不同卵巢储备功能的EMS患者行IVF-ET方案的选择

目的：了解不同卵巢储备功能的子宫内膜异位症( EMS)患者行不同方案的体外受精-胚胎移植( IVF-ET)治疗的结局差异。方法回顾性分析行IVF-ET治疗的337例EMS患者资料。据卵巢储备功能及治疗方案差异分为 A1组(卵巢储备功能正常,超长方案)、A2组(卵巢储备功能正常,长方案)和B1组(卵巢储备功能低下,超长方案)、B2组(卵巢储备功能低下,短方案),比较各组妊娠结局。结果A1组较A2组、B1组较B2组的获卵数、成熟卵母细胞数、受精数、卵裂数、可移植胚胎数及优质胚胎数均低(P<0．05),但卵裂率、可移植胚胎率及优胚率的差异均无统计学意义;A1组新鲜周期及解冻周期胚胎着床率、生化妊娠率、临床妊娠率及活产率均较A2组低( P<0．05),但B1组与B2组新鲜周期及解冻移植( F-ET)周期胚胎着床率、生化妊娠率、临床妊娠率及活产率的差异均无统计学意义。结论采取长方案取卵后行胚胎冷冻、治疗EMS后行F-ET是卵巢储备功能正常的EMS不孕患者IVF-ET最佳方案。     

HTRA1 shRNA慢病毒表达载体的构建及感染RPE细胞株的鉴定

 目的 构建HTRA1基因的shRNA慢病毒表达载体,并鉴定HTRA1 shRNA慢病毒感染RPE细胞株的效果。设计 实验研究。研究对象 HTRA1 shRNA慢病毒载体和RPE细胞。方法 设计靶向HTRA1 mRNA的寡核苷酸序列,构建HTRA1 shRNA表达质粒,测序鉴定其序列的正确性。通过载体质粒pGC-LV与辅助质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞包装慢病毒,收集病毒上清,测定滴度。将包装好的HTRA1 shRNA慢病毒感染RPE细胞,设阴性对照和空白对照,采用实时PCR（RT-PCR）和蛋白印迹法（Western Blot）方法检测HTRA1基因的mRNA水平和蛋白质表达水平的变化。主要指标  HTRA1基因的mRNA和蛋白质表达量。结果 DNA测序证实HTRA1 shRNA表达质粒包装了正确的RNA干扰序列。慢病毒滴度测定为8×108 TU/ml。HTRA1 shRNA慢病毒感染RPE细胞后,HTRA1基因的mRNA水平和蛋白质表达水平较空白对照组和阴性对照组均明显下降,差异均有统计学意义。结论 成功构建了HTRA1 shRNA的慢病毒表达载体,该shRNA慢病毒能够有效地抑制RPE细胞株HTRA1基因的表达。     

人工晶状体脱位49例临床分析

目的 探讨人工晶状体（IOL）脱位的临床特点。 设计 回顾性病例系列。 研究对象  北京同仁医院2004-2011年治疗的IOL脱位 49例49眼。 方法 对IOL脱位患者的临床资料进行回顾性分析。 主要指标 年龄、原IOL植入原因,发病时间,脱位IOL位置及类型,IOL脱位诱因,手术治疗方法及并发症。 结果  49眼IOL脱位中,老年性白内障和外伤性白内障摘除联合IOL植入术者较多,分别占46.9%、28.6%。6例睫状沟固定IOL脱位均发生于手术1年后。脱位IOL53.1%位于玻璃体腔内。89.8%为C形襻IOL。IOL脱位75.5%由原眼部因素及手术因素引起。47眼（95.9%）实施 了IOL睫状沟缝线固定或再次缝线固定术治疗,术后2周裸眼视力0.1以上者占59.6%。结论   IOL脱位的发生与原眼部因素及手术因素有关。睫状沟缝线固定IOL术是治疗IOL脱位的有效手段,但睫状沟固定的IOL仍会发生脱位。（眼科,2012,21：47-51）     

