肿瘤坏死因子-α在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在前列腺癌组织中的表达,探讨其与前列腺癌临床病理特征和肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组织化学二步法检测2010年1月-2012年1月20例前列腺增生组织、50例前列腺癌组织中TNF-α蛋白和CD105的表达情况,并计数CD105标记的微血管密度(MVD)。结果免疫组织化学结果显示TNF-α在前列腺癌组织的肿瘤细胞膜及细胞质中表达较高(41.72±8.67),而在前列腺增生组织中表达较低(21.01±3.85),差异有统计学意义(t’=13.990,P<0.001);CD105在前列腺癌中阳性染色定位于肿瘤微血管内皮细胞膜表达较高(20.15±2.67),而在前列腺增生组织中表达较低(4.34±1.67),差异有统计学意义(t’=29.771,P<0.001)。TNF-α和CD105的表达与患者年龄、肿瘤大小无关,与前列腺癌的临床分期呈正相关(rs=0.847,P<0.001;rs=0.776,P<0.001),与病理分级呈负相关(rs=-0.769,P<0.001;rs=-0.842,P<0.001)。结论前列腺癌组织中存在TNF-α的高表达,其可能在前列腺癌的血管生成和肿瘤的发生、发展中起重要作用。     

泛素结合酶基因生物信息学与功能分析

目的：生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S（ ubiquitin-conjugating enzyme 2S, UBE2S）生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料,从构建的cDNA文库基因组中筛选和克隆了UBE2S基因。利用NCBI的BLAST在线分析工具分别对GenBank的非冗余核酸数据库和非冗余蛋白质数据库序列进行比对分析;采用NCBI ORF finder在线分析工具预测开放阅读框;利用ExPASy在线工具ProtParam统计基因中各种氨基酸含量,并预测理论分子量和等电点;应用ProtScale程序进行蛋白质的疏水性分析;蛋白质亚细胞定位采用在线工具（ nibb．ac．jp／form．html）预测,通过NCBI数据库GenBank分析蛋白质保守结构域;采用Protfun在线工具预测UBE2S的功能分类;采用同源模型服务软件SWISS-MODEL预测UBE2S的三维结构;采用MEGA5．05软件进行系统进化树的构建。结果 UBE2S基因编码241个氨基酸,预测相对分子质量为23770,理论等电点为8．81。跨膜结构域分析表明,UBE2S蛋白不含跨膜位点;亚细胞定位预测,UBE2S蛋白具有生长因子、离心通道、结构蛋白功能的概率为8．904、0．313和0．291。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他12个物种的相似率为90％～97％,且符合种属之间的进化关系。结论 UBE2S蛋白结构和功能的分析不仅丰富了其家族基因信息,还将为后续肝癌发生发展的分子机制实验研究奠定基础。     

前列腺癌组织中AQP_1的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的检测水通道蛋白-1（aquaporin-1,AQP1）和CD105在前列腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组化二步法检测23例前列腺增生组织、52例前列腺癌组织中AQP1蛋白和CD105的表达情况,并计数CD105标记的微血管密度。结果 AQP1在前列腺癌组织阳性表达率明显高于前列腺增生组织（71.15%vs 28.85%）。前列腺癌组织中MVD明显高于前列腺增生组织（20.13±2.84 vs 5.32±1.73,P〈0.01）。AQP1阳性组的MVD明显高于阴性组,两者密切相关。AQP1蛋白表达和MVD与患者年龄、肿瘤大小无关,而与肿瘤分化程度及临床分期呈正相关系。结论结果提示前列腺癌中存在AQP1的高表达,其与CD105可能在前列腺癌的发展过程中起重要作用,两者结合可能成为前列腺癌病变生物学行为的重要指标。     

槲皮素干预下HBx基因对人肝癌细胞侵袭、迁移、增殖的影响

目的探讨槲皮素（quercetin）对人肝癌HepG2细胞及稳定转染HBX基因的HepG2细胞（HepG2-X）增殖、侵袭力的影响，并探讨其可能的机制。方法体外培养HepG2及HepG2-X细胞，分别加入10，20，40，80μmolfL槲皮素进行处理后，用MTT实验检测细胞增殖抑制率，采用涂有Matrigel胶的Transwell小室模型对传代培养的HepG2细胞进行体外侵袭力检测。结果不同浓度槲皮素均能够抑制HepG2、HepG2-X细胞的增殖，且呈时间和剂量依赖性，各HepG2-X组细胞A值均明显高于HepG2细胞（P〈O．05），HBX对HepG2细胞具有促进增殖作用。Transwell试验结果显示，与空白对照比较，槲皮素处理组HepG2细胞侵袭能力明显下降，且呈浓度依赖性。结论槲皮素能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭力，HBx在槲皮素的干预下能促进HepG2细胞的增殖作用。     

