慢性粒细胞白血病bcr/abl的糖基化磷脂酰肌醇锚定修饰及在COS-7细胞膜上的表达

目的 构建与糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)锚定序列相连的bcr/abl真核表达质粒,并检测其在COS-7细胞中基因和膜蛋白的表达.方法 以编码慢性粒细胞白血病bcr/abl融合蛋白全长序列的migP210质粒为模板,通过PCR扩增获得654 bp的bcr/abl融合基因片段,双酶切后定向插入真核表达载体pBudCF4.1中,经鉴定获得重组质粒pBB.同时用RT-PCR扩增人外周血淋巴细胞CD24分子中的GPI获得约243 bp的锚定序列,双酶切后克隆人pBB质粒中与ber/abl基因下游羧基端相连,获得重组质粒pBBG.在多聚阳离子介导下将pBBG质粒转染COS-7细胞,采用RT-PCR和Western blot检测bcr/abl融合基因和蛋白的表达.结果 经酶切和测序鉴定证实,由GPI锚定连接的ber/abl融合基因插入片段正确;RT-PCR检测到转染细胞中有bcr/abl融合基因,Western blot检测到转染细胞膜上有hcr/abl融合蛋白的表达.结论 成功构建由GPI锚定修饰的bcr/abl重组质粒pBBG,并能在COS-7细胞膜上表达出bcr/abl融合蛋白.     

高原红雪茶对小鼠耐常压缺氧能力的影响

高原红雪茶产于云南海拔4000米以上的高山雪地,天然野生于落叶松、冷杉、藏黄柏树的树干,为寄生的丝状植物.在藏医药中入药,清心开窍,开水冲泡色如血红,叶体洁白如珊瑚状,品位纯正微苦,略带清香.本文通过对小鼠常压耐缺氧试……     

bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立

目的:构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病(CML)样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法:bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampe细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线(900cGy)照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果:小鼠移植8～9 wk后,外周血白细胞达2×1010～3×1010/L(为对照鼠的5～8倍),外周血涂片幼稚细胞达到0.10～0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4～5wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8～9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3～5 Ino后相继死亡.结论:成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究.     

新鲜全血重复测定差值法在血细胞分析质量控制中的应用

目的建立一种以病人新鲜全血为质控物的血细胞分析仪的质控方法。方法以Bayer ADVIA 2120血细胞分析仪为实验仪器．每天上午在配套质控物随标本测定后．选取20份结果合适的新鲜病人标本，下午重复测定1次（间隔6小时），连续检测10天，计算红细胞、白细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板前后2次检测结果的差值．将差值的均值和标准差定义为质控图的靶值和标准差．建立差值法Z分数质控图，再以Westgard质控规则连续17天监测病人新鲜全血标本，判断检测结果是否在控。结果除Hb发生1次失控外．差值法连续17天的质控结果均在控。结论差值法能作为仪器配套质控物8小时外质量控制的补充．该方法经济、方便．提高了检验报告的质量。     

化疗药物诱导白血病细胞凋亡及其机制

化疗是白血病治疗的主要手段,而诱导细胞凋亡则是化疗药物发挥作用的基础。本文总结了在化疗药物作用下,细胞内细胞骨架分子、信号传导通路中的激酶、抗凋亡分子、拓扑异构酶、神经酰胺、活性氧在诱导细胞凋亡中的作用。     

HnRNPE2 decoy RNA恢复C/EBPα活性诱导32D-P210的细胞粒系分化

目的：采用核不均一核糖核蛋白E2（hnRNP E2）decoy RNA靶向阻断CCAAT增强子结合蛋白alpha（C/EBPα）基因的异常翻译,诱导小鼠白血病样32D-P210细胞株向粒系分化,并进一步探讨其分子机制.方法：电穿孔法分别将野生型和突变型hnRNP E2 decoy RNA表达质粒转染入32D-P210细胞,经G418筛选出稳定株后,RT-PCR检测C/EBPa,粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）与髓过氧化物酶（MPO）基因的mRNA水平;WesternBlot检测C/EBPa,G-CSFR的蛋白表达水平;瑞氏染色观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）刺激前后细胞形态;流式细胞仪检测分化抗原Gr-1,CD11b的表达.结果：筛选到分别稳定表达野生型或突变型hnRNP E2 decoy RNA的TG细胞株和TGA细胞株.与未转染组32D-P210细胞相比,TG细胞株C/EBPa mRNA水平无改变,但42ku-C/EBPa蛋白、G-CSFR mRNA和MPO mRNA水平分别升高了（43.8±4.9）%,（69.1±3.2）%和（37.8±4.2）%（P〈0.05）;G-CSF刺激后,TG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞形态学特征;同时Gr-1分化抗原的表达率上升至40.3%,未转染组32D-P210细胞的Gr-1表达率5.5%（P〈0.05）;然而CD11b在3组细胞都是高表达,没有明显的变化（P〉0.05）;以上各参数在TGA细胞株与未转染组32D-P210细胞株间均无显著性差异（P〉0.05）.结论：hnRNP E2 decoy RNA能够诱导32D-P210细胞向粒系分化,其机制可能与decoy RNA特异性阻断hnRNAE2与C/EBPα mRNA非翻译区结合,调节C/EBPα mRNA翻译,恢复42ku-C/EBPα表达,上调其下游G-CSFR和MPO等分化基因的表达有关.G-CSF可加速这一作用从而促进32D-P210细胞的分化过程.     

