环孢素A对小鼠体内调节性T淋巴细胞的作用及机制

目的 探讨环孢素A(CsA)对小鼠体内CD4+Foxp3+调节性T淋巴细胞的作用及机制.方法 选择雄性C57BL/6小鼠20只,随机平均分为两组.实验组小鼠腹腔注射环孢素A20 mg·kg-1·d-1×2周;对照组小鼠腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)×2周.2周后,两组小鼠在无菌条件下经眼球采集外周血,并分离脾脏和胸腺,制备单细胞悬液.采用流式细胞仪检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中的CD4+Foxp3+T淋巴细胞的比例.结果 实验组小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中CD4+Foxp3+T淋巴细胞的比例分别为(0.581±0.089)%、(2.189±0.046)%和(0.472±0.049)%,对照组的比例分别为(1.751±0.227)%、(3.684±0.169)%和(1.412±0.188)%,两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.001).结论 CsA可以损害小鼠体内调节性T淋巴细胞的发育,从而减少调节性T淋巴细胞的数量.     

他克莫司对全血细胞因子分泌的影响

目的研究免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)在体外对全血细胞因子分泌的影响。方法健康志愿者全血加入不同浓度FK506,经佛波酯(PMA)和离子霉素(IONO)刺激后,用Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF以及G-CSF的水平。结果同对照组相比,高浓度组FK506(20ng/ml)能显著抑制IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF和G-SCF的分泌(P<0.05);中浓度组FK506(5ng/ml)能有效抑制GM-CSF的分泌,两组之间的差异有显著性(P<0.05)。结论FK506对全血细胞促炎症细胞因子IL-6,IFN-γ和TNF-α的分泌有较强的抑制作用,同时对IL-2,IL-12,IL-17以及集落刺激因子因子GM-CSF,G-CSF也有明显抑制作用。因此FK506发挥免疫抑制功能可能通过抑制免疫细胞分泌各类细胞因子来实现。同时,由于FK506与细胞因子的分泌有剂量依赖关系,有望可以通过FK506浓度水平与细胞因子的抑制水平的依赖关系来评估临床病人FK50...     

建立快速检测淋巴细胞内磷酸化信号传导及转录激活子的方法

目的建立淋巴细胞内磷酸化信号传导及转录激活子（STAT）的快速检测方法。方法人单个核细胞或外周静脉血淋巴细胞用IL-6、IL-4和IFN-α1体外刺激15min,运用流式细胞术检测胞内STAT3（pY705）、STAT6（pY641）和STAT1（pY701）磷酸化水平,并比较不同破膜剂对它的影响。结果与0．2％皂素、90％醇比较,Purm buffer Ⅲ破膜剂破膜后,能够显著地提高淋巴细胞内STAT3的磷酸化水平（P〈0．01）。结论经Perm buffer Ⅲ破膜后,运用流式细胞术可快速检测磷酸化STAT3、STAT6和STAT1。     

朊蛋白在结肠癌中高表达及意义

目的检测朊蛋白(PrPC)在正常结肠及结肠癌组织中的表达情况,并分析其在结肠癌组织表达水平与患者临床参数的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测PrPC在59例结肠癌及29例正常结肠组织中表达差异,并分析其在结肠癌组织中表达强度与性别、分化及Dukes分期等临床病理资料之间的关系。结果 PrPC在结肠癌组织中表达率为84.7%(50/59),明显高于正常结肠组织的27.6%(8/29)(P<0.05),其在男性患者及女性患者表达率分别为84.4%(27/32)及85.2%(23/27)(P>0.05);在高、中、低分化癌组织的表达率分别为70.0%(14/20)、90.0%(18/20)及94.7%(18/19)(P<0.05);在Dukes分期A+B及C+D期癌组织表达率分别为78.1%(25/32)及92.6%(25/27)(P<0.05)。结论 PrPC在结肠癌中高表达与其发生发展、分化及Dukes分期密切相关,有望作为早期诊断及靶向治疗的分子标记。     

LY294002对小鼠体内调节性T细胞的影响

背景:研究已证实,磷酸肌醇3激酶特异性阻滞剂LY294002在体外具有剂量依赖性抑制细胞活性的作用,可以用于诱导肿瘤细胞凋亡,但LY294002对正常免疫系统的影响尚不清楚.目的:观察抗肿瘤药物LY294002对C57BU6小鼠体内调节性T细胞的影响.设计、时间及地点:以调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,于2008-08/12在广州南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成.材料:14只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分成实验组与对照组,每组7只.LY294002购自广州英韦创律公司.方法:实验组腹腔注射LY294002溶液200 μL(0.1 mg),对照组给予等体积PBS.1 0 h后后眼眶静脉从采血,并分离脾脏、胸腺,制备单细胞悬液,流式细胞术检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中的CD4+CD25high T细胞.主要观察指标:小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中CD4+CD25high T细胞的比例.结果:实验组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.787±0.036)%,(0.921±0.063)%,(1.230±0.131)%,对照组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.640±0.030)%,(0.639±0.046)%,(0.857±0.077)%.实验组和对照组比较差异有显著性意义(P＜0.01,P＜0.05).结论:腹腔注射LY294002可提升小鼠体内调节性T细胞的比例,提示其有可能会抑制机体免疫反应,从而不利于治疗.     

