号肽及目的基因 pex,然后用多重 PCR的方法将两个片段拼接起来 ,再将拼接起来的目的片段 sig- pex与 p MD1 8T载体连接作全自动测序 ,利用亚克隆的方法将 sig- pex c DNA片段克隆到 pc DNA3.1载体中。结果 :DNA测序证实该片断序列与文献报道完全一致。结论 :成功构建出 pc DNA3.1 - sig- pex真核表达载体     

氯化甲基汞对大鼠脑神经细胞凋亡及P^53基因表达的影响

选用Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠,经皮下注射给予１０ｍｇ／Ｋｇ体重氯化甲基汞（ＣＨ３ＨｇＣｌ）,连续７天,第１５天取其脑组织,利用细胞和分子生物学技术进行ＤＮＡ电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析。实验结果,染毒组大鼠脑组织ＤＮＡ电泳呈现特征性梯形电泳带;ＦＣＭ分析染毒组大鼠脑神经细胞的凋亡率、Ｐ５３基因表达率显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ＣＨ３ＨｇＣｌ以诱导凋亡方式导致脑神经细胞损伤,Ｐ５３基因参与ＣＨ３ＨｇＣｌ诱导脑神经细胞凋亡的基因调控过程。     

PEX基因对肿瘤细胞生物学性状的影响

目的　探讨PEX基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响。方法　利用脂质体介导转染法,经G4 18稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察PEX基因对B16F10细胞生物学性状的影响。结果　BpcDNA sPEX、BpcDNA、B16F10三组细胞生长速度、细胞周期各时相均无明显差异(P >0 . 0 5 ) ;BpcDNA sPEX组细胞集落与BpcDNA组和B16F10组相比统计学上存在显著性差异(P <0 . 0 1) ,BpcD NA sPEX组细胞集落比BpcDNA组和B16F10组少,且单个集落中细胞数目少;BpcDNA sPEX组细胞穿透Matrigel胶能力比BpcDNA和B16F10组细胞弱,统计学上存在显著差异(P <0 . 0 1)。结论　PEX基因转染对体外单纯培养的B16F10细胞生长、增殖无影响;PEX基因可抑制B16F10细胞在软琼脂中形成集落的能力及体外侵袭能力。     

小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pNZ44-ssEndostatin的构建及表达

目的：构建带有小鼠分泌型内皮抑素（ssEndostatin）的原核表达载体pNZ44-ssEndostatin并在双歧杆菌中表达Endostatin蛋白方法：利用引物设计软件oligo6．0设计引物，从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质粒上PCR扩增得到ssEndostatin基因。经测序证实获得的ssEndostatin基因序列正确后，进行粘端连接，将ssEndostatin基因链接到pNZ44原核表达载体上，构建成pNZ44-ssEndostatin重组载体，PCR、酶切鉴定正确后电转化到双歧杆菌中然后利用ELISA法检测Endostatin表达。结果：测序结果证实ssEndostatin基因序列与Genebank中所公布的一致，说明ssEndostatin基因扩增正确而且构建的质粒pNZ44-ssEndostatin的PCR、酶切鉴定结果与预测的一致，说明重组质粒pNZ44-ssEndostatin构建成功转化后挑取阳性克隆进行菌落PCR证实重组质粒pNZ44-ssEndostatin已戍功转入双歧杆菌中ELISA法检测到转化有重组质粒pNZ44-ssEndostatin的双歧杆菌的菌体内有较高水平的Endostatin表达，且培养48h的表达量较20h的高，有氧条件下表达较缺氧条件下高，但上清中未捡测到。结论：成功地构建了带有分泌信号的小鼠内皮抑素表达载体pNZ44－ssEndostalin，成功转入双歧杆菌中并在菌体中表达，为后续利用双歧杆菌作为工具进行Endostatin基因治疗奠定了实验基础。     

乳腺浸润性微乳头状癌的临床病理学特征及HGF/c-Met蛋白的表达

目的 观察乳腺浸润性微乳头状癌(IMPC)的临床病理学特征,检测HGF及其受体c-Met在IMPC组织中的表达.方法 回顾性分析乳腺IMPC的临床与病理资料,应用免疫组化方法观察HGF/c-Met蛋白在IMPC组织中的表达,并分析其与病理学特征间的关系.结果 乳腺IMPC的检出率、淋巴管侵犯率、淋巴结转移率及转移个数均明显高于浸润性导管癌(IDC)(P<0.01);IMPC组织中ER、PR、HER-2、p53、Ki-67的表达率与其在IDC中的表达率差异不显著(P>0.05);但与c-Met的表达差异显著(P<0.05),IMPC组织中HGF的表达值比IDC高,但无统计学意义(P>0.05);c-Met蛋白的表达值与IMPC的组织学分级、病理学分期有关(P<0.05);HGF蛋白的表达值与IMPC的组织学分级有关(P<0.05).结论 淋巴管侵犯和区域淋巴结转移是IMPC的显著生物学特点,c-Met蛋白在IMPC组织中过表达,并与IMPC的组织学分级、TNM可以作为判断IMPC预后的因素之一,而HGF蛋白的表达则与IMPC的组织学分级有关.     

