PTG重组腺病毒过表达载体的构建

目的 构建及鉴定携带小鼠PTG基因(NM＿016854)的过表达重组腺病毒载体,为深入研究PTG的功能奠定基础。方法 化学合成小鼠PTG基因的编码序列,经聚合酶链式反应(PCR)扩增、酶切,后插入GV314载体(CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP),得到重组穿梭质粒pGV314-PTG;进一步BamHⅠ/AgeⅠ双酶切,产物交换入线性化表达载体pDC315,构建重组腺病毒Ad-PTG,将其转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,进行纯化及滴度检测,最后利用PCR、Western blot及测序验证重组腺病毒。结果 经PCR、Western blot及测序后,结果显示成功构建pGV314-CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-PTG过表达腺病毒载体(Ad-PTG),终点稀释法测得病毒滴度为4×10¹⁰ PFU/ml, Western blot和荧光定量PCR显示PTG的蛋白和mRNA表达水平显著升高。结论 成功构建携带小鼠PTG基因的重组过表达腺病毒载体,且能有效上调肝细胞中PTG基因的表达。     

不同频率电针对前交叉韧带损伤家兔脊髓组织突触相关蛋白及神经递质的影响

目的:探讨不同频率电针对前交叉韧带损伤家兔脊髓组织突触相关蛋白及神经递质的影响。方法:24只健康新西兰兔随机分为空白组、模型组、低频电针组、高频电针组，每组6只。模型组、低频电针组、高频电针组建立兔膝关节前交叉韧带损伤模型。造模后第7天低频电针组、高频电针组取患侧血海、梁丘行不同频率电针治疗，其余各组仅抓取、固定，不进行电针干预。连续干预21 d, 1次/d。造模后第7天、干预结束后采用纤维丝测痛仪测量各组家兔的痛阈值；干预结束后ELISA检测背根神经节中的前列腺素E2(PGE2)、P物质(SP)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)水平，蛋白印迹法检测背根神经节中突触素(SYN)、突触后致密蛋白95(PSD95)的表达水平。结果:与空白组比较，模型组、低频电针组、高频电针组家兔的机械痛阈值降低(均P<0.01);干预后，与模型组比较，低频电针组、高频电针组家兔的机械痛阈值明显上升(均P<0.01),低频电针组改善优于高频电针组。低频电针组、高频电针组家兔背根神经节中的PGE2、SP、Glu表达较模型组降低，低频电针组低于高频电针组(均P<0.05);低频电针组...