银杏叶提取物对酒精所致大鼠骨骼肌损伤的保护和治疗的作用

目的探讨银杏叶提取物(EGB761)对酒精所致大鼠骨骼肌损伤的保护及治疗作用。方法SD大鼠70只共分四组:对照组10只,酒精组20只,EGB20只,EGB预防+治疗组20只。流式细胞计数仪检测各组大鼠跖肌的细胞凋亡率,分光光度法检测丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的变化。结果与对照组相比,酒精组的细胞凋亡率、跖肌的MDA含量和iNOS活性升高,SOD和GSH-Px活性下降。EGB干预后,细胞凋亡率较酒精组下降,跖肌的MDA含量和iNOS活性降低下降,SOD、GSH-Px活性升高。EGB761预防配合治疗的效果优于单纯治疗的效果。结论EGB761对酒精所致大鼠骨骼肌损伤的保护及治疗作用的机制可能与其对骨骼肌细胞凋亡率,MDA,SOD,GSH-Px和iNOS的调节有关。     

一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究

目的通过对一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究,探索一氧化碳中毒迟发脑病的发病机制。方法筛选出急性中毒迟发记忆障碍小鼠,测其血CD61表达情况。结果急性一氧化碳中毒小鼠中有10%出现迟发记忆障碍,其血CD61的表达量明显高于对照组。结论血小板活化和血栓形成可能是迟发脑病的发病机制之一。     

反义c-met基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖侵袭的影响

目的:用构建的c-met反义质粒阻断肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)/c-met信号传导,探讨c-met信号传导阻滞对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:将c-met基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3·1中,酶切鉴定结果。用脂质体法将c-met反义基因转染人卵巢癌SKOV3细胞,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR检测转染前后SKOV3细胞中c-met、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)mRNA的表达,流式细胞仪检测转染前后SKOV3细胞中c-met和MMP-9蛋白阳性细胞数,应用细胞生长曲线和Boyden小室观察转染前后细胞的增殖和侵袭作用。结果:获得反向构建的c-met真核表达载体,c-met反义RNA转染卵巢癌细胞后,c-met和MMP-9mRNA分别减少0·24±0·03倍(P=0·001)和0·70±0·03倍(P=0·002);c-met和MMP-9蛋白阳性细胞率分别为(27·17±1·23)%和(17·32±0·46)%,较对照组(98·92±0·62)%和(36·47±2·94)%显著降低(P=0·000、0·007);卵巢癌细胞侵入基底膜的细胞数为4·5±1·5,较对照组(17±2·0)明显减少(P=0·000),细胞的增殖明显减慢。结论:c-met受体基因表达在卵巢癌生长和转移中起重要作用,阻断c-met的信号传导可以明显抑制卵巢癌细胞的增殖,降低肿瘤生长转移的能力,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

肝细胞生长因子对卵巢癌细胞侵袭作用的影响

肝细胞生长因子（HGF）与其受体c-met蛋白特异性结合，可激活多条信号传导通路的级联反应，促进细胞增殖、肿瘤血管形成、肿瘤细胞的侵袭等。为了解HGF对卵巢癌细胞浸润转移的促进作用及其对卵巢癌细胞核转录因子（NFKB）通路的传导作用，采用Boyden小室体外侵袭实验观察HGF对卵巢癌细胞株SKOV3细胞侵袭作用的影响，     

法舒地尔对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨法舒地尔对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 采用不同浓度的法舒地尔处理胃癌MGC-803细胞,检测细胞数目;选择无显著细胞毒性的3组浓度（10、25、50 μmol／L）法舒地尔进行后续实验,将经药物处理的胃癌MGC-803细胞作为处理组,而未经药物处理的胃癌MGC-803 细胞作为对照组;细胞培养0、24、48、72、96 h后,CCK-8法检测细胞增殖倍数;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Western blotting检测细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶14（MMP-14）和上皮间质转化（EMT）的标志蛋白波形蛋白（Vimentin）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示,法舒地尔以剂量依赖性的方式抑制胃癌MGC-803细胞的生长,法舒地尔浓度越高,处理组的细胞数量越少,增殖倍数明显降低（P＜0.01）;划痕实验结果表明,处理组伤痕愈合率明显较对照组降低,且法舒地尔浓度越高,处理组伤痕愈合率越低（P＜0.01）;Transwell结果显示,与对照组比较,处理组侵袭的细胞数目明显减少（P＜0.01）;与对照组比较,法舒地尔明显下调VEGF、MMP-9、MMP-14和Vimentin蛋白的表达水平,而上调E-cadherin蛋白的表达水平。结论 法舒地尔可抑制胃癌MGC-803细胞的的增殖、迁移和侵袭能力,降低MMP-9、MMP-14、VEGF表达水平,为胃癌的治疗研究提供新思路和理论基础。     