肝窦内皮细胞与凋亡细胞相互作用对促炎症因子分泌水平的影响

目的 研究肝窦内细胞(HSEC)与凋亡细胞互相作用后促炎症因子分泌水平的变化.方法 紫外线诱导人淋巴细胞凋亡;对照组:体外人HSEC单独培养.实验组:人HSEC与同种异体凋亡淋巴细胞细胞直接共培养.两组均培养16h后,收集上清液,利用Luminex技术检测上清液促炎症性的细胞/化学因子水平,包括IL-2、IINF-γ、TNF-α.结果 实验组IL-2、IINF-γ、TNF-α分泌水平比对照组下调约50%,两组数值的差异有显著性(P<0.05).绪论HSEC与凋亡细胞作用后能使促炎症因子下调,调控局部免疫微环境,使免疫反应偏向耐受.     

LY294002对小鼠体内调节性T细胞的影响

背景：研究已证实,磷酸肌醇3激酶特异性阻滞剂LY294002在体外具有剂量依赖性抑制细胞活性的作用,可以用于诱导肿瘤细胞凋亡,但LY294002对正常免疫系统的影响尚不清楚。 目的：观察抗肿瘤药物LY294002对C57BL/6小鼠体内调节性T细胞的影响。 设计、时间及地点：以调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,于2008-08/12在广州南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成。 材料：14只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分成实验组与对照组,每组7只。LY294002购自广州英韦创津公司。 方法：实验组腹腔注射LY294002溶液200 μL(0.1 mg),对照组给予等体积PBS。10 h后后眼眶静脉从采血,并分离脾脏、胸腺,制备单细胞悬液,流式细胞术检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中的CD4+CD25high T 细胞。 主要观察指标：小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中CD4+CD25high T 细胞的比例。 结果：实验组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.787±0.036)%,(0.921±0.063)%,(1.230± 0.131)%,对照组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.640±0.030)%,(0.639±0.046)%,(0.857±0.077)%,实验组和对照组比较差异有显著性意义(P < 0.01,P < 0.05)。 结论：腹腔注射LY294002可提升小鼠体内调节性T细胞的比例,提示其有可能会抑制机体免疫反应,从而不利于治疗。     

自体凋亡细胞静脉回输联合雷帕霉素对恒河猴体内调节性T细胞的影响

目的观察凋亡细胞联合雷帕霉素对恒河猴体内调节性T细胞(Treg)的影响,探讨减少雷帕霉素用量,降低免疫抑制剂副作用的方法。材料及方法以CD4+FOXP3+调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,4只雄性恒河猴8～10岁龄,体重7～8kg,随机分成实验组和对照组,每组2只。实验组采用低剂量雷帕霉素加凋亡细胞输注的方法,每天给予口服0.4mg雷帕霉素,同时静脉输注凋亡细胞一次;对照组每天给予同样剂量的雷帕霉素,同时静脉注射PBS。定期检测各组恒河猴外周血中CD4+Foxp3+Treg,并计算Treg占CD4+T细胞的比例。对比两组恒河猴Treg变化曲线的异同。结果单纯口服雷帕霉素的恒河猴,Treg/CD4+T比例在1只猴未见明显增加,在第38天为6.92%,另1只仅在4周后明显增加,在第38d为13.7%;而注射凋亡细胞联合雷帕霉素组的恒河猴,其Treg/CD4+T的比例在输注凋亡细胞后2～3周即有明显增加,2只猴在第38d Treg/CD4+T细胞比例升至16.67%和21.56%。结论凋亡细胞联合雷帕霉素有可能升高恒河猴体内Treg的比例。     

C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠对脓毒症反应的差异

目的 探讨C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力.方法 C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠各30只,分别随机分成假手术组与脓毒症组,每组15只.脓毒症组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立小鼠脓毒症模型.术后6h,每组随机选出5只,Bio-plex悬浮蛋白芯片系统检测其外周血IL-1β、IL-2、IL-4,IL-5、IL-10、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的浓度.剩余小鼠用于1周存活率分析.结果 两品系小鼠假手术组1周存活率均为100%.C57BL/6小鼠脓毒症组1周存活率为10%,BALB/c小鼠脓毒症组存活率为50%.C57BL/6小鼠脓毒症组的存活率显著低于BALB/c小鼠脓毒症组(P＜0.05).与假手术组相比,C57BL/6小鼠脓毒症组分泌的IL-4、TNF-α和IL-10明显升高.而BALB/c小鼠脓毒症组分泌的8种细胞因子较假手术组均未见明显增加.结论 C57BL/6与BALB/c两种小鼠对脓毒症的反应能力有差异,C57BL/6小鼠反应更敏感.