小鼠胚泡着床相关基因的差减筛选

目的:筛选新的小鼠胚泡着床相关基因。方法:对孕4.5 d小鼠着床和非着床位点的子宫内膜组织进行PCR差减。获得了2个新的在小鼠胚泡着床位点高表达的EST(EST8和EST81)。结果:EST8在孕4.5 d小鼠着床位点、肝脏中表达较高,在非着床位点和卵巢中亦有微量表达。EST81主要在孕4.5 d小鼠子宫着床组织和卵巢中表达,其它各种组织中也有微量表达。用PCR方法获得了相应的全长。cDNA,长度分别为1665bp和1364bp。结论:用差减筛选获得的两种cDNA是孕小鼠着床相关基因,其功能有待进一步研究。     

人输卵管蛋白全长cDNA克隆及真核细胞中的表达

目的:克隆人输卵管蛋白(hOviductin)全长cDNA序列,真核细胞中表达,并了解hOviductin是否与大鼠卵母细胞结合。方法:构建人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库,以~(32)P标记的兔输卵管蛋白全长cDNA序列为探针,自文库中筛选hOviductin全长cDNA序列。将获得的hOviductin编码区cDNA序列插入pEGFP-N1真核表达载体,转染HeLa细胞,表达分泌重组的绿色荧光蛋白(EGFP)-hOviductin,并估量其浓度。激光扫描共聚焦显微镜下观察EGFP-hOviductin与大鼠卵巢的卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)或去除透明带后的裸卵的结合情况。结果:所构建的cDNA文库重组率为98.5％,滴度为1.1×10~6pfu/mL。克隆所得hOviductin全长cDNA约为2500 bp,Gen-Bank的登录号为AY189737。EGFP-hOviductin在条件培液中的浓度为0.236 nmol/L,能结合在去透明带的大鼠裸卵质膜外表面,而未见其与COC结合。结论:hOviductin能在HeLa细胞中表达分泌,其分泌产物可结合于大鼠裸卵质膜外表面。     

小檗碱对糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖转运体IV基因表达的影响

许多研究显示,中药黄连具有降低正常大鼠、糖尿病大鼠和糖尿病患者血糖的作用。黄连中的主要有效成分小檗碱,具有同样的作用,但对于它们的作用机理尚未完全明了。本实验观察了小檗碱对链脲佐菌素(STL)糖尿病大鼠糖代谢和骨骼肌中葡萄糖转运体 IV(GLUT4)基因 mRNA 表达的影响。材料和方法1 动物 2月龄雄性 SD 大白鼠共18只,体重180g～220g,由上海医科大学动物部提供。2 药物小檗碱由上海利生制药厂惠赠,按每100ml 蒸馏水中加入1g 小檗碱配制成1%小檗碱悬浮液。3 试剂 STZ 为美国 Sigma 公司产品;含大鼠全长 GLUT4c-DNA 的 Bluescribe 重组质粒由美国华盛顿大学 Mueckler Mike 教     

Study on the Function of Rabbit Oviductin"DPF-1" by Using Loss of Function Analysis

Some oviduct-specific secretory proteins were assumed to play an important-biological role in early embryo development.In 1 989,Bleau and St.Jacquessuggest-ed these oviduct-specific glycoprotein be called“Oviductins”.In our recent studies,we have gained“loss of function”evidence to prove that the rabbit64k D oviductin( named temporarily developmentpromoting factor-1 ,DPF-1 ) functioned in overcom-ing the developmentblock of early embryo in vitro.Judged by itsbiochemicaland bi-ological c…     

用同源重组法构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库的探索

目的探索卵巢成熟及明确早胚发育过程中,构建小鼠卵母细胞cDNA文库筛选所涉及的相互作用蛋白。方法利用SMART技术,构建酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互作用的靶分子成分为目的,构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。采用Stratagene RNA prepkit抽提500枚卵母细胞总RNA,应用线性化载体pGADT7-Rec在体构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。结果文库的滴度为3.7×106,重组片段大小主要集中在0.6-0.9kb,重组率为60%。结论所构建的小鼠卵母细胞cDNA文库可用于酵母双杂交筛选。     

电动按摩器诱导大鼠假孕

大鼠广泛用于生殖生物学研究。假孕大鼠则为人类计划生育、生物工程、生殖生物学等研究中必不可少的动物模型之一。造成假孕的方法可分为两大类:第一类,借助于雄鼠“无效”交配刺激,诱发雌体假孕,即事先使雄体的精子活力下降或生精过程发生障碍,或使精液中没有精子然后行“无效”交配。本法缺点较多,如需要用较昂贵的化学药品,或需施行输精管结扎术。第二类,利用物理方法刺激大鼠阴道诱发假孕,操作方便,费用低廉。但目前已报道的物理方法其假孕成功率往往达不到100％,每天须阴道涂片检查以判别大鼠是否假孕,结果,不但费时且有可能造成植入胚胎的早期流产。为此,本文作者经多次实验,筛选出一种经改装的国产电动按摩器,刺激大     

二甲双胍对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的影响

观察二甲双胍对ＳＴＺ糖尿病大鼠血糖和骨骼肌中葡萄糖转运体Ⅳ（ＧＬＵＴ４）基因表达的影响。方法ＳＴＺ糖尿病大鼠每公斤体重１００ｍｇ／ｄ二甲双胍灌胃治疗３周后，斑点杂交测定骨骼肌中的ＧＬＵＴ４ｍＲＮＡ含量。结果糖尿病治疗组的血糖降低３０．３％，较非治疗组低２８．６％，而骨骼肌中ＧＬＵＴ４ｍＲＮＡ含量较非治疗组高６５．６％。结论二甲双胍促进骨骼肌中ＧＬＵＴ４基因表达可能是其降低ＳＴＺ糖尿病大鼠血糖的机制之一。     

具生殖系嵌合能力的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的建立

目的:建立能实现种系传递的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系。方法:从C57BL/6J小鼠3.5d的囊胚中分离培养内细胞团。经体外适宜培养建系后,将C57BL/6J胚胎干细胞(ES)注入ICR小鼠受体囊胚腔,制备嵌合体小鼠。结果:成功地建立了3个C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系,该C57BL/6JES细胞呈集落状生长,正常稳定的核型率>80%,具高水平的磷酸酶活性,并表达ES细胞特殊性细胞表面标记SSEA-1,不表达SSEA-3和SSEA-4;体内外的分化实验也证实mC57ES1具向三胚层组织分化的能力。经显微注入ICR小鼠囊胚腔中,产生4只嵌合体小鼠,经证实其中1只为种系嵌合小鼠。结论:建立了能实现种系传递的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系,该系的ES细胞可用于今后制备转基因动物和基因敲除动物。