归芪多糖对衰老细胞周期及p53、p16蛋白的影响

目的:研究归芪多糖对衰老的WI-38细胞的细胞周期及p53、p16蛋白表达的影响。方法:采用MTT法,研究不同浓度归芪多糖对WI-38细胞活力的影响,筛选出归芪多糖最佳作用浓度;采用流式细胞术分析细胞周期;Western blot法分析归芪多糖对p53、p16蛋白表达的影响。结果:0.016/mg·m L归芪多糖可明显促进细胞增殖;与衰老组细胞相比,归芪多糖可明显促进衰老细胞进入分裂期(P0.01),并可显著降低衰老模型组细胞p53和p16蛋白的表达。结论:归芪多糖可延缓WI-38细胞的衰老,其作用机制与调控细胞周期,抑制p53-p21和p16-pRb信号通路有关。     

泡球蚴长期保存后生物活性的研究

目的继发性泡球蚴经液氮冻存后传代健康小鼠,观察其体内泡球蚴的生长情况并判定其生物活性,以探讨泡球蚴保种传代的新方法。方法将继发性感染泡球蚴的小鼠,液氮冻存7d后,常规复苏剖取包囊接种健康小鼠,生长两个月后颈椎脱臼处死,剖检并与常规接种方法相比较,从以下方面评价冻存效果:(1)大体观察及测量包囊湿重;(2)普通光学显微镜及透射电子显微镜观察组织学结构及超微结构;(3)检测包囊囊液中总蛋白含量、血清中特异性免疫球蛋白活动状态等免疫学指标;(4)检测血清碱性磷酸酶及囊液中钙离子含量等生化指标。结果液氮低温冻存后泡球蚴所接种试验组小鼠与常规接种组小鼠体内泡球蚴在包囊湿重、包囊组织结构、囊液蛋白及钙离子含量、血清碱性磷酸酶及特异性免疫球蛋白活动状态等方面均无显著差异(P>0.05)。结论液氮冻存后泡球蚴仍具有感染小鼠的能力,且接种后所生长泡球蚴组织与常规接种泡球蚴组织生物活性无显著差异。液氮冻存可以长期保存泡球蚴组织的活性。     

归芪多糖AAP-2A的结构特征研究

目的分离纯化归芪多糖AAP-2A,并对其结构特征进行研究。方法采用水提醇沉法提取归芪多糖(AAP),通过Sevag法脱除蛋白,DEAE-52纤维素柱色谱,葡聚糖凝胶柱色谱纯化等手段,得到1种新的归芪多糖AAP-2A。使用苯酚硫酸法测定了AAP-2A的含糖量,色谱技术检测了多糖紫外及红外性质、相对分子质量、绝对分子质量、分子构象及相对分子质量分布、单糖组成及其摩尔比值等特征。采用甲基化法和NMR法研究了AAP-2A的连接方式、主链和支链结构及分支点特征。结果 AAP-2A总糖量为98.98%,且不含核酸及蛋白质,红外吸收光谱分析表明AAP-2A有明显的多糖特征吸收,AAP-2A的相对分子质量大于6.68×105,绝对分子质量为2.252×106,由鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖组成,其物质的量比依次为1∶2.13∶3.22∶6.18。主链骨架由1,3-α-L-鼠李糖,1,3-β-D-半乳糖,1,3、1,5、1,3,5-α-L-阿拉伯糖和1,4、1,4,6-α-D-葡萄糖组成,侧链分支点位于阿拉伯糖的3位和葡萄糖的4位,侧链分支由1位连接的α-D-葡萄糖组成。结论AAP-2A为一种新的中性归芪杂多糖,其构象呈高度支化状。     

归芪多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究归芪多糖对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将小鼠随机分为正常对照组、CCl4模型组、联苯双脂组、归芪多糖高剂量和低剂量组。除正常对照组外,其余各组均灌胃给药21d后,腹腔注射CCl4,24h后对小鼠血清中ALT和AST、肝组织中MDA和SOD活性以及肝脏指数进行测定,并观察归芪多糖提取物对CCl4致肝损伤的病理组织改变。结果:模型对照组肝组织明显变性、肿胀;归芪多糖提取物能减轻CCl4致肝损伤的病理改变,显著降低CCl4致小鼠血清中ALT、AST及肝组织中MDA含量(P0.01)和肝脏指数(P0.01),提高SOD活性(P0.01)。结论:归芪多糖提取物对小鼠急性肝损伤有明显的降酶保肝作用。     