自体腹水回输在卵巢过度刺激综合征治疗中的应用

自体腹水回输是在无菌密闭系统中将自身腹水引出体外,通过一定装置将其中水、电解质、尿素氮等中小分子物质滤出,而蛋白质等大分子被保留浓缩,回输至人体内的过程。其作为自身白蛋白重利用的一种方式,已较多应用于治疗肝硬化顽固性腹水和癌性腹水患者。卵巢过度刺激综合征（OHSS）主要发生在行促排卵治疗时,以双侧卵巢增大、高雌激素血症、腹水、电解质失衡和少尿为特征,严重者可以出现肝肾功能衰竭、血管栓塞甚至死亡。腹水是中重度患者的常见症状,由于OHSS腹水中不仅含蛋白质、代谢废物,还含有多种激素及炎性因子,直接回输可能会加重病情,因此自体腹水回输目前在OHSS治疗中应用极少。现就自体腹水回输技术在OHSS治疗中的应用作一综述。     

中脑星形胶质细胞源性神经营养因子在视网膜Müller细胞中诱导激活p44/42丝裂原活化蛋白激酶信号通路的实验研究

目的中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)可能对视网膜光感受器细胞和视网膜神经节细胞具有保护性作用。但是其作用机制还不清楚。本研究探索MANF在视网膜上的作用通路，为其在眼科的应用奠定基础。 方法选用Sprague-Dawley雄性大鼠25只，体重0.2~0.25 kg。采用数字表法，随机将大鼠分为未处理组和处理组。其中，未处理组5只，处理组左眼注射重组人MANF10 μg (3 μl)，右眼注射磷酸盐缓冲液(PBS)3 μl，分别于注射后0.5 h、1 h、2 h及4 h四个时间点取材视网膜，每个时间点5只大鼠。新生大鼠视网膜分离培养原代Müller细胞，100ng/ml MANF处理细胞后，在不同时间点收集细胞Western blot检测磷酸化p44/42丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达水平，冰冻切片免疫组化检测MANF诱导活化的磷酸化p44/42MAPK在视网膜上的定位。以Image J图像分析软件分析图像，Western blot条带密度比值和免疫荧光强度为计量资料以( ±s)表示；各时间点与未处理组组间，采用独立样本t检验的方法进行比较。 结果SD大鼠玻璃体腔注射MANF后，磷酸化p44/42MAPK的表达在0.5 h就开始明显升高，1 h达到高峰，较对照玻璃体腔注射PBS组和未处理组差异均具有统计学意义(t＝21.18，4.41；P<0.05)，然后逐渐下降，4 h降至未处理组水平。冰冻切片免疫组化检查结果显示磷酸化p44/42MAPK阳性的细胞位于视网膜内核层的Müller细胞，其荧光强度显著高于阴性未处理组，差异有统计学意义(t＝11.41，P<0.05)。原代培养的Müller细胞经MANF处理后，磷酸化p44/42MAPK在5 min时较未处理组就有显著升高，差异有统计学意义(t＝4.48，6.43；P<0.05)，15 min达到高峰，差异有统计学意义(t＝19.57，9.18；P<0.05)，到30 min降至正常水平。 结论p44/42MAPK信号通路参与了MANF的神经保护作用机制。MANF直接作用于视网膜Müller细胞，可能通过与Müller细胞的相互作用起到细胞保护性作用。     

