骨髓移植配型中HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术的应用

ＨＬＡⅡ类基因是位于人类第 6号染色体短臂远端的一组高度多态的基因 ,主要包括ＨＬＡ ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ3个亚区[1] 。ＨＬＡⅡ类基因配型对提高异基因骨髓移植存活率 ,减少ＧＶＨＤ ,具有重要意义[2 ] 。既往ＨＬＡⅡ类分型采用血清学微量淋巴细胞毒试验 ,近年国外实验室已转向基因分型 ,并已将其列为常规。我们采用序列特异性引物 (ＳＳＰ)ＰＣＲ技术对ＨＬＡ ＤＲＢ1,ＤＱＢ1进行基因分型 ,快速简便 ,报告如下。1　材料与方法1 1　样本　原山东医科大学附属医院提供 2 2名拟行骨髓移植的恶性血液病患者及相关供者样本。1.2　ＤＮＡ提取…     

罕见DRB1~*13-DQB1~*05单倍型家系1例

患者，男，37岁，因多发性骨髓瘤，于2003年3月及4月，携其父母妻女儿及2位同胞兄弟，来本中心要求做骨髓移植HLA配型。     

“Ⅱ号血清”抗休克的实验观察及在灼伤治疗中的应用

严重灼伤的早期,由于创面大量渗液,有效血循环量减少而发生休克。在防止和减少灼伤后液体渗出的方法广泛应用临床之前,静脉补液治疗严重灼伤休克仍为主要措施之一。所补液体包括:胶体,晶体,水份等。在胶体液中,从丢失液体的成份和灼伤后血液浓缩情况看,血浆为     

用PCR-SSP技术检测弱D型RHD基因1例

RhD抗原(ISBT004.001;RH1)是一种由RhD蛋白携带的非常重要的血型抗原,是引起新生儿溶血病的最主要原因［1］。极少数人红细胞的D抗原表达数目减少,被称之为弱D(以前叫作DＵ),在白种人中的比例为0.2%～1%,在黄种人中的比例则更低。一部分弱D被解释为RhD蛋白的质的变化,称之为部分D,通常是由RHD／RHCE杂化基因引起,另一部分弱D是由Cde单倍体反式位置的抑制作用引起,这些弱D可能有正常的RHD基因,其RhD抗原表达只是微量减少,被宽松地称之为高级DＵ,现在常被定为正常的RhD。最近笔者发现1名供血者红细胞为弱D型,且实验结果显示弱D型具有独特的基因结构,现报告如下。 1 对象与方法 1.1 研究对象献血者,男,21岁,汉族,在校学生,来本中心献血时被确定为弱D;阴阳性对照血样亦均取自本中心献血者,民族为汉族。 1.2 序列特异性引物针对RHD和RHCE基因之间最具差异的区段设计多对不同引物,特异性地扩增RHD基因的第2～7,9,10外显子和RHCE基因的第1,2,4,5外显子,以及RHD和RHCE基因的第4内含子(表1)。另以人类生长激素(HGH)基因序列特异性引物作为内对照引物,扩增片段为429bp(以上引物均由美国G&T公司合成、纯化及鉴定)。 1.3 基因组DNA的制备使用美国G&T公司基因组DNA抽提试剂盒,采用盐析法从供血者外周血分离获得。0.3ml EDTA抗凝外周血加入1 ml红细胞裂解液,离心弃上清,沉淀加入170μl核裂解液及4μl SDS,剧烈振荡,再加入72μl NaCl溶液,10000r/min离心5min,取上清加入210μl异丙醇沉淀DNA,将DNA溶于100μl TE溶液中,保存待用。 1.4 特异性PCR扩增反应体系11μl,含1μl DNA,8μl引物混合物,1U Taq酶。扩增条件为95℃预变性5min,95℃变性30s,60℃退火30℃s,72℃延伸90s,30循环。PCR产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测,电泳时间为25min。     

经输血传播的肝炎病毒研究进展

经血液传播的病毒（Transfusion Transmitted Virus，TTV）是日本学Nishaizawa运用代表性差异技术（Representation difference analysis，RDA）从一名非甲-非庚型输血后肝炎患血清中克隆出一株编号为N22的、长约500bp的DNA序列。经测序分析，该基因片段两端有Sau3AⅠ酶切位点序列（GATC）。经与DDJB基因序列数据库中序列比较，发现与所有报道的核酸序列无同源性，也并非来自宿主基因DNA，证实是一种新的病毒基因序列。随后我国及英美等国的学相继对此病毒做了大量研究。综述如下。     

中国汉族群体RhD—（—）个体D基因和CED基因外显子多态性研究

Rh血型系统是继ABO血型之后临床意义最大的一个血型系统,也是最复杂的血型系统之一。最新的分子生物学研究表明,RhD阳性个体的Rh基因座位是由RHD和RHCE两个结构基因组成［1］,这两个基因均含有10个外显子,而RhD(－）个体仅有一个RHCE基因［2］。值得注意的是RhD基因结构存在种族差异,东方人、非洲黑人RhD(－)个体与高加索人种 RhD (－)个体的基因结构存在明显的差异［3,4］。笔者用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法特异性地扩增100名中国汉族RhD（－)个体的RHD基因,以探讨中国汉族RhD(－)个体的D基因结构,并与其他民族进行比较。     

50例Rh新生儿溶血病血清抗体调查

<正> 1980～1992年,我们对3266例围产期孕妇及一些疑有新生儿溶血病(HDN)的产妇进行IgG抗体水平检测,其中50例确证为Rh系统抗体,Rh抗体检出率为1.53％。现报告如下。1 调查对象与方法1.1 调查对象 采集夫妇血标本检查。50位存在Rh系统抗体的妇女年龄22～39岁,平均30岁;胎次1～2胎,平均3.72胎;有输血史者12人;血型为B型16人,O型12人,A型及AB型各11人;Rh阴性35人,Rh     

免疫疗法在原因不明习惯性流产中的应用

随着免疫学的发展，习惯性流产与免疫因素的关系日益受到重视。自然流产连续3次以上称为习惯性流产，习惯性流产包括原因不明的习惯性流产(unexplained repeated or recurrent spontaneous abortion，URSA)以及染色体及内分泌异常、遗传病、自身免疫病、抗磷脂抗体阳性、血型不合、子宫畸形等所造成的流产。其中原因不明的流产占70％     

山东淄博地区汉族人群HLA-A、B、DRB1基因频率调查

目的 调查山东淄博地区汉族人群HLA基因多态性的分布。方法 采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）方法,对HLA-A、B、DR位点进行低分辨基因分型;用直接计数法进行抗原频率和基因频率计算。结果 得到一组抗原频率和基因频率资料。结论 山东淄博地区汉族人群HLA基因具有多态性,PCR-SSP方法进行HLA分型的结果准确可靠。