结直肠癌组织ATF3及其靶基因Cyclin D1与Maspin表达的临床意义分析

目的:检测转录激活因子3 (ATF3)及其靶基因Cyclin D1与Maspin在结直肠癌组织芯片中的表达,探讨ATF3表达在结直肠癌发生、发展中的意义.方法:构建含结直肠癌及癌旁相对正常肠黏膜的组织芯片,应用免疫组织化学检测ATF3、Cyclin D1及Maspin的表达情况.结果:ATF3、Cyclin D1与Maspin在结直肠癌中阳性表达率分别为70.3％、51.4％和59.5％,明显高于癌旁正常组织的21.6％、2.7％和13.5％,差异有统计学意义,x2值分别为35.252、44.411和33.689,P值均为0.000;ATF3与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关,而与浸润程度和淋巴结有无转移有关,浆膜层表达(83.3％)高于肌层(38.9％),有淋巴结转移(92.3％)高于无淋巴结转移(45.7％),x2值分别为13.290和17.110,P值均为0.000; Cyclin D1与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤大小无关,而与病理学分级、浸润程度和淋巴结有无转移有关,低分化组织表达(71.4％)高于高中分化组织(39.1％),浆膜层表达(61.1％)高于肌层(28.8％),有淋巴结转移(69.2％)高于无淋巴结转移(31.4％),x2值分别为7.268、6.019和10.550,P值分别为0.007、0.014和0.001;Maspin与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移均无关,P值均＞0.05.ATF3、Cyclin D1与Maspin在结直肠癌中均高表达,ATF3与Cyclin D1在结直肠癌中表达呈正相关(r=0.362,P=0.000),与Maspin表达无明显相关(r=0.075,P=0.513).结论:ATF3表达与结直肠癌的发生密切相关,ATF3可能通过调控Cyclin D1表达而促进结直肠癌的发生发展及侵袭转移.     

APE1在肝细胞癌组织芯片的表达及临床病理意义

目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)基因在原发性肝细胞癌(HCC)的表达及其与临床病理变化的关系.方法 应用免疫组织化学方法,检测包含HCC及转移灶、癌旁肝硬化组织、癌旁慢性肝炎组织和正常肝组织的组织芯片中APE1的表达情况,结合临床病理资料进行统计分析.结果 APE1在癌旁肝硬化组织、癌旁慢性肝炎组织和正常肝组织以细胞核表达为主,在HCC和转移灶组织以细胞质细胞核联合表达为主(P＜0.01).细胞质与细胞核染色强度均与HCC分级和转移密切相关(P＜0.01),细胞质染色强度还与肿瘤包膜有无浸润有关(P＜0.01).结论 APE1蛋白表达与HCC恶性表型有关,APE1蛋白过表达及细胞质表达的出现可能成为HCC预后不良的指标之一.     

利用组织芯片研究COX-2和mPGES-1在肝细胞癌中的表达及意义

目的：检测COX-2和mPGES-1在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的意义.方法：构建含HCC、癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化和图像分析技术检测COX-2和mPGES-1蛋白的相对表达量,进行半定量分析.结果：COX-2和mPGES-1在HCC中表达均高于正常肝组织（P＜0.01）,随着病理学分级的升高,COX-2相对表达量明显下降（P＜0.01）,但mPGES-1表达量逐渐增高,包膜侵犯组中mPGES-1表达量高于包膜无侵犯组（P＜0.01）,转移组高于无转移组（P＜0.01）.在HCC组织中,COX-2与mPGES-1的表达无明显相关（r=-0.13,P＞0.05）.结论：COX-2和mPGES-1与HCC的发生密切相关,mPGES-1可能在HCC进展期发挥重要作用,选择性抑制mPGES-1有可能成为治疗HCC新的靶点.     

KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9表达与肝细胞癌侵袭转移的关系及意义

目的 检测肿瘤转移抑制基因KiSS-1及其配体KiSS-1R和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨KiSS-1表达与肝细胞癌侵袭转移的关系及其机制.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测HCC、癌旁肝组织及远癌肝组织中KiSS-1、KiSS-1R mRNA的表达情况;应用HCC组织芯片,结合免疫组化及彩色图像分析技术检测了KiSS-1、MMP-9蛋白在HCC芯片中各组织的相对表达量.结果 KiSS-1 mRNA在HCC中表达明显低于癌旁、远癌肝组织(P＜0.01).在转移组和临床Ⅲ期HCC中,KiSS-1蛋白的表达明显低于无转移及临床分期Ⅰ和Ⅱ期HCC(P＜0.01);KiSS-1在肝内转移灶中的表达量显著低于原发灶(P＜0.01).在转移组的HCC中,MMP-9表达量显著高于无转移的HCC(P＜0.01).在HCC组织中,KiSS-1和MMP-9的表达呈负相关性(r=-0.340,P＜0.01).结论 KiSS-1和MMP-9的表达失衡与HCC侵袭转移有关,KiSS-1的缺失表达可作为预测HCC转移潜能的有价值的参考指标.

Abstract：

Objective To detect the expression of KiSS-1, KiSS-1R and MMP-9 in hepatocellular carcinoma (HCC). To study the correlation of KiSS-1, KiSS-1R and MMP-9 expression with invasion and metastasis of HCC, and to explore the underlying mechanisms. Methods The expression of KiSS-1 , KiSS-1R mRNA in 33 HCC samples, 26 non-neoplastic adjacent liver tissue samples and 13 non-neoplastic distant liver tissue samples were detected by RT-PCR. Tissue chips were constructed by modified manual tools, which contained HCC, non-neoplastic adjacent liver tissues, non-neoplastic distant liver tissues, normal liver tissues and intrahepatic metastasis lesions. The expression of KiSS-1 and MMP-9 protein was determined by tissue chips, immunohistochemistry and semi-quantitative image analysis in 150 HCC, 137 non-neoplastic adjacent liver tissue, 98 non-neoplastic distant liver tissues, 16 normal liver tissues and 37 intrahepatic metastasis lesion samples. Results The results of RT-PCR showed that compared with the non-neoplastic adjacent liver tissues and the non-neoplastic distant liver tissues, the expression of KiSS-1 mRNA in HCC was significantly lower (P＜0.01). The expression of KiSS-1R mRNA did not changed in HCC and non-neoplastic liver tissues (P＞0.05). The expression of KiSS-1 protein was lower in HCC with metastasis and in clinical stage Ⅲ than that in those with non-metastasis, and in clinical stages Ⅰ and Ⅱ . It was also higher in the primary than in the metastasis lesions (P＜0.01, respectively). The expression of MMP-9 was higher in tumors having peplos invasion and metastasis than in those with negative peplos invasion and non-metastasis. It was lower in the primary than the metastasis lesions (P＜0. 01, respectively).Negative correlation between KiSS-1 and MMP-9 expression was found in HCC(r=- 0.340,P＜0.01). Conclusions The imbalance between KiSS-1 and MMP-9 expression might play an important role in enhancing the invasive and metastatic capacity of HCC. Loss of KiSS-1 expression might predict an aggressive clinical behavior and was associated with metastatic potential in HCC.     

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1在肝细胞癌中的表达及其意义

肝癌(HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,其癌变是一个多步骤的渐进过程.脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE)1,可修复损伤的DNA.APE1又名氧化还原因子1(Ref-1),可调节许多转录因子的DNA结合活性.我们采用免疫组织化学及原位杂交方法检测APE1在HCC中的表达情况,旨在探讨APE1基因表达在HCC的发生及恶性转化中的作用与地位.     

肝细胞癌组织芯片环氧合酶-2表达的半定量图像分析

目的 分析环氧合酶-2(COX-2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及意义. 方法 应用改良的手工制备组织芯片方法制备含150例肝细胞癌、92例癌旁肝硬化、45例癌旁慢性肝炎以及37例肝内转移灶和13例正常肝组织的组织芯片,结合免疫组织化学染色和图像分析技术检测COX-2蛋白的相对表达量. 结果 COX-2蛋白在HCC表达显著低于癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎(P<0.01),但高于正常肝组织(P<0.05),差别具有统计学意义.在HCC组织中,低分化HCC的COX-2表达量显著低于高分化的HCC,差别有统计学意义(P<0.01).COX-2蛋白的表达与性别、肿瘤大小、组织学类型、包膜侵犯及转移均无关(P>0.05). 结论 COX-2在HCC的发生中发挥重要作用,并与HCC的分化程度密切相关,但与HCC进展及侵袭转移关系不大.     