Doranidazole对结肠癌细胞的放射增敏作用

目的观察放射增敏剂-Doranidazole对结肠癌细胞的放射增敏作用。方法对5种人结肠癌细胞系施行2～50 Gy不同剂量放射线照射,照射后1～5 d检测细胞生长及死亡率,通过克隆形成实验绘制细胞存活曲线。从时间、剂量相关性、凋亡诱导等方面评价增敏效果。结果Doranidazole对照射后细胞的生长起到显著的抑制作用,其放射增感比为1.79;5种结肠癌细胞经30 Gy放射线照射后分别引起的18.7%、21.9%、16.7%、15.7%、19.5%的细胞死亡率,因Doranidazole的添加而增高至36.4%、33.8%、28.9%、22.2%、27.0%,并诱导了细胞的凋亡。这种增敏作用具有显著的时间和剂量相关性。结论Doranidazole对人结肠癌细胞系具有明确的放射增敏效果。     

一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠海马神经细胞凋亡的初步研究

[目的]通过对一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠海马神经细胞凋亡的研究，探索一氧化碳中毒迟发脑病的发病机制。[方法]筛选出急性中毒记忆受损恢复后又再一次出现记忆保持能力下降的迟发记忆障碍小鼠，测其海马神经细胞凋亡及其调控基因Bax、Bcl-2表达。[结果]急性一氧化碳中毒小鼠中有10％出现迟发记忆障碍，迟发记忆障碍小鼠血浆碳氧血红蛋白正常；其海马神经细胞凋亡显著增加（P〈0．01）；凋亡调控基因Bax／Bcl-2值增加（P〈0．05）。[结论]一氧化碳中毒小鼠迟发记忆障碍与其海马神经细胞凋亡具有相关性，神经细胞凋亡在迟发性脑病的发病机制中起着重要的作用。     

一氧化碳中毒诱导迟发记忆障碍小鼠白细胞表面黏附分子CD_(11)b/CD_(18)表达的研究

目的通过对一氧化碳(CO)中毒诱导迟发记忆障碍小鼠白细胞表面黏附分子CD11b/CD18表达,探索CO中毒诱发的迟发脑病发病机制。方法筛选出急性CO中毒后诱发的迟发记忆障碍小鼠,测其血白细胞表面黏附分子CD11b/CD18表达情况。结果迟发记忆障碍小鼠白细胞表面黏附分子CD11b/CD18的表达量明显高于对照组。结论 CD11b/CD18高表达可能是迟发脑病的发病机制之一。     

PTEN基因的克隆及其在HepG2细胞中的表达

目的克隆人抑癌基因PTEN全长cDNA,构建其真核表达载体并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法采用RT-PCR法从人正常肝组织中扩增PTEN全长cDNA,将之与pMD18-T Simple Vector连接、测序,获得PTEN基因。将该基因与pcDNA3·1( )载体连接,构建pcDNA3.1-PTEN真核表达载体。用该载体转染HepG2细胞,RT-PCR检测PTEN的表达。结果酶切和测序证实PTEN基因克隆和真核表达载体构建成功。HepG2-PTEN细胞中PTEN mRNA的表达显著高于未转染的HepG2细胞。结论人抑癌基因PTEN在人肝癌细胞系HepG2细胞中能够高效、稳定地表达,为其在肝癌基因治疗研究中的应用奠定了基础。     

肝细胞生长因子对卵巢癌血管生成因子的影响及信号传导途径

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对人卵巢癌SKOV3细胞血管内皮生长因子的影响及其信号传导机制。方法将不同浓度、不同作用时间的HGF和核转录因子(NFkB)抑制剂PDTC刺激培养的SKOV3细胞;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测卵巢癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的变化;采用蛋白印迹方法检测卵巢癌细胞VEGF蛋白和核蛋白NFkB的变化。结果HGF促进卵巢癌细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,且随时间和浓度增加作用增强,PDTC可以抑制HGF的刺激作用;HGF促进细胞核NFkB蛋白的活化,且随时间延长作用增强,于刺激1 h达高峰,PDTC可以抑制HGF对NFkB的活化作用。结论HGF通过NFkB途径在核酸和蛋白水平调节卵巢癌细胞分泌VEGF。