子宫绒毛叶状平滑肌瘤1例

患者女性,30岁。因不孕症检查发现盆腔肿物1月余。查体:子宫稍大,前方触及较大肿物,上界至脐上5 cm,下界至盆底,可活动。B超示子宫上方见实质肿物,上界至脐上5 cm,向左右两侧延伸,下界至盆底,未见腹水。行剖腹手术。术中见一外生性分叶状的巨大肿物,表面充血、紫红色,似胎盘绒毛叶状,并借一长3 cm的细软蒂连于子宫底右后壁,扩张到右侧阔韧带及盆、腹腔。冷冻病理检查诊断为子宫平滑肌瘤。行单纯肿物切除。病理检查巨检:切除的外生性分叶状肿瘤(图1)紫红色,由薄纤维结缔组织包裹,30 cm×29 cm×12 cm大小;分叶状结节大小不等,5 cm×4 cm×3…     

细胞角蛋白在乳腺导管内增生性病变中的表达及意义

目的研究CK19、CK8／18、CK5／6、CK34βE12在乳腺UDH、ADH、DCIS 3种病变中的表达率、表达特点及表达模式，探讨4种细胞角蛋白对乳腺UDH、ADH、DCIS的诊断及鉴别诊断的作用和意义。方法参照2003年WHO乳腺肿瘤组织学分类诊断标准筛选出乳腺UDH24例、ADH14例和DCIS24例，选用CK19、CK8／18、CK5／6和CK34βE124种细胞角蛋白行免疫组织化学染色。结果CK19在乳腺UDH、ADH、DCIS的阳性表达率分别为79．17％（19／24）、85．71％（12／14）、95．83％（23／24）。CK19在UDH中主要呈簇状阳性表达模式，而在ADH和DCIS中主要呈弥漫阳性表达模式。CK5／6、CK34βE12在UDH的表达率显著高于ADH和DCIS的表达率（P〈0．01）。结论CK19的表达模式有助于乳腺UDH、ADH、DCIS的鉴别诊断。CK5／6、CK34βE12在乳腺UDH与ADH和DCIS之间的表达率不同，其表达率有助于乳腺UDH与ADH和DCIS的鉴别诊断。     

电离辐射对卵巢癌细胞SKOV3中Beclin 1基因的影响

自噬(autophagy)是指细胞通过溶酶体对自身结构的吞噬降解,实现细胞的代谢需要和某些细胞器的更新.当自噬调控机制发生异常时,将导致细胞功能改变,甚至引起细胞死亡,即自噬性细胞死亡[1-3].Beclin 1又称BECN1,是最早被发现的哺乳动物调控自噬性死亡的基因,与酵母自噬基因ATG6同源,位于人染色体17q21上,编码一个含有450个氨基酸、相对分子质量为60×103的蛋白质[4].Beclin 1是自噬调节通路中重要的自噬调节基因,是一种双等位抑癌基因,与传统的抑癌基因不同,只有在双等位基因都表达时才能够发挥抑癌作用,其杂合性缺失可明显导致肿瘤的发生[5].有研究表明,Beclin 1在人类散发性前列腺癌中下降40％,在乳腺癌中下降50％,在卵巢癌中下降达到了75％[6].本实验中,通过基因工程的方式构建Beclin 1基因的过表达模型和干扰模型,在基因水平改变Beclin 1的表达,通过检测电离辐射后Beclin 1的表达变化,探讨其在自噬中的作用,从而为辐射联合基因治疗提供理论依据.     

肺透明细胞类癌一例

患者男 ,45岁。于入院前 1个月体检时发现右肺上叶有一圆形肿物 ,伴乏力、咳嗽 ,于 1999年 12月 12日入白求恩医科大学第二临床医院。胸部Ｘ线及ＣＴ检查示右肺上叶后段可见一约 3 .0ｃｍ× 2 .5ｃｍ大小类圆形肿物 ,其内密度不均。5年前有肺结核病史。临床诊断 :右肺上叶后段结核瘤。术中见肿物约 5 .0ｃｍ× 5 .0ｃｍ× 4.0ｃｍ ,位于右肺上叶 ,靠近中心 ,行右肺上叶切除术。病理检查 :右肺上叶体积 15ｃｍ× 6ｃｍ× 5ｃｍ ,距支气管断端切缘 1.0ｃｍ处见一圆形肿物 ,直径 5 .0ｃｍ ,位于肺叶边缘 ,肿物与周围肺组织界限清晰 ,无包膜 ,切…     

乳腺叶状肿瘤病理研究新进展

<正>乳腺叶状肿瘤(Phyllodes tumour,PT),原名乳腺叶状囊肉瘤,1838年由Mailer首次描述并命名,但由于该名称常引起误解,自1982年起WHO开始使用中性名称"叶状肿瘤"。该肿瘤最典型的特征是形成叶状结构,突向囊腔内,由间质和上皮两种成分组成,生物学行为难以预测。叶状肿瘤可以侵犯邻近乳腺组织,还可以复发、转移和恶变。目前WHO按照组织学特征将PT分为良性、交界性和恶性,但