血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力及耐药性的研究

目的探究人葡萄球菌生物被膜能力和耐药性,为预防与治疗提供理论依据。方法收集临床分离血液来源人葡萄球菌,琼脂稀释法检测16种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),通过耐苯唑西林表型和mecA基因型以准确区分耐甲氧西林人葡萄球菌(MRSHo)和甲氧西林敏感人葡萄球菌(MSSHo),比较二者在耐药性上的差异;体外微孔板黏附实验(TCP)测定生物被膜,并分析其对耐药性的影响。结果收集菌株共计55株,药物耐药率由高到低分别为青霉素92.73%、红霉素87.27%、苯唑西林83.64%、克林霉素67.27%、复方磺胺甲噁唑65.45%、环丙沙星47.27%、左氧氟沙星47.27%、四环素41.82%、莫西沙星34.55%、利福平16.36%和庆大霉素10.91%及万古霉素、利奈唑胺、普丁/达福、呋喃妥因和替加环素0.00%,无耐药株检出。46株(83.6%)mecA阳性为MRSHo,与MSSHo相比MRSHo更易对青霉素、四环素、奎诺酮类及复方磺胺甲噁唑耐药,差异有统计学意义(P0.05)。35株(63.6%)可产生物被膜,生物被膜阴阳性菌株组间在16种抗菌药物耐药性比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论临床分离血液来源人葡萄球菌易产生物被膜、甲氧西林耐药率高、MRSHo常为多重耐药。     

SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的基因定位

目的了解SCCmec相关的psm-mec基因在血液来源人葡萄球菌中的基因定位特征,为深入研究psm-mec基因在人葡萄球菌中的功能奠定基础。方法收集临床血培养分离的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA基因和psm-mec基因,多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,PCR扩增mecR1/psm-mec基因与psm-mec/xylR基因间隔序列及fudoh基因,探究psm-mec基因在SCCmec上的定位特点。结果 PCR检测显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,psm-mec基因的检出率为47.6%,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌,未检出psm-mec基因。多重PCR结果显示,10株psm-mec基因阳性菌株中,2株属典型SCCmecⅢ型,5株属类SCCmecⅢ型,3株属SCCmec新型别。基因间隔序列和fudoh基因检测显示,10株psm-mec基因阳性人葡萄球菌中,mecR1/psm-mec基因和psm-mec/xylR基因及fudoh基因均阳性。结论 SCCmec相关的psm-mec基因广泛存在于血液来源的人葡萄球菌中,主要分布在典型SCCmecⅢ型、类SCCmecⅢ型和SCCmec新型别上,定位于mecR1基因与xylR基因之间。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析

目的 了解我院临床分离大肠埃希茼产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率和基因型分布情况.方法 确证试验鉴别临床分离大肠埃希菌中产ESBLs株,PCR扩增CTX-M耐药基因,PCR.RFLP和DNA测序确定CTX-M基因型.结果 确证实验证明,88株大肠埃希菌中有57株ESBLs阳性,其中54株CTX-M基因扩增阳性.PCR-RFLP分析发现,10株携带CTX-M-1组基因,39株携带CTX-M-9组基因,另外5株同时携带CTX-M-1和CTX-M-9组基因.测序证实7株CTX-M-9组扩增产物均为CTX-M-14型,3株CTX-M-1组扩增产物均为CTX-M-3型.结论 大肠埃希菌中产CTX-M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX-M-14和CTX-M-3型为主.     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及对细胞内活性氧和Ca2+动态变化的影响

目的研究辛伐他汀诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡及细胞内活性氧与Ca2+水平的变化,以探讨凋亡机制.方法20 μmol·L-1辛伐他汀处理K562细胞,24 h 后光镜观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧和细胞内游离Ca2+水平.结果20 μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞 48 h 后出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;AnnexinV-FITC/PI检测细胞早期凋亡率,处理组凋亡率高于对照组,随药物作用时间延长逐渐增大,具有时间依赖性.荧光染料2',7'-二氯荧光乙酰乙酸(2',7'-dichloro fluorescein diacetate, DCFH-DA)检测K562细胞内活性氧,不同时间处理组与对照组比较活性氧均升高,峰值时间为 24 h,与对照组比较发生显著改变.荧光染料Fluo-3AM检测K562细胞内游离Ca2+浓度,不同时间细胞内游离Ca2+浓度均升高,峰值时间为 12 h,与对照组比较发生显著变化.结论辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过提高细胞内活性氧及游离Ca2+水平,从而导致细胞凋亡.     

利用DiversiLab系统快速诊断医院感染菌的亲缘关系

目的应用DiversiLab系统对医院感染的鲍曼不动杆菌进行同源性分析,评价DiversiLab系统在诊断医院性感染细菌中的作用。方法收集该院重症监护病房暴发的鲍曼不动杆菌16株,应用VITEK 2COMPACT全自动微生物分析系统进行鉴定和药敏试验,同时应用基于重复序列聚合酶链反应(rep-PCR)技术的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 16株鲍曼不动杆菌被分为4个克隆组,其中第1克隆组是主要的流行克隆,有4个亚克隆,9株鲍曼不动杆菌同属于第1亚克隆,亲缘关系近。结论第1克隆组是该院医院感染主要流行克隆,DiversiLab系统可在24h内快速、准确地诊断医院感染细菌的同源性,可广泛应用于医院感染细菌的诊断。     

