采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库

目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞（PBMC）,提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区（VH）和Kappa型轻链全长（LCκ）基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库（一级抗体库）。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达。结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×10¹¹[（1.7×10⁶×70%）×（3.1×10⁵×90%）]。成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×10⁵。结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32×10¹¹,二级抗体库库容量达到9×10⁵,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础。     

鱼的摄入与肾癌发病风险关系的Meta分析

目的应用meta分析的方法对各项研究进行系统分析以研究鱼的摄入与肾癌发病风险关系。方法在PubMed,Embase,
CNKI,CA中检索有关鱼及其产品的摄入与肾癌关系的病例对照研究以及队列研究的文献。通过meta分析方法研究鱼的摄入
与肾癌的关系。运用I2检验各项研究的异质性,并使用漏斗图检验发表偏倚。结果共纳入17篇文献,采用随机效应模型合并
分析后的结果未发现鱼的摄入与肾癌的发病风险相关（RR=0.90;95% CI,0.78~1.02）且异质性明显（P=0.003,I2=52.3%）,针对
研究类型、研究地区以及发表时间进行亚组分析,同样没有明显的证据证明两者相关,但在性别亚组的分析中发现,男性增加鱼
的摄入可降低肾癌的发病率,而在女性中则没有关系。结论meta分析结果提示增加鱼的摄入未发现有预防肾癌发病的作用。
     

咖啡摄入与膀胱癌的meta分析

目的：以分析流行病学方法分析咖啡摄入量与膀胱癌关系。方法：采用系统评价方法，对知网、维普、CNKI、万方等数据库进行检索，提取数据进行meta分析。结果：咖啡摄入与膀胱癌风险OR1.335，95％CI1.19~1.48.整合后OR值为0.98,95％CI在0.83~1.15。异质性分析P=0.0008，I2=38.4％。结论：饮用咖啡人员患膀胱癌风险增加，男性饮用咖啡和禁烟饮用咖啡更加容易出现膀胱癌。     

应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库

目的应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库。方法采集登革确诊患者恢复期外周血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库;将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达。结果以1.2μg总RNA为模板,用6套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109。结论以1.2μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库。     

不同药物的膀胱灌注化疗治疗非肌层浸润性膀胱癌的临床效果

目的探讨在保留膀胱术后采取不同的药物进行膀胱灌注化疗对非肌层浸润性膀胱癌的临床效果。方法选择我院2013年1月~2016年1月收治的膀胱肿瘤患者230例,采用经尿道膀胱肿瘤电切术或膀胱部分切除术等保留膀胱手术,病理证实为非肌层浸润性膀胱癌(T1,Ta),术后分为三组,分别采用吡柔比星(Pirarubicin,THP组)(85例),表柔比星(Epirubicin,EPI组)(65例)、丝裂霉素(Mitomycin,MMC组)(80例),进行膀胱内灌注,进一步对比肿瘤复发率以及不良反应。结果三组患者术后2年的肿瘤复发率相比有统计学差异(P0.05)。三组患者用药后的化学性膀胱炎发生率、血尿发生率、尿道狭窄发生率等比较差异无统计学意义(P0.05)。结论对于采用保留膀胱手术治疗的非肌层浸润性膀胱癌患者术后应用THP、EPI膀胱内灌注治疗,能降低术后复发率;应用MMC膀胱灌注,术后复发率较前两者高,但费用低廉,临床上根据病情适当选用。     

经尿道膀胱肿瘤电切术和开放手术治疗膀胱肿瘤的疗效对比

目的 探讨膀胱肿瘤患者接受开放手术、经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)的临床治疗效果.方法 纳入2017年1月-2018年12月汕头市中心医院收治的298例患者,所有患者均被确诊为膀胱肿瘤,其中接受经TURBT的患者有248例,设为研究组;接受开放手术治疗的患者有50例,设为对照组;对比两种手术治疗的临床效果.结果 研...     

应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库

目的应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库。方法采集登革确诊患者恢复期外周
血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链（LCκ）和重链可变区（VH）基因,构建抗体轻链基因
库和抗体重链基因库;将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达。结果以1.2 μg总RNA
为模板,用6 套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为
1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序
列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,
均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109。结论以1.2 μg 总RNA为模板,通过
RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库。