负性调节葡萄糖转运对糖尿病小鼠视网膜微血管病变的抑制作用

目的 观察通过抑制视网膜上葡萄糖转运蛋白1 (glucose transporter-1,GLUT1)表达而减少葡萄糖转运进入视网膜对糖尿病小鼠微血管病变的影响.方法 36只8周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组、糖尿病对照组和GLUT1小干扰核糖核酸(siRNA)治疗组,每组12只.腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型后,GLUT1siRNA组予以玻璃体腔注射1μL靶向GLUT1的siRNA,正常对照组和糖尿病对照组注射等量非靶向性siRNA.建模成功后第21周,对3组小鼠行免疫印迹法检查视网膜GLUT1的表达并测定比较视网膜的含糖量,通过测定视网膜ICAM-1和TNF-α的表达及检查视网膜血管白细胞黏滞和血-视网膜内屏障渗漏以比较微血管病变程度.结果 GLUT1siRNA组GLUT1在神经视网膜层的表达较正常对照组表达约下降77.00％,仅为糖尿病对照组的8.07％,差异有统计学意义(P＜0.01).尽管糖尿病对照组和GLUT1siRNA组视网膜组织含糖量均高于正常对照组,但GLUT1siRNA组小鼠视网膜含糖量为糖尿病对照组的50.05％,差异有统计学意义(P＜0.01);糖尿病对照组和GLUT1siRNA组小鼠视网膜ICAM1和TNF-α的表达均高于正常对照组(P＜0.01),但这两个炎症因子在GLUT1siRNA组表达仅分别为糖尿病对照组的66.14％(P＜0.05)和54.76％(P＜0.01);同时我们发现糖尿病对照组较GLUT1siRNA组有更多的白细胞黏附在视网膜血管中,视网膜铺片发现糖尿病对照组较GLUT1siRNA组其荧光渗漏区域较多,且渗漏面积也较大.结论 GLUT1 siRNA通过抑制GLUT1表达,限制葡萄糖转运进入视网膜,从而降低视网膜含糖量,减轻了糖尿病视网膜的炎症反应和血-视网膜内屏障渗漏,对糖尿病视网膜病变可产生缓解作用.     

人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对PI3K-Akt信号通路的调控作用

目的　探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路的调控作用。方法　利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼（实验眼）近视模型，右眼为对照眼，采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184以及PI3K-Akt信号通路相关mRNA的表达水平，采用Pearson相关分析豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR) mRNA表达水平的相关性。体外培养人巩膜成纤维细胞，并分为对照组（mimics对照组）、高表达组（转染miR-184 mimic）、低表达组（转染anti-miR-184）和PI-103组（加入PI3K通路抑制剂PI-103）。采用Western blot检测各组人巩膜成纤维细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达水平，流式细胞检测技术检测细胞增殖，Annexin V-FITC染色观察细胞凋亡。结果　豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均明显低于对照眼(均为P<0.05)，且实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈正相关性(均为P<0.05)。体外实验中，培养24 h、48 h、72 h、96 h时，高表达组人巩膜成纤维细胞增殖倍数>对照组>低表达组>PI-103组；培养24 h 时，4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数比较差异无统计学意义（P>0.05）；培养48 h、72 h、96 h时，4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数整体比较以及组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。培养24 h时，4组人巩膜成纤维细胞凋亡率差异有统计学意义（P<0.05），PI-103组>低表达组>对照组>高表达组，组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。培养72 h时，4组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平差异均有统计学意义（均为P<0.05），高表达组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平>对照组>低表达组>PI-103组，组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　近视眼的发生、发展与巩膜组织中miR-184表达下调有关，其作用机制可能为miR-184表达下调导致PI3K-Akt信号通路调控受阻，进而抑制巩膜成纤维细胞增殖以及促进细胞凋亡。