甲氨喋呤对肠黏膜上皮细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨甲氨喋呤对肠黏膜上皮IEC-6细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测细胞增殖效应,TUNEL的流式细胞术分析凋亡细胞,分光光度法检测细胞内Caspase-3活性程度。结果:1)实验组细胞生长抑制率明显高于对照组,且随MTX药物浓度的增加和作用时间的延长而增加。2)0.05、0.5和5μg/mL MTX作用24 h,细胞凋亡率增加。与对照组相比,差异有统计学意义,P<0.01。3)0.05、0.5和5μg/mL MTX作用24 h,Caspase-3活性增加,3组Caspase-3的活性分别是对照组的1.97、3.07和5.01倍。与对照组相比,各浓度药物组Caspase-3活性明显增强(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:甲氨喋呤对IEC-6细胞增殖有抑制作用,并通过诱导Caspase-3活化导致细胞凋亡。     

胆管细胞癌来源的外泌体通过内质网应激破坏血管内皮细胞紧密连接实现转移

目的：探讨胆管细胞癌分泌的外泌体对血管内皮细胞紧密连接的影响及其可能的机制。方法：使用超速离心法分离胆管细胞癌CCLP细胞系外泌体并作用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,Western blot、免疫荧光检测内皮细胞的紧密连接。BALB/c裸鼠随机分为PBS组、exoCCLP组及exoHIBEC组并分别尾静脉注射PBS、exoCCLP或exoHIBEC后尾静脉注射FITC-右旋糖酐或CCLP,收集肺及肝脏观察组织内的FITC-右旋糖酐渗漏或肺组织内的肿瘤转移灶。Western blot及PCR检测CCLP外泌体处理的内皮细胞内质网应激相关基因及蛋白水平。予小干扰RNA抑制血管内皮细胞PERK、ATF6或IRE1α,并进一步接受CCLP外泌体作用,观察紧密连接蛋白变化。结果：①CCLP外泌体在体外明显下调HUVEC的紧密连接蛋白水平,增加血管内皮层体外的通透性,并在体内增加裸鼠肺部及肝脏血管的通透性。②经CCLP外泌体预处理后的裸鼠其肺部的肿瘤转移灶数量明显增加,内皮细胞内质网应激相关的基因及蛋白水平均明显增加,予小干扰RNA下调HUVEC的PERK及IRE1α水平能够逆转CCLP外泌体下调的HUVEC紧密连接蛋白而ATF6的敲低并无此作用。结论：胆管细胞癌来源的外泌体能够抑制血管内皮细胞的紧密连接蛋白并增加血管的通透性,从而实现肿瘤转移。这种作用部分是通过引起血管内皮细胞内质网应激实现的     

放射抗拒性食管癌细胞株KYSE-150R上皮—间质转化特性鉴定

[目的]鉴定放射抗拒性食管癌细胞株KYSE-150R获得上皮—间质转化(EMT)表型。[方法]食管鳞状细胞癌细胞株KYSE-150经分次反复照射、单克隆培养,筛选出具有放射抗拒性细胞株KYSE-150R。克隆形成实验计算细胞存活率,拟合生存曲线并计算放射生物学参数。高倍显微镜下观察细胞形态学变化。采用RT-PCR、Western Blot和免疫荧光检测上皮表型标志物E钙黏蛋白(E-cad)、间质表型标志物波形蛋白(VIM)和转录因子Slug、Snail与Twist的表达。[结果]构建的食管癌细胞株KYSE-150R比其亲本对射线更加抗拒,经传代50代后仍保留放射抗拒性。放射抗拒的食管癌细胞株KYSE-150R发生EMT相符的形态学改变:细胞呈纺锤体状,极性消失。与母株相比,KYSE-150R中E-cad表达下降,VIM、Slug及Snail表达上调,Twist表达未见明显变化。免疫荧光染色证实细胞膜E-cad蛋白的丢失,上调的β-catenin移位至细胞核。[结论]放射抗拒的食管癌细胞株KYSE-150R获得了EMT表型,其与食管癌放射抗拒的形成有关。     