重组蛋白转导域-寡聚化域-血凝素融合蛋白抑制慢性粒细胞白血病BaF3-P210细胞小鼠致瘤能力

目的:探讨重组蛋白转导域-寡聚化域-血凝素(protein transduction domain-oligomerization domain-hemagglutinin,PTD-OD-HA)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)BaF3-P210细胞小鼠致瘤能力的影响。方法:将BaF3-P210细胞和经40μmol/L PTD-OD-HA处理48h的BaF3-P210细胞分别经尾静脉注射入BALB/c小鼠体内,观察小鼠一般状况以及生存时间,计数外周血白细胞,外周血和骨髓涂片进行Wright-Giemsa染色,肝、脾和肺等各主要脏器组织进行HE染色,蛋白质印迹法检测小鼠骨髓细胞bcr/abl蛋白的表达。结果:BaF3-P210细胞组和经PTD-OD-HA处理的BaF3-P210细胞组小鼠CML发病率分别为90%(9/10)和80%(8/10),外周血白细胞计数分别为(44.3±4.8)×109/L和(20.6±3.2)×109/L(P<0.05),骨髓细胞中bcr/abl癌蛋白表达量分别为5.13±0.46和1.32±0.29(P<0.05),平均生存期分别为(101.3±6.2)d和(185.4±8.7)d(P<0.05)。Wright-Giemsa染色可见,经PTD-OD-HA处理的BaF3-P210细胞组小鼠骨髓、肝脏和脾脏中的白血病细胞浸润程度比BaF3-P210细胞组下降。结论:经PTD-OD-HA处理后的BaF3-P210细胞在BALB/c小鼠体内的致白血病潜能明显受到抑制。     

184例海洛因依赖者EPQ及染毒情况调查分析

采用国际通用的个性量表ＥＰＱ对１８４名海洛因药瘾者进行测查。结果与国内龚氏常模比较，发现药瘾者在Ｐ量表得分上显著地高于常模（Ｐ〈０．０５或〈０．０１）。该文还对药瘾者的有关情况也做了调查和结果分析。     

全血分析仪室内质量控制规则的选择与评价

目的为COULTERSTK全自动细胞分析仪选择满足临床质量要求的质控规则。方法以CLIA88能力比对验证为“允许总误差”对每项测定规定质量要求，确定各测定方法稳定操作下的不精密度或标准差、不准确度或偏倚，绘制操作过程规范图，画出操作点，通过评价候选质控方法的误差检出概率（Ped）和假失控概率（Pfr），选择质控规则。结果血红蛋白、白细胞、MCV、MCH使用1 3.5，质控规则（n=1）；红细胞、MCHC使用1a。质控规则（n=1）；红细胞压积使用1 2.5s质控规则（n=1）；血小板使用Westgard多规则（1 3s／2 2s／R 4s，／4 1s／1 03）（n=2）均可达到90％的Ped。白细胞低值标本不准确度较大（偏倚4．5％），采用1。。／2s／R4s／4 1s／8x多规则进行判断，n=2时Pfr为0．038，Ped为50％。结论通过操作过程规范图能够简便地选择满足临床检验所需要的质控规则和质控品测定的个数，使误差检出概率和假失控概率达到临床工作的要求。     

PTD-OD-HA融合蛋白对K562细胞中Bcr-Ab1的抑制作用观察

目的 探讨PTD-OD-HA融合蛋白转导K562细胞的动力学、定位及其与Bcr-Ab1定位的关系,以及对Bcr-Ab1寡聚化和Bcr-Ab1酪氨酸激酶活性的影响.方法 采用FITC标记PTD-OD-HA融合蛋白,观察蛋白转导K562细胞的效率与剂量和时间的关系,激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的定位,免疫共沉淀法检测融合蛋白与Bcr-Ab1的相互作用,Western blotting检测Bcr-Ab1的磷酸化水平.结果 PTD-OD-HA转导K562细胞呈剂量和时间依赖性.PTD-OD-HA定位于K562细胞胞质,与Bcr-Ab1共定位,且能与Bcr-Ab1蛋白相互作用,进而干扰Bcr-Ab1同源寡聚化,并可降低Bcr-Ab1的磷酸化水平.结论 在K562细胞中,PTD-OD-HA融合蛋白能有效抑制Bcr-Ab1同源寡聚化及磷酸化水平.