贯叶连翘提取物抗甲1型流感病毒活性的研究

目的研究贯叶连翘提取物体内外对甲1型流感病毒(IAV)活性的影响。方法以细胞存活率和抑制率为指标,采用MTT比色法检测贯叶连翘提取物体外抑制IAV活性的效应;体内实验以流感病毒滴鼻感染小鼠,分别ig给药,观察小鼠死亡率、生命延长率及小鼠病毒性肺炎的改变,判定其抗流感病毒作用。结果贯叶连翘提取物在体外随药物质量浓度的增加其细胞存活率和病毒抑制率明显升高,与病毒对照组相比均有显著性差异(P0.01);并可降低流感病毒感染小鼠的死亡率,延长存活时间,明显减轻小鼠病毒性肺炎的症状(P0.01)。结论贯叶连翘提取物在体内外均有良好的抗IAV活性的作用。     

青蒿琥酯治疗小鼠继发性棘球蚴病后机体免疫转归及肝脏中部分酶活性的变化

目的对比观察青蒿琥酯(Art)和阿苯达唑(A lb)治疗继发性棘球蚴病后,小鼠的免疫转归及肝功能变化。方法放射免疫标记技术测定小鼠血清中的细胞因子IL-2和IL-4的变化;免疫放射分析法测定小鼠血清中免疫球蛋白IgE的改变来观察Art对小鼠免疫功能的影响;用比色法检测肝脏组织中的MAO和GPT的含量来观察Art对肝功能的影响。结果各用药组与模型对照组比较,小鼠血清IL-2、IL-4及IgE含量有显著性差异(P<0.05),与正常对照组相比无统计学意义;各用药组肝脏组织中MAO及GPT均下降(P<0.01),两Art组和联合组与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05);然而,A lb组与其它各用药组及正常对照组比较,其肝脏组织中MAO与GPT水平有统计学差异(P<0.01),而与模型对照组无统计学差异(P>0.05)。结论青蒿琥酯能提高继发性棘球蚴病小鼠机体的免疫力,并且能显著改善阿苯达唑对小鼠肝功能的损伤。     

重楼皂苷的制备及其抗A型流感病毒活性

目的研究重楼皂苷的制备及体内外对A型流感病毒(IAV)活性的影响。方法 采用柱层析和反相液相色谱分离技术,从重楼中提取重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ,应用高效液相色谱法测定其纯度。采用MTT比色法测定重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ的细胞毒性,并检测其体外对IAV的直接灭活作用、对IAV吸附和侵入细胞的阻断作用及对IAV在靶细胞内增殖的抑制作用。用IAV滴鼻法制备IAV感染小鼠模型,模型制备4 h后分别每天ig给予重楼皂苷Ⅰ5和10 mg.kg-1及阳性对照药奥司他韦3 mg.kg-1,每天分2次给药,连续5 d,自给药后每天观察并记录小鼠发病情况和死亡数,共观察14 d,计算小鼠死亡率和生命延长率,评价其体内抗IAV作用。结果 提取分离得到的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ的纯度分别为95.3%,90.2%,92.4%和86.8%。重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ浓度分别低于50,12.5,6.25和12.5 mg.L-1时,未见对靶细胞MDCK的细胞毒性。重楼皂苷Ⅰ6.25,12.5,25和50 mg.L-1,重楼皂苷Ⅱ6.25和12.5 mg.L-1,重楼皂苷Ⅵ3.13和6.25 mg.L-1,重楼皂苷Ⅶ6.25和12.5 mg.L-1及奥司他韦40 mg.L-1对IAV均有显著的直接灭活作用(P<0.01),对IAV吸附和侵入靶细胞亦具有一定的阻断作用(P<0.01),对IAV在靶细胞内的增殖具有抑制作用(P<0.01)。重楼皂苷Ⅰ5和10 mg.L-1可明显降低IAV感染小鼠的死亡率(P<0.01),由流感病毒感染组的8/10均下降到2/10;并可延长IAV感染小鼠的存活时间(P<0.01),存活时间由(8.5±0.3)d分别延长到12.7±0.4和(13.2±0.5)d(P<0.01),生命延长率分别为49.4%和55.3%,效果与奥司他韦近似。结论 从植物重楼中分离到高纯度的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ,重楼皂苷Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ在体外具有较好的抗IAV活性,重楼皂苷Ⅰ在体内外均具有较好的抗IAV活性。     

