大鼠Mecp2基因的RNA干扰有效序列筛选

目的:以RNAi技术寻找抑制大鼠Mecp2基因表达的有效序列.方法:首先构建大鼠Mecp2基因与红色荧光蛋白(RFP)的融合基因表达质粒,然后分别与针对大鼠Mecp2基因的4个备选小干扰RNA(siRNA, small interference RNA)共转染HEK293T细胞,构成外源基因系统,以此对于4个备选的siRNA对大鼠Mecp2基因的抑制有效性进行筛选.然后将筛选到的有效序列siRNA转染自身表达大鼠Mecp2基因的PC12细胞,以免疫荧光染色显示大鼠Mecp2蛋白的表达情况,通过内源大鼠Mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的RNA干扰有效性.结果:针对大鼠Mecp2基因mRNA 918～936位核苷酸的siRNA(序列:5′-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3′)是对大鼠Mecp2基因进行RNA干扰的有效序列.此有效siRNA序列所在的位置相当于大鼠Mecp2基因第4外显子,推测可同时抑制大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的表达.且此靶序列位于大鼠Mecp2基因编码区,推测可同时抑制1.9 kb和10 kb的大鼠Mecp2基因mRNA的表达.结论:本研究为建立稳定的大鼠神经元Mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中Mecp2基因的功能打下了基础.     

新生儿缺血缺氧性脑病血液酸碱失调的分析与处理

纠正酸碱失调是新生儿缺血缺氧性脑病 (ＨＩＥ)综合治疗中的重要措施之一 ,酸碱失调直接影响机体内环境的稳定和各脏器功能的正常运转。现将本院 1 996～ 2 0 0 0年收治的 50例ＨＩＥ患儿的酸碱失调特点进行分析。1　材料与方法1 1　研究对象　 50例ＨＩＥ病例的临床诊断及分度依据中华医学会儿科学会新生儿学组 ( 1 996年 1 0月杭州修订 )标准。选择在生后 3日内住院的病例 (生后 2 4小时住院者占 80 % ) ,入院时平均日龄为 1 8 8小时。ＨＩＥ轻度 7例 ,中度 3 3例 ,重度 1 0例。 50例中有 5例伴有湿肺 ,羊水吸入等呼吸道并发症。全部病例…     

Rett综合征与MECP2基因

Rett综合征是一种严重影响儿童精神运动发育的神经遗传病，诊断主要依靠国际上根据临床表现制定的标准，包括典型和非典型Rett综合征两类。该病的遗传方式尚无定论。致病基因是位于染色体xq128的MECP2基因，编码甲基化结合蛋白2。推测致病机制为MECP2基因突变导致蛋白结构和功能异常，使胚胎发育时期应当转录静止的基因继续转录，而这种“转录噪音”对神经系统的生长和发育具有致病作用。典型Rett综合征患儿MECP2基因主要有8种热点突变。MECP2基因作用的下游靶基因尚不清楚。     

Rett综合征与MECP2基因

Rett综合征是一种严重影响儿童精神运动发育的神经遗传病 ,诊断主要依靠国际上根据临床表现制定的标准 ,包括典型和非典型Rett综合征两类。该病的遗传方式尚无定论。致病基因是位于染色体Xq2 8的MECP2基因 ,编码甲基化结合蛋白 2。推测致病机制为MECP2基因突变导致蛋白结构和功能异常 ,使胚胎发育时期应当转录静止的基因继续转录 ,而这种“转录噪音”对神经系统的生长和发育具有致病作用。典型Rett综合征患儿MECP2基因主要有 8种热点突变。MECP2基因作用的下游靶基因尚不清楚。     

发育中Wistar大鼠大脑皮层甲基化结合蛋白-2基因表达变化

目的:研究甲基化结合蛋白-2(methyl-CpG-binding protein 2,mecp2)基因在发育中正常Wistar大鼠大脑皮层表达水平的变化.方法:应用实时定量PCR(real-time PCR),Northern印迹杂交对mecp2基因在正常Wistar大鼠发育的不同阶段:胚胎第15天(E15)、第17天(E17)、第19天(E19)、出生当日(P0),生后第7天(P7)、生后第14天(P14)、生后第28天(P28),成年期大鼠mRNA的表达水平进行定性、定量分析;应用Western印迹杂交对MeCP2的表达水平进行半定量分析.结果:mecp2基因是在正常Wistar大鼠大脑皮层中表达的mRNA,约为10kb.从胚胎至成年期的发育过程中,mecp2基因mRNA的表达虽有波动,但差异无显著性.mecp2基因在正常Wistar大鼠大脑皮层中仅表达一种MeCP2,相对分子质量为75 000.在不同发育阶段其表达水平表现为,胚胎E15表达水平最低,自胚胎E19始至成年期MeCP2表达水平较E15明显增高.生后第7日至成年期,各时间点间表达水平的变化差异没有显著性.结论:随着正常Wistar大鼠大脑皮层神经元的发育成熟,MeCP2的表达水平逐渐增高,说明MeCP2对神经元的成熟有重要作用,并可能与维持神经元的成熟状态有关.     

系统性红斑狼疮自身抗体的研究

系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosis,SLE)是一种典型的自身免疫性疾病。其特点是免疫调节性T细胞的功能缺陷和B细胞的高反应性。无论哪一方面的缺陷都会导致各种自身抗体的产生。一、SLE的自身抗体的种类 1.抗核抗体(ANA)泛指一类抗各种核成分的抗体,几乎所有活动性SLE都能查出ANAs。因此对于SLE,尤其是处于活动期,缺乏ANAs几乎可排除SLE。由于试验的误差,单独计数滴度的价值