西妥昔单抗对人食管癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R放射敏感性的研究

Objective To determine the effect of cetuximab(C225)on the radioresistant human esophageal squamous carcinoma eell line KYSE-150R.Methods A radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R was established by fractionated irradiation.Morphological changes from KYSE-150 to KYSE-150R were observed by phase-contrast microscopy.Karyotype analysis was performed by G-banding.The radiosensitivities were analyzed by colony formation assays.Results The population doubling time of KYSE-150 and KYSE-150R were(23.6±0.2)h and(25.9±0.6)h (t=6.6,P<0.01),respectively.The chromosome number of KYSE-150R was increased and chromosome aberrations were observed from(69.3±1.9)h to(73.7±1.2)h(t=-8.83,P<0.01).The SF2,D0,Dq and N values of KYSE-150R were all higher than those of KYSE-150.After 5μg/ml of C225 added,the SF2,D0,Dq and N values were significantly decreased as compared to the control.After C225 treatment,the G0/G1 and G2/M phase cells were increased,while S-phase cells decreased(t=-4.478-4.308,P<0.05).Conclusion Cetuximab can enhance the radiosensitivity of radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R.     

三叶肽在胃肠黏膜重建中的作用研究进展

早期胃肠黏膜修复主要通过伤缘残留上皮快速迁移来完成黏膜重建过程.三叶肽家族在维护胃肠道黏膜的完整性和损伤后修复方面起重要作用.迄今,三叶肽在胃肠黏膜重建中所起的作用尚未完全阐明.此文就胃肠黏膜重建和三叶肽在该领域中作用的研究进展作一综述.     

鼻咽癌患者经调强放疗后放射性口干的减少对生活质量的影响

目的 探索鼻咽癌患者调强放疗(IMRT)后口干的减少对生活质量的影响.方法 2002年8月至2008年12月,温州医学院附属第一医院收治鼻咽癌调强放射治疗患者共235例,其中存活2年以上、无复发转移患者91例,在放疗前、放疗结束时、放疗后3、6、9、12、18和24个月分别完成1份8个项目的 口干调查表(XQ)及头面部专用的生活质量调查表(QOL),然后对数据进行统计分析.结果 XQ评分在放疗结束时明显上升,以后随时间推移逐渐下降,在放疗后9个月开始XQ评分改善差异有统计学意义(P=0.024),至18个月时XQ评分几乎恢复至基线水平.QOL总评分放疗结束时比放疗前明显上升(P=0.012),以后随时间推移逐渐下降,至18个月时评分跟结束时相比差异有统计学意义(P=0.020),基本恢复基线水平.子项目沟通能力、进食能力及疼痛总评分在放疗结束时亦明显升高(P＜0.05),而放疗对情绪评分相对影响较小.XQ总评分和QOL总评分在各时间点存在密切相关(r=0.976),XQ评分跟一些子领域的QOL也显著相关,包括沟通能力和进食能力,并患者自我评价总的治疗影响.结论 放射性口干减少能影响总的生活质量评价而改善生活质量.     

初发与复发鼻咽癌组织中磷酸化蛋白芯片的差异表达分析

[目的]分析复发鼻咽癌和初发鼻咽癌的蛋白质磷酸化表达差异,以期为复发鼻咽癌的发生机制提供分子依据。[方法]选择4例复发鼻咽癌患者和4例初发鼻咽癌患者的组织标本,实验室提取总蛋白,应用磷酸化抗体蛋白质芯片与提取蛋白进行杂交,检测两者之间的差异磷酸化位点。通过phosphosite在线网络数据库分析蛋白质磷酸化位点变化及在信号通路中的作用。[结果]复发鼻咽癌和初发鼻咽癌的蛋白质磷酸化表达不同,共筛选出16个差异磷酸化位点,15个差异蛋白,复发鼻咽癌组织中上调蛋白8个,下调蛋白7个。[结论]初发鼻咽癌和复发鼻咽癌组织之间存在蛋白质磷酸化水平差异,可能与鼻咽癌复发机制有关。     