归芪多糖对免疫低下小鼠迟发型超敏反应的影响

目的:探讨归芪多糖对免疫低下小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响。方法:将40只昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、归芪多糖高剂量组(100 mg/kg)、归芪多糖低剂量组(50 mg/kg)和阳性药物对照组[黄芪精口服液(1.8 g/kg)],每组8只。除正常对照组外其余各组通过皮下注射环磷酰胺(CY)建立免疫抑制小鼠模型。模型对照组灌服等体积生理盐水,各药物组分别灌服归芪多糖(50 mg/kg和100 mg/kg)和黄芪精口服液(1.8 g/kg),1次/d,连续灌服6天后,除正常对照组外其余各组以二硝基氟苯(DNFB)致敏并加强2天后计算小鼠耳廓肿胀度及脾脏、胸腺指数。结果:100 mg/kg归芪多糖能明显增加免疫抑制小鼠耳廓肿胀度,与阳性对照药物黄芪精口服液相比无显著性差异;且归芪多糖在50～100mg/kg剂量范围内可对抗环磷酰胺所致小鼠脾脏和胸腺的萎缩,增加小鼠免疫脏器指数。结论:归芪多糖可恢复小鼠对外源性过敏原所导致的迟发性超敏反应,且能对抗环磷酰胺引起的脾脏和胸腺的萎缩。     

贯叶连翘提取物对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

目的:观察贯叶连翘提取物对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响。方法:将昆明种小鼠40只随机分为模型对照组、正常对照组、达菲组(10 mg/kg)及贯叶连翘提取物高、低剂量组,每组8只。除正常对照组外,其余各组以流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染小鼠后,分别灌服不同的药物(贯叶连翘提取物高剂量组100 mg/kg、低剂量组50 mg/kg和达菲组3 mg/kg)0.2 m L/次,2次/d,5天后摘眼球放血处死小鼠,摘取胸腺和脾脏并计算胸腺指数和脾脏指数;采用MTT法测定小鼠治疗前后T、B淋巴细胞转化率、巨噬细胞的吞噬功能及NK细胞的杀伤活性。结果:贯叶连翘提取物作用于流感病毒感染小鼠后,胸腺和脾脏指数均有所上升,与模型对照组相比差异有统计学意义(P0.05);高、低贯叶连翘提取物组T、B淋巴细胞转化率、巨噬细胞的吞噬功能及NK细胞的杀伤活性与模型对照组相比上升明显(P0.01)。结论:贯叶连翘提取物对流感病毒感染小鼠机体有一定免疫调节作用。     

贯叶连翘提取物抗甲1型流感病毒活性的研究

目的 研究贯叶连翘提取物体内外对甲1型流感病毒 (IAV) 活性的影响。方法 以细胞存活率和抑制率为指标,采用 MTT 比色法检测贯叶连翘提取物体外抑制 IAV 活性的效应;体内实验以流感病毒滴鼻感染小鼠,分别 ig 给药,观察小鼠死亡率、生命延长率及小鼠病毒性肺炎的改变,判定其抗流感病毒作用。〗结果 贯叶连翘提取物在体外随药物质量浓度的增加其细胞存活率和病毒抑制率明显升高,与病毒对照组相比均有显著性差异 (P＜0.01);并可降低流感病毒感染小鼠的死亡率,延长存活时间,明显减轻小鼠病毒性肺炎的症状 (P＜0.01)。结论 贯叶连翘提取物在体内外均有良好的抗 IAV 活性的作用。