小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究

目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞～囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0～38.7个(P＜0.01),体外受精率为70.2%～92.8%(P＜0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%～95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%～91.1%,桑椹胚发育率为40.6%～87.5%,囊胚发育率为5.1%～75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.     

不同剂量孕马血清促性腺激素(PMSG)对未成年大鼠超数排卵效果与质量的影响

目的：建立SD大鼠的有效超数排卵程序，为大鼠胚胎生物工程相关技术的研究提供参考。方法：分别用10、20、30、40、50IU的孕马血清促性腺激素/人绒毛膜促性腺激素（PMSG／hCG）对4～5周龄、6～7周龄、8～9周龄SD大鼠进行超数排卵，比较超排效果，并将超排处理后体内受精的2-细胞胚胎移植给受体雌鼠，观察妊娠产仔情况。结果：4～5周龄组SD大鼠在激素剂量为20IU／只时，平均超排卵54．6枚，明显高于其他组合；6～7周龄组在激素剂量为40IU／只时超排卵数最多，为32．7枚，但与30IU和50IU剂量组差异不显著；8～9周龄组超排效果最差，平均超排卵20枚左右。超排处理的2-细胞胚胎移植给代孕鼠后，妊娠率为63．3％，与对照组（60％）差异不显著。结论：SD大鼠的超排效果随着年龄增长而下降，4～5周龄雌鼠超排效果最好，其中激素剂量为20IU／只时超排卵数最多，且超排的卵子质量正常，受精后可以完成全程发育。     

大鼠精子冷冻技术研究进展

精子冷冻是一种经济高效的基因资源保存方法，许多哺乳动物精子冷冻保存技术已经建立，并获得广泛应用。而大鼠精子因为其结构的特殊性，目前仍未建立成熟的冷冻保存技术。本文就国内外大鼠精子冷冻的研究现状作一简要综述。     

不同冷冻保护剂用于C57BL／6J小鼠精子冷冻的比较研究

目的 通过对不同冷冻保护剂用于C57BL/6J小鼠精子冷冻后冻融精子体外受精率的比较,建立一套更适合C57BL/6J小鼠精子冷冻的方法.方法 以R18S3为基础液添加不同体积浓度的卵黄和甘油作为冷冻保护剂对C57BL/6J和Y3F小鼠精子进行冷冻,并采用同种方法复苏精子,以体外受精率来评价精子冷冻的效果.结果 以R18S3为基础液分别添加体积浓度为5%、10%、15%、20%、25%卵黄离心后获得的上清液作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为18.7%、15.6%、36.0%、40.0%、29.7%,差异显着( P<0.05); 以R18S3为基础液分别添加体积浓度为1%、2%、3%、4%、5%、6%的甘油作为冷冻保护剂, C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为7.8%、10.0%、16.9%、6.0%、10.3%、18.1%,差异显著( P<0.05); 以R18S3+5%卵黄离心后获得的上清液+6%甘油、R18S3+15%卵黄离心后获得的上清液+2%甘油、R18S3+20 %卵黄离心后获得的上清液+1%甘油作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为: 16.7%、36.0%、22.9%,差异显著(P<0.05); 以R18S3作为冷冻保护剂,C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率为25%,异常卵裂率为2.6%.Y3F小鼠冻融精子体外受精率为52.2%,异常卵裂率为 5.1%.结论 以R18S3为基础液添加15%或20%的卵黄离心后获得的上清液可以有效提高C57BL/ 6J小鼠冻融精子的体外受精率但添加不同浓度的甘油却降低C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率.添加卵黄和甘油冷冻效果不如卵黄但好于甘油.     