紫外线-B激光照射对α晶状体蛋白的影响及3-吲哚甲醇对其分子伴侣活性的保护作用

背景 紫外线照射是年龄相关性白内障形成的诱因之一.研究表明,3-吲哚甲醇(I3C)可抑制氧化作用导致的细胞损害及淀粉样纤维变性的形成,氧化损伤及淀粉样纤维变性的形成均与白内障有关,而I3C与α晶状体蛋白活性的关系尚有待证实. 目的 评估紫外线-B激光照射对α晶状体蛋白结构和分子伴侣功能的影响,探讨I3C对α晶状体蛋白分子伴侣功能的保护作用.方法 取新鲜1岁龄牛眼球的晶状体,采用凝胶层析法提纯牛的α晶状体蛋白,并按照快速蛋白液相色谱( FPLC)吸收谱线收集α晶状体蛋白.然后分别以23.75、118.75、475.00、1187.50、2375.00、4750.00、11 875.00和23 750.00mJ/cm2的紫外线-B激光照射在凸透镜后一固定位置的α晶状体蛋白,然后通过改变α晶状体蛋白在凸透镜后的位置达到改变照射能量的目的,使各组照射能量分别为28 535.00、6730.00、3435.00、1910.00、1040.00 mJ/cm2.使用紫外分光光度仪测量紫外线-B激光照射前后α晶状体蛋白的紫外吸收谱线(色氨酸荧光谱).在照射能量为475.00、1187.50、2375.00、4750.00、11 875.00mJ/cm2照射后的α晶状体蛋白溶液中分别加入50μmol/L和100 μmol/L的I3C,并进行过氧化氢酶(CAT)热凝聚实验,判断α晶状体蛋白分子伴侣活性,未加入50 μmol/L和100 μmol/L I3C的α晶状体蛋白溶液进行相同的实验作为对照,采用分光光度仪测量360 nm波长处各组α晶状体蛋白抑制CAT热凝聚的吸光度(A360)值,计算各干预组与对照组A值的百分数作为评价分子伴侣活性的指标. 结果 α晶状体蛋白紫外吸收谱测定发现,紫外线-B激光照射能量为1187.50 mJ/cm2时,α晶状体蛋白A280值降到10％左右,当照射能量达到23.75 J/cm2时,α晶状体蛋白A280值降到2％以下,二者呈负相关(R2=0.925).色氨酸荧光光谱测定表明,紫外线-B激光照射强度与色氨酸荧光强度呈负相关(R2=0.996),而与色氨酸代谢产物N-甲酰犬尿氨酸(N-FK)的荧光强度呈正相关(R2=0.949).CAT热凝聚实验表明,加入50 μmol/L和100μmol/L的I3C后,各强度的激光照射组α晶状体蛋白的相对A360值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000)；α晶状体蛋白分子伴侣功能下降幅度低于对照组,差异有统计学意义(P=0.000).分子伴侣活性随着激光照射能量的增加与不加入I3C的α晶状体蛋白相比降低变慢.结论 紫外线-B激光照射可以造成α晶状体蛋白分子结构的变化及分子伴侣活性的降低,I3C对于α晶状体蛋白分子伴侣活性具有保护作用.     

先天性白内障的基因诊断

先天性白内障是儿童常见的致盲性眼病。与遗传有关的先天性白内障有多种遗传方式，其致病基因、基因突变的位点和引起先天性白内障的表现型相继被发现。到目前为止，分子遗传学的研究证明与先天性白内障有关的致病基因有16个，共有40多个基因位点与先天性白内障有关。先天性白内障的基因型和表现型的关系逐步明确，使先天性白内障的基因诊断，特别是产前诊断成为可能。     

腹壁子宫内膜异位症的诊治

腹壁子宫内膜异位症(AWE)是一种罕见类型的盆腔外子宫内膜异位症,大多继发于剖宫产等盆腹腔手术,少数为自发性。AWE可以引起周期性腹痛、腹壁包块、肿胀出血等不适,发生机制主要有种植、内分泌、免疫、遗传和炎症等学说。超声和磁共振等影像学检查在AWE的早期诊断中具有较高价值,目前皮肤镜在AWE诊断中的应用较少,均匀红色色素沉着、活动性出血、红棕色球状结构等是镜下的典型特征。病灶切除术是AWE的标准治疗方案,包括开腹、腹腔镜(多孔或单孔)、机器人辅助腹腔镜等术式,根据病灶的浸润深度推荐不同入路。新型的高强度聚焦超声、经皮冷冻或微波消融等技术用于AWE保守性治疗的有效性和安全性已得到初步证实,未来值得进一步的探索。AWE的整体复发率低,病灶完全切除是预防复发的关键,术后联合使用激素的预防价值存在争议。关于AWE的管理,国内外尚无明确的专家共识和指南,临床上应做到早发现、早治疗和积极预防。