Preparation and characterization of monoclonal antibody against recombinant human tissue factor pathway inhibitor.

Ｔｉｓｕｅｆａｃｔｏｒｐａｔｈｗａｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＴＦＰＩ）ｉｓｒｅｃｅｎｔｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓａｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ｗｈｉｃｈｐｌａｙｓａｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｉ...     

抗组织因子途径抑制物单克隆抗体对血浆凝固时间的影响

观察自制抗组织因子途径抑制物单克隆抗体（ＭｃＡｂ４Ｆ８）对血浆凝血酶原时间（ＰＴ）及活化的部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）的影响。结果发现：外源性的组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）可使ＰＴ及ＡＰＴＴ延长。ＭｃＡｂ４Ｆ８则使稀释的ＰＴ缩短，且呈量效关系。低分子量肝素（ＬＭＷＨ）使ＰＴ及ＡＴＰＰ均明显延长，加入兔抗人抗凝血酶Ⅲ抗体则可以减弱ＬＭＷＨ的这种作用。ＭｃＡｂ４Ｆ８还可使乏因子Ⅸ血浆稀释的ＰＴ明显缩短。提示组织因子途径在正常生理条件和血友病人的血凝过程中均起重要作用。     

血浆组织因子途径抑制物抗原含量的测定

组织因子途径抑制物是新确定的一种抗凝蛋白,它通过抑制因子Ⅹa和因子Ⅶa/组织因子(TF)而发挥抗凝作用。研究表明,血浆TFPI的改变与某些恶性肿瘤、败血症、血栓性疾病及DIC等多种疾病相关联。因此,对它的检测将有助于这些疾病病因病机的研究及临床诊断。鉴于国内目前尚未建立TFPI抗原检测方法,亦未确定国人TFPI血浆水平。本文报道了利用抗TFPI单克隆抗体用双抗夹心ELISA法检测了30例正常人血浆TFPI含量。     

抗组织因子途径抑制物单克隆抗体对血浆凝固时间的影响

观察自制抗组织因子途径抑制物单克隆抗体（ＭｃＡｂ４Ｆ８）对血浆凝血酶原时间（ＰＴ）及活化的部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）的影响。结果发现：外源性的组织因子途径抑制物（ＴＦＰ１）可使ＰＴ及ＡＰＴＴ延长。ＭｃＡｂ４Ｆ８则使稀释的ＰＴ缩短，且呈量效关系。低分子量肝素（ＬＭＷＨ）使ＰＴ及ＡＴＰＰ明显延长，加入兔抗人抗凝血酶Ⅲ抗体则可以减弱ＬＭＷＨ的这种作用。ＭｃＡｂ４Ｆ８还可使乏因子Ⅸ血浆稀释的ＰＴ明显缩短     

低分子量肝素对大鼠内毒素休克的保护作用

用大鼠内毒素（ＬＰＳ）休克模型，观测其平均动脉压（ＭＡＰ）、血浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、组织因子（ＴＦ）、组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）含量、抗凝血酶Ⅲ（ＡＴⅢ）活性的变化、血白细胞及血小板计数，探讨低分子量肝素（ＬＭＷＨ）对大鼠内毒素休克的作用。结果：ＬＰＳ组大鼠ＭＡＰ呈进行性下降，血浆ＴＮＦ和ＴＦ含量显著升高，ＡＴⅢ活性明显降低，ＴＦＰＩ／ＴＦ比值降低，血白细胞和血小板计数下降，与对照组比较差异显著；而ＬＭＷＨ＋ＬＰＳ组的以上指标变化与对照组比较均无显著性差异。证明ＬＭＷＨ对ＬＰＳ所致的大鼠休克有保护作用     

抗组织因子途径抑制物单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）单克隆抗体。方法：用微量ＴＦＰＩ脾内包埋免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＦＰＩ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为４Ｆ４和４Ｆ８。对其中的一株４Ｆ８进行研究，其杂交瘤细胞染色体众数为９３，分泌的抗体为ＩｇＧ１。以简易正辛酸法从腹水纯化ＭｃＡｂ４Ｆ８，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测其纯度，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析显示其可特异性地识别分子量为３４８００的抗原分子。对纯化的抗体以改良过碘酸钠氧化法用辣根过氧化物酶标记后，采用双夹心ＥＬＩＳＡ法检测正常人血浆ＴＦＰＩ含量。结果：稀释的凝血酶原时间（ＰＴ）测定，ＭｃＡｂ４Ｆ８可缩短其凝固时间，且呈量效关系，ＭｃＡｂ４Ｆ８还可使乏因子Ⅸ血浆稀释的ＰＴ明显缩短。正常人血浆ＴＦＰＩ含量为１０３．２±１１．５μｇ／Ｌ，结果与美国Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ公司的ＴＦＰＩＥＬＩＳＡ试剂盒所测结果（９８．４±１０．３μｇ／Ｌ）相近（ｒ＝０．９２）。结论：ＭｃＡｂ４Ｆ８有潜在的药用价值，并可望为我国ＴＦＰＩ的研究提供精确的检测手段。     

654-2对Fe~(2+)所致红细胞膜损伤的保护作用

本实验探讨654-2对Fe~(2+)所致红细胞膜损伤的保护作用。取正常大白鼠红细胞,生理盐水制成红细胞悬液(8×10~(?)个细胞/ml)。取0.2ml悬液,分别加入下列药物37℃孵育120分钟,观察红细胞形态变化,TBARs产生及红细胞内血红蛋白释出情况。实验分为五组:1.对照组(红细胞+生理盐水);2.红细胞+Fe~(2+)(FeSO_4