临床分离耐甲氧西林表皮葡萄球菌SCCmec型别多样性分析

目的探讨临床分离耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,采用多重PCR对MRSE SCCmec进行分型,分析其分布特点。结果 PCR扩增结果显示,84株临床分离表皮葡萄球菌均可扩增出esp基因,mecA检出率为76.19%(64/84),其中血液、痰液、尿液和伤口分泌物MRSE检出率分别为76.8%、68.8%、100.0%和71.4%。多重PCR扩增结果显示,64株MRSE中,SCCmec单一型别为22株,其中SCCmecⅠ型19株、SCCmecⅢ型3株;SCCmec混合型为42株,其中Ⅰ、Ⅱ混合型2株,Ⅰ、Ⅲ混合型14株,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混合型12株,Ⅱ、Ⅲ混合型5株,Ⅲ、Ⅳ混合型9株。结论临床分离的MRSE SCCmec型别存在明显的多样性,以混合SCCmec型别为主。     

甘氨脱氧胆酸盐诱导人正常肝细胞株HL-7702凋亡过程中caspase-3，8，9蛋白活性变化及凋亡机制研究

目的观察甘氨脱氧胆酸盐（glycodeoxycholate,GCDC）诱导人正常肝细胞株HL．7702凋亡过程中caspase．3,8,9活性的变化,探讨其凋亡机制。方法体外培养HL-7702细胞,以GCDC为处理因素,用AnnexinV．F1TC／PI双染色法结合流式细胞技术仪检测细胞凋亡率,比色法测定caspase-3,8,9活性。结果100、150、200、250μmol／L的GCDC处理HL-7702细胞24h后以及250μmol／LGcDc处理细胞4、8、12、24h后,其细胞凋亡率、caspase-3,8,9活性明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论GCDC可通过活化caspase-8,9,进而激活caspase-3从而诱导肝细胞凋亡。     

一氧化氮信号在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程的作用

目的:观察一氧化氮(Nitric oxide,NO)信号在辛伐他汀(Simvastain)诱导K562细胞凋亡过程中变化,推测一氧化氮信号与K562细胞凋亡之间关系.方法:20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞24、48和72 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率;比色法测定K562细胞内总一氧化氮浓度;RT-PCR检测诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因;一氧化氮抑制剂和20μmol/L辛伐他汀共同培养,观察不同时间细胞凋亡率.结果:与对照组比较,24、48 h和72h处理组细胞凋亡率增加6.1%±0.4%,14.2%±0.4%,30.7%±0.6%,差异具有显著性;不同时间处理诱导性一氧化氮基因均显著上调;处理组细胞内总一氧化氮浓度增加为(0.3±0.1)mg/ml,(2.8±0.2)mg/ml.(3.8±0.4)mg/ml,与对照组比较显著升高;一氧化氮抑制剂能显著降低处理组细胞凋亡率.结论:辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,细胞内升高的一氧化氮浓度可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的信号机制之一.     

表面增强激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定血液大肠埃希菌感染

目的探讨用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌。方法用SELDI-TOF-MS建立大肠埃希菌的蛋白质指纹模型。临床分离的168株菌经SELDI-TOF-MS检测,数据与大肠埃希菌模型进行相似度比较,对该模型进行评价。SELDI-TOF-MS检测88株微生物血培养分析仪阳性报警的革兰阴性杆菌,与大肠埃希菌蛋白质指纹模型进行相似度比较,对其中的大肠埃希菌进行鉴定。结果 19株建模组菌株经PCR及测序鉴定均为大肠埃希菌,并建立了该菌的蛋白质指纹模型;用168株验证组菌株对该模型进行验证,对大肠埃希菌鉴定的符合率为100%(60/60);用该模型对88株引起血流感染的革兰阴性杆菌进行鉴定,鉴定结果与传统微生物学鉴定结果具有较高的一致性(k=0.905)。结论 SELDI-TOF-MS可快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌,为血流感染细菌的快速诊断提供了新技术。     

利用蛋白芯片技术诊断和评估肾损伤的临床应用

目的利用Au蛋白芯片（proteinchip gold array）技术检测肾损伤患者尿蛋白指纹图谱,探讨其灵敏、快速预测和评估肾损伤的临床应用价值。方法利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）技术及Au蛋白芯片检测477例尿蛋白指纹图,包括237例肾病患者和240例对照者。利用生物标志模型软件（biomarker patterns software,BPS）筛选标志蛋白,结合人工神经网络（artificialneural network,ANN）技术建立模型,评价其在诊断和评估肾损伤中的应用价值。通过电喷雾四级杆飞行时间质谱（electrospray ionization quadrupole time of flight,ESI-Q-TOF）结合比对标准蛋白质谱,对部分差异蛋白进行鉴定。结果肾病患者与对照者尿中差异表达的蛋白质峰有75个,其丰度值两组间比较差异均有统计学意义（t值为-11.6-28.1,P均〈0.05）,筛选质荷比（m/z）6182、88439、7402、37706、76508、0045和91 240蛋白质建立的ANN模型预测肾损伤的灵敏度为96.6%（84/87）,特异度为94.4%（85/90）。鉴定结果表明11735、15150、22871、23770、67650 h和80045m/z蛋白分别为β2-微球蛋白、血红蛋白、α1-抗胰蛋白酶、α1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白。结论基于Au蛋白芯片的SELDI-TOF-MS技术检测尿蛋白指纹图,在肾脏疾病的诊断、蛋白尿类型判断、肾损伤评估及治疗评价中具有潜在的应用价值。