大鼠骨髓间充质干细胞转染人TH基因的实验研究

目的评价酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因修饰骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)后TH的表达情况及转染TH基因对MSCs的影响.方法构建含人TH基因的pCMV/hTH质粒,用脂质体转染原代培养的大鼠MSCs;Western blot及免疫细胞化学染色鉴定TH基因的表达及MSCs的分化情况;MTT比色法测定转染后的MSCs细胞活性,并与未转染的MSCs进行细胞活性比较.结果构建的pCMV/hTH质粒经ECoRI酶切后产生1.9okb和5.3kb的片段,与回收的目的基因及载体基因片段大小相符;转基因后的MSCs Western blot及免疫细胞化学染色显示TH染色阳性;转染后MSCs未见有NeuN,GFAP的表达;MTT比色法测定细胞活性,未转染与转染者差异无显著性.结论构建的TH基因能在体外培养的鼠MSCs中较好的表达,转染不会诱导MSCs向神经样细胞分化,对MSCs细胞活性无明显影响.     

转基因小鼠中bcl-xl基因的过表达在小鼠大脑中动脉栓塞中的保护作用

目的观察bcl-xl基因的过表达对小鼠大脑中动脉栓塞的保护作用,探讨其作用机制。方法通过建立bclxl转基因小鼠,经传代及检测后证实,该转基因小鼠中存在着bclxl基因的过表达,然后将该模型小鼠与同种系野生型小鼠同时行线栓永久性阻塞大脑中动脉,在缺血24h时测其神经功能评分,观察转基因小鼠与野生型小鼠的差别。在缺血后不同时间点测其梗死体积,观察梗死体积的动态变化。用TUNEL法观察小鼠的脑组织缺血后不同时间点再灌注时凋亡细胞的数量和分布情况。用免疫组化方法观察梗死前后两种小鼠脑组织中bcl-xl的表达量的差异。结果缺血24h后转基因小鼠的神经功能评分低于野生型小鼠(P<0.05)。缺血后3、24、72h,转基因小鼠的梗死体积均明显低于野生型小鼠,差异有显著性意义。TUNEL显示在缺血再灌注后的不同时间点,转基因小鼠皮质缺血区内的凋亡细胞数明显少于野生型小鼠,差异有显著性意义。免疫组化结果显示,梗死前后转基因小鼠的皮质细胞bclxl的表达量均明显高于野生型小鼠(P<0.05),且梗死后两种小鼠体内的bclxl的表达量均较梗死前增加(P<0.05)。结论在规范化的标准条件下,转基因小鼠中bclxl基因的过表达能够降低脑梗死的体积并改善小鼠的神经功能;过表达bclxl基因的这种效应可能是通过抑制细胞凋亡而实现的。     

小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的稳定性与可重复性

背景目前,转基因小鼠越来越多地在脑血管病研究中应用,小鼠的脑缺血再灌注模型是进行该项研究的一种重要模型,因此对该小鼠模型的稳定性和可重复性研究也变得非常必要. 目的建立重复性强,稳定性好的小鼠大脑中动脉脑缺血模型,为以后对转基因小鼠的研究做好技术准备. 设计采用配对两组比较的研究方法. 地点和材料实验在华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所进行,选用 BALB/c和昆明白两种小鼠(均购自同济医科大学动物房) , 5～ 0及 6～ 0两种规格的尼龙丝线,在不同条件下进行试验. 干预选择 BALB/c和昆明白两种小鼠进行栓塞试验,观察小鼠品系、体质量、线栓规格及术后温度对梗死结果的影响. 主要观察指标小鼠的梗死体积及神经功能评分. 结果昆明白小鼠的平均梗死体积为 (12± 4)mm3, BALB/c小鼠的平均梗死体积为 (22± 3 )mm3,两者比较差异有显著性意义( t=16.425,P< 0.01). BALB/c小鼠的神经功能评分与昆明白小鼠比较差异有显著性意义( t=2.005,P< 0.05). 17～ 22 g小鼠匹配 6～ 0的线栓组较 30～ 35 g 的小鼠匹配 6～ 0线栓组梗死体积所占百分比较大( t=14.070 , P< 0.01),神经功能评分也高于后者( t=3.714, P< 0.05). 结论小鼠品系、小鼠体质量与线栓规格是否匹配、术后温度是否保持恒定均影响小鼠线栓模型的稳定性.必须严格控制上述各种因素以建立稳定的小鼠局灶性脑缺血模型,为脑科学研究提供可靠的技术支持.     

