同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性及其机制的初步探讨

为了观察同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性,并初步探讨其分子机制。以K562细胞为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤CNE2、KG1a和U251细胞的活性。应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测4种细胞MHCI类链相关分子(MICA/B)和人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白(ULBP1~3)基因和分子的表达情况。效靶比20∶1时用AMO-1、BMO-1、M295、M310和M551单抗分别阻断肿瘤细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化。结果:NK细胞对K562、CNE2和KG1a细胞均有杀伤活性,对U251细胞无杀伤活性。在mRNA水平4种细胞均表达MICA/B和ULBP1~3基因。K562细胞表达MICA/B和ULBP1~3全部分子;KG1a和U251细胞均不表达5种分子;CNE2细胞表达MICA/B和ULBP2,不表达ULBP1和ULBP3。CNE2、KG1a和U251细胞均高表达HLAI分子,而K562细胞不表达。用单抗分别阻断靶细胞表面相应的NKG2D配体分子,NK细胞对KG1a和U251细胞的杀伤活性无变化。NK细胞对K562和CNE2细胞的杀伤活性可部分被封闭。同种异体NK细胞在体外对不同肿瘤细胞的杀伤活性不同,其杀伤机制也不完全相同。     

K562和K562/AO2细胞HLA Ⅰ类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLA Ⅰ类分子和MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响.用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAⅠ类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比101时,用抗HLA Ⅰ类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHC Ⅰ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化.结果表明K562和K562/AO2细胞均不表达HLA Ⅰ类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2显增高(P＜0.01).效靶比51、101、201、301时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比101时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性.结论MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLA Ⅰ类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降.     

NK细胞抑制CD34+早期急性髓系白血病细胞克隆形吵

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆抑制效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞杀伤后的克隆形成,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3-CD16 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的克隆抑制率低于K562,差异有显著性(P＜0.05).结论同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆形成具有一定的抑制作用.     

EGCG通过下调Bcl-2诱导KG1A白血病细胞凋亡宰

目的 研究EGCG对KGIA白血病细胞的作用,探讨其作用机制.方法 使用人的白血病细胞株KG1A细胞.MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用annexin v染料标记细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡.RT-PCR检测KGIA细胞Bcl-2家族mRNA的表达.结果 EGCG引起KG1A细胞活性的下降.ECA2G诱导KG1A细胞凋亡.且呈时间依赖性.EGCG诱导凋亡与下调Bcl-2和Bcl-xl有关.结论 EGCG可以通过下调Bcl-2和Bcl-xl诱导KG1A细胞凋亡.这些结果有助于提供新的有效联合方案,尤其是针对复发难治白血病的治疗.     

NK细胞抑制CD34^＋早期急性髓系白血病细胞克隆形成

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆抑制效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞杀伤后的克隆形成,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3-CD16 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的克隆抑制率低于K562,差异有显著性(P＜0.05).结论同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的克隆形成具有一定的抑制作用.     

医教协同理念下实验诊断学教学模式改革探索

目的 探索医教协同理念下实验诊断学教学的新模式。方法按照随机数字表法抽取新乡医学院2014级与2015级（教学模式改革前）学生各240名作为对照组，2016级与2017级（教学模式改革后）学生各240名作为试验组，进行问卷调查。问卷内容包括授课内容、教学方法、促进师生交流、教学满意度、学习兴趣、临床思维能力、综合分析能力、沟通与合作能力评价。结果试验组学生对实验诊断学教学的授课内容、教学方法、促进师生交流的满意度及教学满意度评分均高于对照组学生（P<0.001）；对实验诊断学教学能提高学习兴趣、临床思维能力、综合分析能力及沟通与合作能力的评分也高于对照组学生（P<0.001）。结论医教协同理念下通过在教学过程中应用CBL、PBL、Seminar教学法及微课进行教学模式改革，能够提高学生学习兴趣，促进师生交流，提高学生的临床思维能力、综合分析能力以及沟通与合作能力。     