卵泡发育及其控制

本文扼要介绍哺乳动物卵泡发育规律，重点讨论卵泡发育的调控机理，如卵泡的募集与选择，卵巢卵泡分级体系建立的机制，生长因子和细胞因子对卵泡发育的影响等。     

C57BL/6J小鼠冻融胚胎移植后所得小鼠及其子代生物学特性数据测定与分析

目的探讨C57BL/6J(B6)小鼠冷冻复苏胚胎移植后所得小鼠及其子代的平均体增长和血液生化等部分生物学特性数据的变化。方法实验分为3组。实验组Ⅰ:冻融胚移植组,B6小鼠体外受精后的2-cell胚胎采用EFS法冷冻,复苏后移植到受体(ICR小鼠)输卵管内所产的小鼠(雄鼠30只,雌鼠20只);实验组Ⅱ:冻融胚胎移植所产的小鼠成熟后经自然交配得到的子一代(雄鼠26只,雌鼠17只);对照组:正常饲养和自然交配所得的子代(雌雄小鼠各20只)。3组小鼠饲养至16周龄,每周定时测定体质量,至16周龄时采血,测定各组小鼠血清生化值,并进行分析比较。结果实验组Ⅰ雌雄小鼠初生重和1~16周的平均体重均显著高于对照组(P0.01),实验组Ⅱ雌鼠体重从12周开始均显著高于对照组(P0.01),而雄鼠只有部分周龄与对照组有差异,其余周龄则差异无显著性;实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠的血清生化值与对照组相比除AST、TP和Ca等项目无变化外,其余项目均发生了显著或极显著的上调或下调。结论冷冻对胚胎移植所得小鼠及其自然繁殖子一代的平均体增长和血清生化值有一定影响。     

IVF-20培养液用于大鼠体外受精的实验研究

目的调查分析小鼠嗜肺巴氏杆菌感染情况。方法对某实验动物设施的空气、排风口、门把手、小鼠咽、饮水、饲料、垫料、粪便采样,进行嗜肺巴氏杆菌检测。结果所采集的201份样品,经细菌分离培养和菌落形态、革兰氏染色、生化试验、血清玻片凝集试验的进一步鉴定,从小鼠咽、饮水、饲料中检出了嗜肺巴氏杆菌。结论该设施饲养的小鼠携带嗜肺巴氏杆菌,饮水和饲料也有嗜肺巴氏杆菌污染,该污染可能与动物饲养密度过高有关。     

小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌快速检测方法的建立

目的建立实验动物冷冻资源(胚胎、精子等)常见病原菌的微量、快速监测方法。方法以实验动物三个常见病原菌(金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和乙型溶血性链球菌)为研究对象,分别提取三个阳性菌株的DNA,通过引物设计和相应PCR条件的优化,建立三种阳性菌株的PCR检测方法。然后提取冷冻资源(胚胎、精子等)中的DNA,按照三个阳性菌的PCR条件进行检测,并将一部分样品DNA用荧光定量PCR方法进行检测。结果 1成功建立三个阳性菌株的PCR检测方法。三种病原菌的最低检测浓度,金黄色葡萄球菌为4.19×10~(-5)ng/μL,肺炎克雷伯氏菌为1.98×10~(-5)ng/μL,乙型溶血性链球菌为1.07×10~(-3)ng/μL.2通过普通PCR和荧光定量PCR方法均未检测出样品中三种阳性菌的存在。结论建立了小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌微量、快速检测方法。     

移植部位对小鼠睾丸移植效果的影响

目的 比较不同的移植部位对睾丸移植效果的影响，以探索建立疾病模型小鼠安全保存的新方法。方法 按移植部位的不同分为3组：背部皮下组，睾丸白膜内组和肾包膜下组。移植后处死受体鼠回收移植物。测试和分析受体精囊的重量，移植物存活率，回收物增重的倍数和生殖细胞的分化情况。结果 不同实验组移植睾丸的生殖细胞分化差异显著。睾丸白膜内组的分化情况最好与假移植对照组相似；背部皮下移植组睾丸的分化率为29.2%；肾包膜下组未见分化。结论 睾丸白膜内移植最利于精子的发生；背部皮下移植是睾丸移植的次优选择；肾包膜下睾丸移植不适合用于小鼠雄性生殖器官的安全保存。     

SD大鼠胞质内单精注射技术方法的建立

目的 建立SD大鼠胞质内单精注射操作程序.方法 和结果实验1:用直径为7～10 μm和2～4 μm的注射针以及相应的注射方法进行大鼠ICSI,ICSI后卵母细胞存活率(30.5% vs.61.3%)和卵裂率(12.5% vs.51.1%)均差异显著(P<0.05);实验2:分别在hCG后14 h、16 h和18 h取卵进行ICSI,三组存活率(77.4%、74.1% vs.69.6%)差异不显著(P>0.05);14 h和16 h组的卵裂率(60.8%、56.0% vs.31.3%)与18 h组差异显著(P<0.05);实验3:用不同的显微操作液H-mR1CM和H-mKRB进行大鼠ICSI,结果卵存活率相近(79.2% vs.75.9%),卵裂率(70.5% vs.74.7%)差异不显著(P>0.05),但8-细胞发育率(43.5% vs.61.9%)差异显著(P<0.05),囊胚发育率差异极显著(P<0.01).结论 大鼠ICSI时在注射hCG后14～16 h取卵最佳,采用2～4 μm直径的注射针、H-mKRB作为操作液更有利于卵的发育.