7个非综合征型耳聋家系患者的mtDNA A1555G突变分析

目的探讨非综合征型耳聋家系患者mtDNA A1555G突变及其临床特征。方法应用聚合酶链反应、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序技术对7个非综合征型耳聋家系112个成员的mtDNA A1555G突变进行检测，并分析听力临床资料。结果7个家系中所有受检的母系成员mtDNA A1555G突变均为阳性，突变性质含同质性和异质性二种；非母系成员及配偶该突变为阴性。突变的性质与临床表型的有关。结论mtDNA A1555G突变可导致非综合征型耳聋和氨基糖苷类抗生素致聋，其突变性质含均质性和异质性两种，且与临床表型相关。     

福建汉族人群胰蛋白酶原基因多态性与胰腺炎风险的关联

目的 探讨胰蛋白酶原基因(protease serine 1,PRSS1)的多态性与福建汉族人群胰腺炎风险的关系.方法 收集正常对照120例,胰腺炎患者56例,对所有受试者的PRSS1基因5个外显子进行PCR扩增,产物纯化后测序,比较不同基因型与胰腺炎风险的关系,用HWE软件和SPSS13.0软件分别进行遗传平衡检验和统计学分析.结果 5例胰腺炎患者和1例健康体检者的PRSS1基因4号外显子区32位碱基存在C＞T多态,C＞T多态频率在正常人和胰腺炎患者中分别为0.84%、8.92%,C＞T多态等位基因频率符合Hardy-Weinberg平衡.携带T/T基因与携带C/C基因者比较,罹患胰腺炎的风险增加10.67倍(11.67,CI=1.45～94.21).结论 PRSS1基因4号外显子32位碱基C/T多态与福建地区汉族人群胰腺炎可能具有相关性.     

血清胱抑素C在妊娠期高血压早期肾损害中的意义

目的评价血清胱抑素C(CysC)在妊娠期高血压(GH)早期肾损害中的意义。方法收集GH患者40例、正常妊娠妇女70例(其中早中期妊娠35例,晚期妊娠35例)和30例正常对照者血清,以颗粒增强散射比浊法测定CysC、β2微球蛋白(β2-M),以生化分析法测定尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、尿酸(UA)含量,并加以比较。结果正常血压晚期妊娠组(1.22±0.19)mg/L与GH组(1.93±0.48)mg/L的CysC水平均明显高于健康体检组[(0.78±0.22)mg/L,P<0.05和P<0.01];同时,GH组CysC水平高于正常血压晚期妊娠组(P<0.05);正常早中期妊娠组CysC水平与正常对照组无明显差异;GH组CysC水平与UA呈正相关(r=0.46,P<0.05)。结论血清CysC是评价妊娠期高血压早期肾功能损害的一项敏感和可靠的指标。     

血必净注射液对心肺复苏患者凝血功能的影响

目的观察心肺复苏患者凝血功能的变化及血必净注射液的作用。方法将36例心肺复苏患者随机分为对照组和血必净组,每组18例。对照组给予常规心肺复苏综合治疗,血必净组在常规综合治疗基础上加用血必净注射液100ml,2次/d,连用7d。检测两组患者治疗前及治疗后1d、3d、7d血小板计数（PLT）、纤维蛋白原（FBG）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、D-二聚体（DD）、组织纤溶酶原激活物（TPA）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的变化。结果治疗前两组患者凝血功能各指标差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗后两组患者PT、TT、APTT延长,PLT、FBG、DD和PAI-1下降,TPA升高;治疗第7天时,血必净组凝血功能各指标改善程度明显好于对照组（均P〈0.05）。结论心肺复苏患者的凝血功能发生紊乱,血必净注射液对其有保护作用。     

含1555位点的线粒体DNA拷贝数与非综合征型耳聋临床表型的关系

目的 定量检测非综合征型耳聋患者mtDNA A1555G突变型/野生型的拷贝数,探讨mtDNA A1555G突变型的拷贝数与临床表型之间的关系.方法 建立RT-ARMS-qPCR系统对含突变型和野生型mtDNA 1555位点的拷贝数进行定量检测并计算其突变的比例.结合散发组和家系组耳聋患者的临床资料,分析mtDNA A1555G突变型的拷贝数与耳聋严重程度的关系.结果 散发组mtDNA A1555G同质性突变的患者中,突变拷贝数与耳聋轻重程度无关(R=0.001,P=0.997);散发组mtDNA A1555G异质性突变的患者中,突变型与野生型的拷贝数比例与耳聋轻重程度相关(R=0.771,P=0.003);家系组mtDNA A1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.341,P=0.022);家系组mtDNA A1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.85,P=0.015).结论 含mtDNA A1555G点突变的拷贝数与非综合征性耳聋的严重程度密切相关,为揭示非综合征耳聋临床表型多样性奠定了基础.     