K562和K562/AO2细胞HLA I类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLAI类分子和MHCI类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAI类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAI类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHCⅠ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化。结果表明:K562和K562/AO2细胞均不表达HLAI类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2明显增高(P<0.01)。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比10∶1时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性。结论:MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLAI类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。     

肾脏缺血预处理对麻醉家兔心脏保护的神经机制(英文)

目的　探讨肾神经在肾脏缺血预处理 (RIP)心肌保护中的作用。方法　在麻醉家兔心肌缺血 /再灌注 (MIR)模型上 ,观察MIR和RIP对家兔血流动力学、心肌耗氧量、心外膜电图和心肌梗死范围的影响。结果　在MIR过程中 ,血流动力学指标和心肌耗氧量均明显持续性降低 ;心外膜电图ST段在缺血期明显升高 ,再灌注过程中恢复到基础对照值。单纯MIR时的心肌梗塞范围占缺血心肌的 (55.80± 1.2 5) % ,RIP后心肌梗塞范围为 (3 6.51± 2 .8) % ,较单纯MIR显著减少 (P <0 .0 1)。肾神经切断后对MIR所致的心肌梗死范围无明显影响 ,但可取消RIP对心肌的保护效应。结论　RIP具有心肌保护作用 ,肾短暂缺血 -再灌注所诱发的肾神经传入活动可能参与此心肌保护效应     

Th1与Th2细胞因子及血管内皮生长因子联合检测对肺癌患者发生发展及临床诊断价值分析

目的通过检测肺癌患者和健康者的Th1、Th2细胞因子及血管内皮生长因子的表达水平,组间进行对比,统计分析之间的差异性和相关性,探究细胞因子和肿瘤生长因子联合检查肺癌的应用价值。方法选择2017年6月至2018年6月之间,在我院收治的肺癌患者血浆标本共114例作为观察组,将相同时间在我院健康体检者共92例作为对照组,检测体检组和对照组患者血浆中的Th1、Th2型细胞因子、VEGF的表达水平,同时探究细胞因子和常见肿瘤标志物的相关性,探究其在肺癌发生发展以及临床诊断中的价值。结果Th1型中,观察组血浆中的IFN-γ、IFN-α浓度均显著高于对照组(P0.05),而观察组标本中IL-2表达水平显著低于对照组组间(P0.05);Th2型中,观察组患者血浆中的IL-6、IL-8以及IL-10浓度均高于对照组,肺癌患者血浆中的VEGF浓度显著低于健康人,组间差别具有统计学意义(P0.05);女性肺癌患者的VEGF浓度显著低于男性患者(t=18.001P=0.000),临床Ⅲ/Ⅳ期患者血浆中的IL-8表达水平显著低于Ⅰ/Ⅱ期表达水平(t=9.546,P=0.001),其余细胞因子在病情不同程度的分期上差别不大(P0.05);肺癌患者中,IL-6、IFN-γ、IL-8的浓度越高,NSE、糖类抗原CA125以及肿瘤特异生长因子水平也越高,均呈正相关,IL-10的表达和糖类抗原CA125呈正相关;血管内皮生长因子和肿瘤细胞因子为正相关。结论通过检查健康者细胞因子以及患者细胞因子和常见肿瘤标志物,同时分析了两者之间的相关性,可以有效的了解机体内免疫系统的情况,并且有可能为肺癌的免疫治疗提供新的治疗方案。     

同种异体NK细胞对CD+34早期急性髓系白血病细胞的杀伤活性

目的探讨同种异体NK细胞对CD3+4早期急性髓系白血病(AML)细胞的体外杀伤活性。方法免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,以NK杀伤敏感细胞株K562作为对照,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定不同效靶比时NK细胞对CD3+4早期AML细胞KG1a的杀伤活性。结果AML细胞株KG1a中CD34抗原表达率为98.0%±1.1%,分选后的NK细胞纯度为93.2%±3.7%。不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均有杀伤活性,且随着效靶比的增高,其杀伤活性增高(P<0.05)。结论同种异体NK细胞对CD34+早期AML细胞具有一定的杀伤活性。