APEX1单核苷酸多态性与肝癌易感性关系的研究

目的 探讨中国福建人群APEX1单核苷酸多态性(SNP)与肝细胞癌(HCC)易感性的关系. 方法 应用连接酶检测反应(LDR)及直接测序法检测APEX1 rs2307486、rs1130409及rs33956927 3个SNP位点,并进行连锁不平衡及单倍型分析,探讨3个SNP在福建HCC人群中的分布情况,并分析其与该人群HCC易感性的关系. 结果 相对于GG基因型,rs33956927位点的GA基因型增加了患HCC的风险(P=0.002),而rs2307486和rs1130409多态性与HCC易感性无关(P＞0.05). 结论 APEX1 rs33956927多态位点携带GA基因型人群可能对HCC更易感,APEX1 rs33956927多态性可作为筛查HCC好发的危险因素;rs2307486和rs1130409多态性与HCC的发生无关.     

KiSS-1与肝癌细胞增殖及黏附和侵袭关系的体外实验研究

目的 观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响,为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础.方法 培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H,瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组,转染空载体pcDNA3.1/HisC的细胞为空白对照组,未转染细胞为阴性对照组,采用流式细胞术与四甲基偶氮唑盐法、基质黏附实验、Transwell体外侵袭和趋化运动实验检测KiSS-1表达对MHCC97-H细胞体外增殖、黏附、侵袭和运动能力的影响.应用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,组间差异以两样本t检验分析. 结果 转染组、空载体组和未转染组与Matrigel基质的黏附能力(A值)分别为0.257±0.029、0.374±0.016和0.394±0.031,转染组明显低于空载体组(t=-7.90345,P＜0.01)和未转染组(t=-7.22752,P＜0.01);与Fibronectin基质的黏附能力(A值)分别为0.292±0.004、0.394±0.010和0.412±0.023,转染组明显低于空载体组(t=-20.93138,P＜0.01)和未转染组(t=-11.31371,P＜0.01);趋化运动至Transwell小室下室表面的细胞数分别为65.80±1.92、93.80±2.28和96.40±2.07,转染组明显低于空载体组(t=-30.11750,P＜ 0.01)和未转染组(t=-24.19142,P＜0.01);侵袭至Transwell小室下室表面的细胞数为42.40±1.14、66.00±1.58和67.80±1.92,转染组明显低于空载体组(t=-27.0711,P＜0.01)和未转染组(t=-25.4,P＜0.01).而转染组、空载体组和未转染组的细胞增殖能力(A值)分别为0.644±0.027、0.669±0.022和0.678±0.027,转染组略低于空载体组(t=-1.60371,P＞0.05)和未转染组(t=-1.97828,P＞0.05);同时,转染组较空载体组和未转染组未出现明显的G1期阻滞和S期阻滞,也未出现明显的凋亡峰.结论 KiSS-1表达虽不影响肝癌细胞的体外增殖能力,但可抑制其黏附、侵袭和运动能力,提示KiSS-1可作为一个候选的肝细胞癌转移抑制基因,可望成为肝癌侵袭转移治疗的新靶点.     

生存素、p27和PTEN在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨生存素蛋白、生存素mRNA、p27蛋白、p27 mRNA和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)蛋白在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义.方法 自制组织芯片,采用免疫组织化学和原位杂交法检测生存素蛋白、p27蛋白、PTEN蛋白和生存素mRNA、p27 mRNA在141份肝细胞癌、128份癌旁肝组织、97份远癌肝组织及17份正常肝组织中的表达,探讨各指标的关系并建立预测肝癌发生的模型.结果 肝癌组中生存素蛋白(Ridit值的95%CI为0.689±0.048,P《0.01)、生存素mRNA(Ridit值的95% CI为0.690±0.049,P《0.01)和p27蛋白(Ridit值的95% CI为0.556±0.053,P《0.05)表达明显增高,PTEN(Ridit值的95% CI为0.282±0.048)表达明显下降(P《0.01);肝癌中生存素的表达与p27、PTEN表达均显著相关;生存素mRNA、p27蛋白和PTEN蛋白对判断肝癌发生与否有重要意义.结论 生存素mRNA、p27蛋白的表达上调和PTEN蛋白的表达下调可作为判断肝癌发生的有价值指标.