建立RT-ARMS-qPCR系统定量测定含A1555G突变的线粒体DNA拷贝数

目的建立RT-ARMS-qPCR（real time-amplification refractory mutation system-quantitative PCR）系统定量测定含线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）A1555G位点突变的片段的拷贝数,为阐明线粒体耳聋临床表型多样性的分子生物学基础奠定基础。方法根据ARMS的基本原理设计引物,在引物3’端插入错配碱基AC建立RT-ARMS-qPCR系统,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。经PCR分别扩增相应突变型和野生型的片段,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品;同时对含突变型和/或野生型mtDNA 1555位点的片段的拷贝数进行定量检测。结果RT-ARMS-qPCR系统用于检测含mtDNA 1555位点的片段,线性检测范围为102-108拷贝数/μl,检测灵敏度为1×102拷贝数/μl,其批内变异系数（CV）为1.34%,批间CV为1.96%,重复性好;突变型和野生型引物分别只扩增相应片段,特异性好。结论RT-ARMS-qPCR系统适合于定量检测含mtDNA A1555G点突变的线粒体DNA片段,结果稳定、准确,有助于阐明线粒体耳聋严重程度的分子基础。     

等位基因特异PCR结合熔解曲线分析快速检测线粒体DNA A1555G突变

目的建立一种线粒体DNA A1555G突变的快速检测方法。方法以45例线粒体耳聋患者为研究对象,采用等位基因特异PCR结合熔解曲线分析对线粒体DNA A1555G突变位点进行检测,根据得到的熔解曲线分析线粒体DNA A1555G突变。并与PCR产物直接测序法结果进行比较。结果线粒体DNA A1555G同质性突变时只出现一个峰且峰尖所对应的Tm为(82±0.5)℃;线粒体DNA A1555G未发生突变时只出现一个峰且峰尖所对应的Tm为(79±0.5)℃;线粒体DNA A1555G异质性突变时出现2个峰且各自峰尖所对应的Tm为(82±0.5)℃和(79±0.5)℃。45例样本的检测结果与PCR产物直接测序法的结果符合率达100%。结论等位基因特异PCR结合熔解曲线分析具有操作简便、结果准确、快速等特点,可作为线粒体DNA A1555G突变检测的常规方法。     

血清胱抑素C在妊娠期高血压早期肾损害中的意义

目的 评价血清胱抑素C(CysC)在妊娠期高血压(GH)早期肾损害中的意义.方法 收集GH患者40例、正常妊娠妇女70例(其中早中期妊娠35例,晚期妊娠35例)和30例正常对照者血清,以颗粒增强散射比浊法测定CysC、β2微球蛋白(β2-M),以生化分析法测定尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、尿酸(UA)含量,并加以比较. 结果 正常血压晚期妊娠组(1.22±0.19)mg/L与GH组(1.93±0.48)mg/L的CysC水平均明显高于健康体检组[(0.78±0.22)mg/L,P＜0.05和P＜0.01];同时,GH组CysC水平高于正常血压晚期妊娠组(P＜0.05);正常早中期妊娠组CysC水平与正常对照组无明显差异;GH组CysC水平与UA呈正相关(r=0.46, P＜0.05).结论 血清CysC是评价妊娠期高血压早期肾功能损害的一项敏感和可靠的指标.     

建立FQ-PCR定量体系检测新型隐球菌CAP10 mRNA

目的建立荧光定量PCR（FQ-PCR）技术定量检测新型隐球菌（CN）的荚膜相关蛋白10（CAP10）基因mRNA,为新型隐球菌的诊断、预后及疗效判断提供依据。方法用逆转录PCR的方法从CN标准株（ATCC34874）中扩增得到CAP10,构建重组质粒标准品pGEMT—Easy-CAP10,以倍比稀释的标准品制备标准血线。设计引物和探针,建立FQ-PCR反应体系并对其重复性、特异性和线性范围进行评价。结果成功构建了重组质粒标准品pGEMT—Easy—CAP10,并用倍比稀释的标准品制备了标准曲线Y=-3．11X＋38．84。批内重复性试验CV值为0．31％,批间重复性试验CV值为2．73％。FQ-PCR体系能特异扩增新型隐球菌,特异性好,该体系的线性范围为10^1copies／μL～10^8copies／μL。结论成功建立CN的CAP10mRNA的定量检测方法;该方法重复性好,特异性强。     

建立FQ-POR定量体系检测新型隐球菌CAP10mRNA

目的建立荧光定量PCR（FQ-PCR）技术定量检测新型隐球菌（CN）的荚膜相关蛋白10（CAP10）基因mRNA,为新型隐球菌的诊断、预后及疗效判断提供依据。方法用逆转录PCR的方法从CN标准株（ATCC34874）中扩增得到CAP10,构建重组质粒标准品pGEMT—Easy-CAP10,以倍比稀释的标准品制备标准血线。设计引物和探针,建立FQ-PCR反应体系并对其重复性、特异性和线性范围进行评价。结果成功构建了重组质粒标准品pGEMT—Easy—CAP10,并用倍比稀释的标准品制备了标准曲线Y=-3．11X＋38．84。批内重复性试验CV值为0．31％,批间重复性试验CV值为2．73％。FQ-PCR体系能特异扩增新型隐球菌,特异性好,该体系的线性范围为10^1copies／μL～10^8copies／μL。结论成功建立CN的CAP10mRNA的定量检测方法;该方法重复性好,特异性强。