利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因

目的：利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因。方法：采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM—TEasyVector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息。结果：扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4个,ESTs2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个。结论：成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因。     

因子Ⅶ缺乏伴内源凝血障碍一例

患儿,男,12岁。因右踝关节疼痛、肿胀,伴局部发热,活动受限,于1995年4月27日入院。患儿自幼发生无明显诱因的鼻衄、牙龈出血。踝、肘关节均有过出血、肿胀,伴局部发热史,与外伤有关或自发,出现功能障碍。曾行右踝、膝关节手术,抽出     

利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因

目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因.方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM-T Easy Vector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆.将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4 个,ESTs 2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个.结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因.     

研究生实验教学改革中的分子生物学教学实验设计

对研究生的医学细胞分子生物学课程教学进行了改革实践,以期取得良好的效果。本文从实验教学改革中的分子生物学实验部分,就具体实验设计思路、实验实施方法、实验设计内容以及实验结果评价等几方面进行了陈述与讨论。     

含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体的构建和鉴定

目的：利用 pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector（简称为pmirGLO 报告基因载体）构建并鉴定含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体 mRNA 3′UTR 区报告基因载体（pmir-Insr-3′UTR 及 pmir-mutant-Insr-3′UTR）。方法以大鼠肝脏 cDNA为模板,PCR 获取目的片段（即含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体 mRNA 3′UTR区）;用PmeI、XbaI双酶切 pmirGLO 报告基因载体和含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体 mRNA 3′UTR区,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pmir-Insr-3′UTR及 pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中均插入目的片段;DNA测序结果进一步证实 pmir-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了胰岛素受体mRNA 3′UTR区,pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了在miR-497结合位点含有3个突变碱基的胰岛素受体 mRNA 3′UTR 片段。结论成功构建了含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR报告基因载体 pmir-Insr-3′UTR及 pmir-mutant-Insr-3′UTR。     

蛋白精氨酸甲基转移酶在E3大鼠哮喘模型中表达变化的研究

目的 观察1～6型蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMTs)在E3大鼠急性哮喘模型肺脏和脾脏中的表达变化.方法 构建卵清蛋白诱导的E3大鼠急性哮喘模型,分为对照组和哮喘组,每组各10只大鼠,病理及生化检测评估模型构建情况,半定量PCR检测1～6型PRMTs的表达差异.结果 和对照组相比,哮喘组大鼠肺脏组织中PRMT1(P<0.01)、PRMT2(P<0.01)、PRMT3(P<0.05)、PRMT5(P<0.05)的表达有显著性升高,而PRMT4(P<0.05)的表达显著性降低;哮喘组大鼠脾脏组织中PRMT2(P<0.05)、PRMT5(P<0.05)的表达也出现显著性升高.结论 蛋白精氨酸甲基转移酶在E3大鼠急性哮喘模型肺脏和脾脏中有差异性表达,这可能在哮喘发病的基冈转录后调节过程中发挥着重要的作用.     

中国汉族女性中G72基因与精神分裂症的关系

目的 研究在中国汉族女性中NMDA受体途径重要基因G72与精神分裂症的关系。方法 在545名中国汉族女性(精神分裂症患者260例,正常对照285例)中对位于G72基因的3个单核苷酸多态性位点(rs3916965、rs3916967和rs2391191)进行基因分型和连锁不平衡分析。结果 遗传标记rs3916967的等位基因G(P=0.038 6)和rs2391191的等位基因A(P=0.009 6)均与精神分裂症相关。此外,由3个单核苷酸多态性位点构建的单倍型分析表明,单倍型GAG在病例-对照组中表现出统计学差异(P=0.002 4)。结论 在中国汉族女性中,G72基因是精神分裂症的一个重要易感基因,在后续的研究中有必要对本结果进行进一步的验证。     

医学分子生物学实验教学改革的初步探索与实践

根据医学分子生物学学科特点,结合多年的实验教学经验,对医学分子生物学实验教学进行了一系列的探索与实践,取得了初步成效。本文着重总结了近年来在更新实验教学内容、提高教师自身素质、规范实验教学过程、应用多媒体技术等方面所做的一些尝试。     

生物化学开放性实验的设计与要求

生物化学开展题为“鸡卵类粘蛋白的制备”的开放性实验，为培养学生研究和创新能力奠定了一定的基础，提高了学生分析问题，解决问题的能力。同时，对教师特别是实验技术人员提出了新的要求。     

医学大学生创新性实验计划项目的实验室管理探索

为适应21世纪医学发展以及培养创新医学人才的需要,保证校级、省级、国家级大学生创新性实验计划项目顺利进行,经过不断探索和实践,作者在大学生创新性实验计划项目的实验室管理方面做了一些有益探索,如：实验室注册、实验仪器使用前培训、使用预约及登记、实验经费、耗材和试剂规范管理、创新实验档案专人管理以及实验室安全管理等行之有效的管理措施.为各级科研创新实验项目的有序开展提供了一个良好的实验环境和研究平台,保证了它们的顺利完成,提高了教学质量.