用显微注射法建立转bcl—x1基因小鼠

建立转bcl-x1基因小鼠，继而传代建系，用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法，将人bcl-x1基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠,然后作PCR，Southern-blot,mRNA,Western-blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵1654枚，移植卵数1448枚，受体鼠49只，怀孕鼠7只，子代鼠13只，整合数4只并均有表达，植入受精卵的存活率83％，受精卵的总存活率0．78％，移植鼠的怀孕率14．3％，整合效率30．7％，总有效率为0．24％。初步获得了转bcl-x1基因小鼠。     

小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的稳定性与可重复性

背景：目前，转基因小鼠越来越多地在脑血管病研究中应用，小鼠的脑缺血再灌注模型是进行该项研究的一种重要模型，因此对该小鼠模型的稳定性和可重复性研究也变得非常必要。目的：建立重复性强，稳定性好的小鼠大脑中动脉脑缺血模型，为以后对转基因小鼠的研究做好技术准备。设计：采用配对两组比较的研究方法。地点和材料：实验在华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所进行，选用BALB／c和昆明白两种小鼠(均购自同济医科大学动物房)，5～0及6～0两种规格的尼龙丝线，在不同条件下进行试验。干预：选择BALB／c和昆明白两种小鼠进行栓塞试验，观察小鼠品系、体质量、线栓规格及术后温度对梗死结果的影响、主要观察指标：小鼠的梗死体积及神经功能评分。结果：昆明白小鼠的平均梗死体积为(12&;#177;4)mm^3，BALB／c小鼠的平均梗死体积为(22&;#177;3)mm^3，两者比较差异有显著性意义(t=16．425，P&;lt;0．01)。BALB／c小鼠的神经功能评分与昆明白小鼠比较差异有显著性意义(t=2．005，P&;lt;0．05)。17～22g小鼠匹配6～0的线栓组较30～35g的小鼠匹配6～0线栓组梗死体积所占百分比较大(t=14．070，P&;lt;0．01)，神经功能评分也高于后者(t=3．714，P&;lt;0.05）。结论：小鼠品系、小鼠体质量与线栓规格是否匹配、术后温度是否保持恒定均影响小鼠线栓模型的稳定性。必须严格控制上述各种因素以建立稳定的小鼠局灶性脑缺血模型，为脑科学研究提供可靠的技术支持。     

小鼠卵母细胞电激活的实验研究

目的寻找用电激活方法作小鼠体细胞克隆的适宜卵龄的卵母细胞及电激活参数。方法在0．6kV／cm、80us、2个电脉冲（2p）下，比较了注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）后13、16、19、22h卵母细胞的激活率、碎裂＋死亡率。在上述相同电脉冲下，统计了经体外培养（IVC）和新鲜的卵龄为16、19、22h的卵母细胞的激活率，碎裂＋死亡率；比较了场强分别为0．6、0．9、1．2、1．5、1．8kV／cm，电压时程分别为10、20、40、80、100、150、200 us，2P对注射HCG后16h卵母细胞的电激活效果。结果注射HCG后16、19h卵母细胞电激活率较高，分别为63．6％和76．7％，经体外培养后激活率下降，碎裂＋死亡率明显增加。在0．9kV／cm、80／100us，2P时激活率达70％～80％。在1．2kV／cm、40／80／100us、2P时，激活率达到了80％左右，碎裂＋死亡率低于16％。结论注射HCG后16h的卵母细胞为适宜的小鼠核移植的受体细胞。0．9kV／cm、80／100us，2P及1．2kV／cm、40／80／100us、2P为适宜的电激活参数。     

Protective Effects of Overexpression of bcl-xl Gene on Local Cerebral Infarction in Transgenic Mice Undergoing Permanent Occlusion of Middle Cerebral Artery

In order to investigate the protective effects of the overexpression of bcl-xl gene on local cerebral infarction in the transgenic mice subject to permanent occlusion of middle cerebral artery, the models of bcl-xl transgenic mice were established and subjected to cerebral infarction by intraluminal occlusion of the middle cerebral artery. The infarct volume and the neurological scores were observed and comparison between the wild type mice and the transgenic mice was made. It was found that the infarct volume and the neurological scores in the transgenic mice were significantly decreased as compared with those in the wild type mice. It was suggested that the overexpression of bcl-xl gene in transgenic mice could reduce the infarct volume and improve the neurological function of the mice.     

用显微注射法建立转bcl-x1基因小鼠

建立转bcl-x1基因小鼠,继而传代建系,用于缺血性脑血管疾病的研究.采用显微注射法,将人bcl-x1基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠,然后作PCR,Southern-blot,mRNA,Western-blot检测以获得阳性鼠.实验中注射受精卵l 654枚,移植卵数1 448枚,受体鼠49只,怀孕鼠7只,子代鼠13只,整合数4只并均有表达,植入受精卵的存活率83%,受精卵的总存活率0.78%,移植鼠的怀孕率14.3%,整合效率30.7%,总有效率为0.24%.初步获得了转bcl-x1基因小鼠.     

用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠

建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl xl基因小鼠     

人bcl-xl转基因小鼠外源基因的复制及传代的稳定性观察

显微注射法建立转bcl-xl基因小鼠，将PCR及Southern-blot检测阳性的小鼠与正常鼠酱并传代，然后检测子代中外源基因的遗传 情况。结果发现：10号小鼠传代过程中PCR阳性率保持稳定，符合孟德尔遗传规律，外源基因能够稳定遗传 。6号小鼠PCR阳性率呈轻微下降趋势，但能够保持相对稳定遗传 。13号和5号小鼠PCR阳性率均呈现明显的下降趋势。该二小鼠存在外源基因遗传丢失现象。结果提示：获得了能够稳定遗传 的转基因鼠系。