西妥昔单抗对人食管癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R放射敏感性的研究

Objective To determine the effect of cetuximab(C225)on the radioresistant human esophageal squamous carcinoma eell line KYSE-150R.Methods A radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R was established by fractionated irradiation.Morphological changes from KYSE-150 to KYSE-150R were observed by phase-contrast microscopy.Karyotype analysis was performed by G-banding.The radiosensitivities were analyzed by colony formation assays.Results The population doubling time of KYSE-150 and KYSE-150R were(23.6±0.2)h and(25.9±0.6)h (t=6.6,P<0.01),respectively.The chromosome number of KYSE-150R was increased and chromosome aberrations were observed from(69.3±1.9)h to(73.7±1.2)h(t=-8.83,P<0.01).The SF2,D0,Dq and N values of KYSE-150R were all higher than those of KYSE-150.After 5μg/ml of C225 added,the SF2,D0,Dq and N values were significantly decreased as compared to the control.After C225 treatment,the G0/G1 and G2/M phase cells were increased,while S-phase cells decreased(t=-4.478-4.308,P<0.05).Conclusion Cetuximab can enhance the radiosensitivity of radioresistant human esophageal squamous carcinoma cell line KYSE-150R.     

长链非编码RNA linc-STXBP5-1在宫颈癌中的表达及其干预效应分析

目的:检测长链非编码RNA linc-STXBP5-1在宫颈癌组织中的表达及意义,细胞学水平分析其对宫颈癌细胞活力及侵袭力的影响。方法:Real-time PCR检测48例宫颈鳞癌组织、9例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ-Ⅲ、20例CINⅠ和20例正常宫颈组织linc-STXBP5-1的表达水平;分析linc-STXBP5-1在不同病理级别和临床分期宫颈鳞癌中的表达情况;linc-STXBP5-1 siRNA干预HPV16(+)Si Ha宫颈癌细胞后,检测细胞活力;Transwell侵袭实验检测沉默linc-STXBP5-1后Si Ha宫颈癌细胞的侵袭能力;最后检测linc-STXBP5-1在宫颈癌细胞胞浆及胞核的定位表达。结果:宫颈鳞癌及CINⅡ-Ⅲ组织linc-STXBP5-1表达明显高于CINⅠ及正常宫颈组织(P0.05);宫颈鳞癌与CINⅡ-Ⅲ之间以及CINⅠ与正常宫颈组织间linc-STXBP5-1表达差异无统计学显著性;linc-STXBP5-1表达与宫颈癌临床病理分析显示,病理分级属于G3的宫颈鳞癌组织linc-STXBP5-1的表达量明显高于G1、G2组织(P0.05);临床分期中属于Ⅲ和Ⅳ期的宫颈鳞癌组织也明显高于Ⅰ和Ⅱ期(P0.05);linc-STXBP5-1表达水平与不同年龄、肿瘤直径和肿瘤类型未见显著相关性。利用siRNA下调Si Ha宫颈癌细胞linc-STXBP5-1表达后,细胞活力和侵袭能力显著降低;定位表达分析提示linc-STXBP5-1主要表达于宫颈癌细胞的细胞核中,仅有少许表达于细胞浆中。结论:肿瘤组织上调表达的linc-STXBP5-1可作为促癌基因参与宫颈癌的发生发展过程。     

具干细胞特性食管癌耐放射细胞株基因表达分析

[目的]比较具干细胞特性食管癌耐放射细胞株与其亲本基因表达水平的差异。[方法]Agilent 4×44K人全基因组芯片检测具干细胞特性食管癌耐放射细胞株与其亲本细胞,GeneSpring GX 10．0．2数据分析挑选差异表达基因,进一步对差异表达基因进行GO分析和干细胞密切相关的信号通路分析,Real-timePCR验证芯片结果。[结果]两组细胞有明显不同的表达谱,差异表达基因多达2246个（fold change cut-off≥2）。在分子功能中,信号感应激活最高,占75．11％;在生物过程中,细胞进程、生物调节分别占35．94％和25．8％;在细胞组分方面,细胞、胞内区、跨膜区的变化比较显著。ALDH1基因表达发生了改变,其中ALDH1A3最显著。Hedgehog通路,PTCH1下调,而GLI2上调。BMP-TGFβ通路信号转导中．MMP3、MMP9上调．FOXL1、BMP4、TGFB2、TGFB3下调。Notch通路相关信号基因均表现为下调。Wnt通路信号转导变化比较复杂,其中WNT4、WNT8B、DKK2、CTNNB1改变超过2倍。Real-time PCR验证芯片结果可靠．[结论]具干细胞特件的食管痛放射抵抗细朐株与其亲本慕因表达水平有明显差异．