基于网络药理学和细胞生物学研究黄芪治疗糖尿病肾病的作用机制

目的 运用网络药理学和细胞生物学验证探讨黄芪治疗糖尿病肾病的分子作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选出黄芪有效成分;利用Drugbank数据库、GeneCards和OMIM数据库筛选黄芪有效成分和糖尿病肾病的相关靶点;应用String数据库绘制PPI网络;通过Cytoscape软件绘制黄芪-成分-...     

基于NLRP3炎性体轴土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P<0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P<0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P<0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P<0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

黄芪多糖提取工艺优化及体外抗氧化性研究

目的优化黄芪多糖的提取工艺,测定黄芪中多糖物质的体外抗氧化活性。方法在单因素实验的基础上,通过正交试验优化超声波提取黄芪多糖的工艺,并通过与Vc对比,比较不同产地的黄芪多糖清除DPPH、超氧阴离子、羟基自由基的能力。结果工艺优化的条件为:时间:28 min;温度:72℃;料液比:1∶15,黄芪多糖具有清除DPPH、超氧阴离子、羟基自由基的能力。结论该研究表明在该优化工艺下提取的黄芪多糖具有抗氧化活性,不同产地黄芪多糖抗氧化性强弱:蒙古黄芪浙江省黄芪维生素C黑龙江省黄芪。     

基于NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路探讨加味三妙丸防治痛风性关节炎的作用及机制

[目的]基于Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor pyrin domain 3,NLRP3)炎性体轴和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路,探讨加味三妙丸(modified Sanmiao pill,MSMP)对THP-1细胞痛风炎症模型的抗炎作用及机制。[方法]通过尿酸钠(monosodium urate,MSU)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共同诱导建立THP-1细胞痛风炎症模型。以MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)分泌水平,Western blot检测NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路中相关蛋白表达情况。[结果]MSU与LPS联用可诱导THP-1细胞产生典型痛风炎症。与空白组比较,模型组THP-1细胞分泌IL-1β水平显著升高(P＜0.01);NLRP3炎性体轴相关蛋白NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、磷酸化NF-κB p65(phospho-NF-κB p65,p-NF-κB p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(phospho-inhibitor of NF-κB α,p-IκBα)、磷酸化IκB激酶α(phospho-inhibitor of NF-κB kinase α,p-IKKα)及上游调节蛋白髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达明显上调(P＜0.01)。与模型组比较,MSMP具有较强的抗炎效果,对NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路两条路径相关蛋白的异常表达均具有明显的调控作用,不同剂量的MSMP显著降低IL-1β的分泌(P＜0.01),明显下调NLRP3、ASC、caspase-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-IKKα及MyD88、TLR2、TLR4等蛋白的表达,且具有剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01)。[结论] MSMP在痛风炎症细胞模型上表现出较强的抗痛风性关节炎作用,其机制与调控NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路相关蛋白的表达密切相关。     

基于NLRP3炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg·kg-1),每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P0.01)。结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

枫杨叶提取物抑制金黄色葡萄球菌的机制研究

[目的]研究枫杨叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及相关机制。[方法]通过纸片扩散法比较不同溶剂枫杨叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑制效果;以微量稀释法测定枫杨叶醇提取物的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)与最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);以生长曲线法比较不同浓度枫杨叶醇提取物对细菌生长的影响;以扫描电镜观察该提取物对细菌菌体形态的影响;以碘化丙啶(propidium iodide,PI)和SYTO9荧光染料染色观察确定该提取物对菌体细胞膜的影响;以琼脂糖凝胶电泳检测该提取物对细菌基因组DNA的作用。[结果]纸片抑菌与微量稀释实验证实枫杨叶水提取物无抑菌效果,而醇提取物具有明显的抑菌效果,其MIC和MBC分别为125mg·L-1和1 600mg·L-1。枫杨叶醇提取物作用后,细菌进入对数生长期的时间延迟,培养至2h时各组OD600值均低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。培养至4h开始,各时点2×MIC枫杨叶醇提取物处理组OD600值均低于1×MIC处理组,4×MIC处理组均低于2×MIC处理组,差异均有统计学意义(P0.01)。培养12h后,不同浓度枫杨叶醇提取物处理组菌量较空白对照组明显减少(P0.01),且均进入稳定期,而空白对照组菌量在24h时仍呈增长趋势。说明枫杨叶醇提取物可以明显抑制金黄色葡萄球菌的增殖,而且抑制作用存在量效关系。扫描电镜观察发现,枫杨叶醇提取物作用后,金黄色葡萄球菌出现菌体变形、塌陷甚至表面溶解等现象;荧光探针实验进一步说明枫杨叶醇提取物可破坏金黄色葡萄球菌细胞膜与菌体结构的完整性,且效果具有剂量和时间依赖性。琼脂糖凝胶电泳表明枫杨叶醇提取物可使细菌基因组DNA发生损伤。[结论]枫杨叶醇提取物对金黄色葡萄球菌生长具有显著的抑制作用,其机制可能与破坏细胞膜完整性和菌体结构,损伤基因组DNA有关。     

高效液相色谱法测量醒久泡腾片中葛根素的含量

目的:采用高效液相色谱法建立醒久泡腾片中主要活性成分葛根素的含量测定方法.方法:液相色谱柱为Microsorb-MV 100-5 C18,流动相为甲醇∶水25∶75,检测波长:250nm;流速:1.0mL/min;柱温:25℃;进样量:10μl.结果:葛根素在5.65～113.0.μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.77％,RSD 0.39％.结论:本方法操作简便,精密度高,重现性好,回收率高,能有效地测量该制剂中葛根素的含量.     

花旗松素基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α介导的抗氧化通路对顺铂致急性肾损伤小鼠的保护作用及机制

目的:探讨花旗松素（taxifolin,TAX）改善顺铂（cisplatin）致急性肾损伤的作用及机制。方法:（1）40只C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组、TAX组、顺铂组、顺铂+TAX组。测量各组小鼠体重情况。检测各组小鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平;通过HE染色观察小鼠肾组织病理学改变;通过酶联免...     

土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的研究

目的:探讨土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的影响。方法:采用双硫腙-PAR-铅分光光度法检测溶液中的铅离子含量,从而衡量出样品对铅离子的螯合能力;体外试验测定土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物清除自由基的能力和总的抗氧化能力。结果:土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物均在体外有很好的螯合作用,能够有效清除ABTS+、DPPH·和羟基自由基,并且具有很好的抗氧化能力。结论:土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子有显著的螯合能力,以及具有良好的自由基清除和抗氧化能力。