酵母LAG1同源的人类长寿保障新基因LASS2的克隆和功能研究

目的　分离和克隆肝癌相关基因。方法　我们用高通量功能筛选和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法从人肝cDNA文库中克隆到一个与酵母长寿保障基因LAG1高度同源的人类新基因LASS2 (homosapienslongevityassurancehomologue 2ofyeastLAG1)。结果　LASS2在正常人肝组织和肾组织中高表达 ,其表达谱不同于早先在人中克隆到的另一个与酵母LAG1高度同源的人类长寿保障基因LAG1Hs- 1。放射杂交基因定位显示LASS2位于人类染色体 1q11,酵母双杂交和GST结合实验发现LASS2蛋白能与细胞中的几个膜相关受体或转运体相互作用 ;另外 ,LASS2在体外对人肝癌细胞的克隆形成具有抑制作用 ,提示该基因可能参与细胞的生长调控。结论　LASS2是一个新的肝癌相关基因。     

人溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的：利用巴斯德华赤（Pichia pastoris）酵母真核表达系统,构建真核表达载体pPIC9K与人溶菌酶基因（humanlysozyme,hLY）的重组质粒pPIC9K-hLY,表达出具有活性的人溶菌酶。方法：此项研究在本实验室构建的人溶菌酶（hLY）基因与pUC19的重组质粒pUC19-hLY的基础上,通过设计一对引物,用多聚酶链式反应（PCR）扩增出人溶菌酶全基因片段后,将其克隆到巴斯德毕赤酶母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重建质粒pPIC9K-hLY,经Bg1Ⅱ酶切线性化后,用电穿孔法将其转入毕赤酵母细胞内。通过G418筛选,选到的高拷贝转化子经PCR检测人溶菌基因与毕赤酵母染色体是否稳定整合,阳性克隆经甲醇诱导进行表达。结果：序列测定,经PCR扩增后的人溶菌酶基因与献发表的序列相比,缺失4个碱基。我们决定采用重组PCR法予以纠正,经序列测定结果正确。用PCR检测,人溶菌酶基因与毕赤酵母染色体稳定整合。用甲醇诱导表达并以SDS－PAGE分析,在Mr为15000左右出现一条蛋白带,表达量约占上清总蛋白的0．47。Western Blot证实表达产物具有天然人溶菌酶的抗原性。用黄色小球菌平板溶圈法鉴定表态产物具有人溶菌酶的活性。结论：成功的构建了重组质粒pPIC9K-hLY并在毕赤醇母中表达了人溶酶基因。     

Cloning and high-level expression of human interferon alpha-8 in E.coli

Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｐｈａ－８ｉｎＥ．ｃｏｌｉＺｈａｎｇＰｉｎｇｗｕ（张平武）；ＷａｎｇＹｉｌｕｎ（王易伦）；ＬｕＤｅｒｕ（陆德如）；ＬｉＹｕｙａｎｇ（李育阳）（Ｉｎｓｔｉ...     

酵母菌重组白细胞介素2生物学活性鉴定

利用IL-2依赖细胞系CTLL检测酵母菌系统表达的人rIL-2生物活性。结果证实,酵母菌 rIL-2 能明显刺激 CTLL细胞的生长。用进口的 rIL-2作为标准,测定所表达的 rIL-2活性单位为 33u/ml。单克隆抗体中和实验证实,酵母菌 rIL-2 能特异地和天然 IL-2单抗结合,抑制其本身诱导的 CTLL细胞增殖。这种抑制是由 IL-2单抗参与的,因为鼠正常血清没有这种抑制作用。此外,经蛋白A 柱层析纯化后的单抗在 0.27μg/孔时就能表现明显地抑制,提示该抗原抗体反应的特异性和专一性。     

表达人卵泡抑素的毕赤氏巴斯德酵母工程菌的构建

目的在P.pastoris中分泌表达人卵泡抑素基因.方法采用PCR法扩增目的基因FS288片段,将其亚克隆入pPIC9,构建pPIC9-FS288,DNA序列测定验证后,将pPIC9-FS288采用BamHⅠ和SalⅠ双酶切,回收小片段,连接pPIC9K,构建重组分泌型表达载体pPIC9K-FS288,电穿孔法转化SMD1168,G418筛选多拷贝转化子,转化子发酵后,取上清液进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白表达.结果成功构建了重组分泌型表达载体pPIC9K-FS288和工程菌株SMD1168-FS288,SDS-PGAE显示工程菌发酵上清液在50 000 ～ 60 000处有弥散条带,并且与Western blot结果相符.结论工程菌SMD1168-FS288能分泌表达重组人卵泡抑素.     

酵母超氧化物歧化酶的初步研究

<正> 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase;简称SOD)是一种新型的酶制剂。自从McCord＆Fridovich于1969年发现以来,尤其是近年来,在国际上受到广泛的重视。经过各国科学家近廿年的研究,在各方面亦已取得许多进展。 SOD的生物学作用为清除在机体、细胞中所形成超氧离子(O_2~-),将有毒的超氧离子歧化成过氧化氢和分子氧,过氧化氢随后经体内的过氧化氢酶或过氧化物酶分解或利用掉,因而超氧离子的毒被解除。SOD可以治疗自身免疫性疾病、放射病、肺炎及水肿等。也可以用于     

寡核苷酸诱导的基因突变方法的改进及其应用

寡核苷酸诱导的基因突变技术因其精确高效而被广泛地应用于分子生物学、基因工程、特别是蛋白质工程的研究和实践中。本文简要介绍了该技术的原理和应用并着重反映这一方法近年来的进展。     

应用于微生物育种的一种快中子辐照方法

研究了用~9Be(d、n)反应产生的快中子吸收剂量的计算方法,设计了适用于微生物育种的快中子辐照装置和操作方法,经过包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等三十多个菌种的试验,获得增产5-80％的突变菌株的良好效果。     

λ基因组工程简介及其新进展

什么是λ基因组工程λ基因组工程(engineering of the ge-nome of the bacteriophage λ)就是在体内及体外定向改造λ DNA的一种生物技术。它是利用微生物遗传学和目前发展起来的高级细菌遗传学知识,生化手段将点突变,置换,插入,缺失等引入野生型及各种衍生型λDNA,或者将λDNA的某些片段引入其它来源的DNA(如质粒),以构成一个运载体使之携带外源DNA,并能转入敏感细胞得以扩增,以及再克隆与表达。可以说它是基因工程中的一项配套工程,随着这项工程的发展,由λDNA改造,或由λDNA片段参与