前列腺癌组织中AQP1的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的检测水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP1)和CD105在前列腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组化二步法检测23例前列腺增生组织、52例前列腺癌组织中AQP1蛋白和CD105的表达情况,并计数CD105标记的微血管密度。结果 AQP1在前列腺癌组织阳性表达率明显高于前列腺增生组织(71.15%vs 28.85%)。前列腺癌组织中MVD明显高于前列腺增生组织(20.13±2.84 vs 5.32±1.73,P<0.01)。AQP1阳性组的MVD明显高于阴性组,两者密切相关。AQP1蛋白表达和MVD与患者年龄、肿瘤大小无关,而与肿瘤分化程度及临床分期呈正相关系。结论结果提示前列腺癌中存在AQP1的高表达,其与CD105可能在前列腺癌的发展过程中起重要作用,两者结合可能成为前列腺癌病变生物学行为的重要指标。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制。方法用(12.5、25.0、50.0)ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达。结果各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P>0.05)。结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡。     

腺苷酸活化蛋白激酶激活与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的：研究腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活与卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。方法：以不同浓度的顺铂（0,3.125,6.25,12.5,25,50 μmol·L^-1）分别作用人卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3/DDP 24 h,MTT法检测顺铂的抑制率;透射电镜检测SKOV3和SKOV3/DDP中的自噬体;流式细胞术检测顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP的凋亡率;Western blot法测定基础状态下及顺铂单独或联合AMPK抑制剂compound C作用时,SKOV3和SKOV3/DDP中p-AMPK、自噬微管相关蛋白轻链3（LC3-Ⅱ）和凋亡蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）的表达差异;并测定compound C联合顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP时的细胞活性。结果：与SKOV3比较,SKOV3/DDP对顺铂耐药（RI=6.8）;SKOV3/DDP中自噬体明显增多（P<0.01）;顺铂对SKOV3/DDP早期凋亡率（7.0±0.55）%远低于SKOV3早期凋亡率（30.5±0.34）%（P<0.01）;SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达量均增加,顺铂作用时Cleaved-PARP表达不明显;compound C与顺铂同时作用时,SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达减少,Cleaved-PARP表达水平显著升高,且SKOV3/DDP对顺铂敏感性增加。结论：SKOV3/DDP中p-AMPK的激活诱导卵巢癌细胞自噬可能导致其对顺铂耐药,compound C抑制p-AMPK的激活,与顺铂同时作用促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡,且增加其对顺铂的敏感性。     

HBV抗原肽冲击的DC对慢性乙型肝炎及HBV携带者的免疫治疗作用

目的:观察HBV抗原肽冲击的自体树突状细胞对慢性乙型肝炎(CHB)及HBV携带者的疗效及安全性.方法:HBV抗原肽致敏的树突状细胞,经培养后回输给患者,总疗程6 mo,分为:密集治疗期(第1-3月),10-20 d为1个周期;巩固治疗期(第4-6月),30 d为1周期.临床疗效跟踪期(第7-12月);远期疗效观察期(第13-24月).首次治疗前行高通量HBV变异基因检测,每次治疗前、后检查HBV-M,HBV DNA,血尿常规、肝功能、肾功能、肝胆胰脾B超及血HBV DNA载量.结果:384例慢性HBV感染患者中,发生C区变异最多:58例(15.1%);HBeAg(+)CHB 134例中,分别有58例(43.3%)、21例(15.7%)、75例(55.6%)发生单项病毒学、血清学及生化学应答;HBeAg(-)慢CHB 102例中,分别有40例(39.2%)、53例(52%)发生单项病毒学及生化学应答:81例慢性HBV携带者中,28例及33例分别发生病毒学、血清学应答.1年时,完全应答112例(29.2%),2年时,完全应答124例(32.4%);与治疗前相比HBsAg、HBeAg及血清HBV DNA载量均发生显著性的变化(2484.39±185.2 ng/L vs 1616.28±169.81 ng/L;32.1±5.78 ng/L vs 69.9±7.61 ng/L;0.08±1.78×108copies/L vs 1.79±1.21×108copies/L,P<0.05或0.01);治疗期间及结束后,无严重不良反应发生.结论:HBV抗原肽冲击的树突状细胞可用于CHB的治疗,疗效及安全性确切.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制。方法用(12.5、25.0、50.0)ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达。结果各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P0.05)。结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡。     

迷迭香酸干预下HBX基因对人肝癌细胞凋亡的影响

目的研究迷迭香酸(Rosmarinic acid)对人肝癌HepG2细胞及稳定转染HBx基因的HepG2细胞(HepG2-X)增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养HepG2及HepG2-X细胞,加入不同浓度用迷迭香酸处理后,用MTT实验检测细胞增殖抑制率,用细胞划痕和Transwell小室法测定对细胞迁移力的影响。结果不同浓度迷迭香酸均能够抑制HepG2、HepG2-X细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,各HepG2-X组细胞A值均明显高于HepG2细胞(P<0.05),显示HBX对HepG2细胞具有促进增殖作用。与对照组相比,实验组细胞划痕愈合减缓(P<0.05),Transwell穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。且呈浓度依赖性。结论迷迭香酸能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭力,HBx在迷迭香酸的干预下能促进HepG2细胞凋亡的作用。