HCV NS4B表达载体的构建及其对细胞凋亡的影响

目的构建丙型肝炎病毒（HCV）2a 型非结构蛋白4B（NS4B）的真核表达载体，并观察其对骨肉瘤细胞U2OS凋亡的影响。方法以质粒PJFH1为模板，通过PCR反应扩增4 目的基因片段，采用同源重组法与PCMV-tag2b 载体相连，转化大肠杆菌感受态DH5α，筛选正确的克隆。以脂质体为介导转染U2OS 细胞，通过Western blot 检测NS4B蛋白的表达，免疫荧光检测细胞的凋亡。结果构建pCMV-tag2b-NS4B 重组质粒，经测序其与NCBI 公布的序列完全一致，并可在U2OS 细胞中表达，DAPI 检测显示细胞凋亡率为（17.25±2.5）%，对照组凋亡率为（6.53±2.36）%。结论成功构建NS4B 的真核表达载体，并可在U2OS 细胞中表达，诱导细胞凋亡。