唾液富组蛋白5克隆载体的构建

目的将唾液富组蛋白5(histatin5)的cDNA克隆至T载体,获取大量酶切后的目的片段。方法选用大肠杆菌偏爱密码子编码histatin 5氨基酸,设计5′端带酶切位点、3′端互补的两条引物,通过overlap PCR获取histatin 5的cDNA,将cDNA与T载体连接后转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,PCR、酶切、测序鉴定。酶切重组T载体,获取目的片段。结果Histatin 5的cDNA正确克隆至T载体,无突变。结论克隆载体构建成功,有利于目的片段的酶切和回收。     

唾液富组蛋白5表达载体的构建

目的将唾液富组蛋白5cDNA克隆至表达载体pGEX-4T-1。方法EcoR I＋Sal I双酶切克隆载体pMD19-T-hrp5及pGEX-4T-1，回收目的片段hrp5及双酶切载体pGEX-4T-1，将二者连接后转化大肠杆菌DH5α，氨苄青霉素筛选阳性菌落，PCR、酶切、测序鉴定重组质粒。结果唾液富组蛋白5的cDNA正确克隆至表达载体pGEX-4T-1，无突变。结论重组载体pGEX-4T-1-hrp5构建成功。