穴位埋线疗法治疗慢性胃炎的规范化操作

慢性胃炎的现状及埋线疗法的治疗优势慢性胃炎指不同病因引起的胃黏膜慢性炎症或萎缩性病变,是一种最常见的消化系统疾病,其发病率在各种胃病中居首位[1],属于中医学中"胃痛""痞满""反胃""呕吐"的范畴[2]。以胃痛、胃胀、恶心、呕吐、呃逆、嗳气、食欲不振、便秘或腹泻等为主症,可反复发作或长期存在。内镜下可见黏膜红斑、黏膜出血点或斑块、黏膜粗糙伴或不伴水肿、充血渗出等基本表现。也有患者     

甲状旁腺素联合唑来膦酸对骨质疏松骨折愈合的作用

目的探讨甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)联合唑来膦酸(zoledronic acid,ZA)对去势雌性小鼠骨折愈合的影响。方法选96只12周龄的C57BL/6雌性小鼠,去势后1个月均造成左股骨中下1/3段横行骨折,并采用数字表法随机平分成4组[0.9%氯化钠注射液组(saline组)、PTH1-34组、ZA组、PTH1-34+ZA组],术后分别给与等剂量0.9%氯化钠注射液、PTH1-34、ZA、PTH1-34+ZA皮下注射,于给药后第2和4周各处死8只,对标本进行micro-CT、生物力学、组织学和RT-PCR检测。结果给药后2周,PTH1-34+ZA组的骨密度(bone mineral density,BMD)[(0.062±0.009)g/cm~3]、骨体积(bone volume,BV)[(34.8±2.6)mm3]、相对骨体积(relative bone volume,BV/TV)[(52.3±3.0)%]、骨小梁厚度(trabecular bone thcikness,Tb.Th)[(0.212±0.031)μm]明显高于saline组(P0.05);给药后4周,PTH1-34+ZA组的BMD[(0.072±0.010)g/cm3]、BV/TV[(60.3±5.2)%]明显高于其他治疗组(P0.05)。无论给药后2周和4周,PTH1-34+ZA组的最大力[2周和4周:(6.1±0.7)N、(10.8±1.6)N]和刚度[2周和4周:(11.6±1.1)N/m、(22.1±2.8)N/m]均明显高于其他治疗组(P0.05)。组织学结果显示,给药后2周,PTH1-34+ZA组的初级骨小梁具有最高的致密性,4周时,髓腔表现出良好的再通情况。给药后2周,PTH1-34+ZA组的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达量明显高于其他组(P0.05);给药后4周,PTH1-34+ZA组的骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达量明显高于其他组(P0.05)。结论 PTH联合ZA对去势雌性小鼠骨折愈合有叠加作用。     

甲状旁腺素受体真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立

目的构建小鼠甲状旁腺素受体（PTHR）及其突变受体（DSEL）全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达PTHR及
DSEL的HEK293细胞系,以应用于甲状旁腺素（PTH）模拟肽活性药物筛选及其信号通路的研究。方法通过双酶切、胶回收方
法分别纯化目的片段(PTHR、DSEL基因)和质粒pcDNA3.1（+）,二者分别由DNA限制性内切酶EcoRⅠ与Not Ⅰ双酶切,经T4
DNA Ligase连接的方法将PTHR、DSEL基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1（+）中,采用测序方法及DNA限制性内切酶EcoR
Ⅰ与Not Ⅰ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1（+）-PTHR、pcDNA3.1（+）-DSEL及空质粒pcDNA3.1
（+）分别转染至HEK293细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,、RT-PCR及ELISA检测转染细胞PTHR、DSEL的表达情况。结果重
组质粒经基因测序及DNA限制性内切酶EcoRⅠ与Not Ⅰ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1（+）-PTHR、pcDNA3.1（+）- DSEL
构建正确。重组体经脂质体法转染HEK293 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,ELISA检测到PTHR、DSEL基因在
重组质粒表达载体pcDNA3.1（+）-PTHR、pcDNA3.1（+）-DSEL转染的HEK293中成功表达。RT-PCR方法检测到PTHR、DSEL
基因在转录水平的表达。ELISA方法检测到重组质粒转染的HEK293中,加入甲状旁腺激素刺激后,PLC、cAMP蛋白表达量远高
于空质粒pcDNA3.1（+）转染的HEK293中PLC、cAMP的表达。结论成功构建了稳定高表达PTHR、DSEL的HEK293细胞,该
稳定转染细胞系的建立为进一步研究甲状旁腺素受体下游信号通道的分子机制以及筛选其模拟肽作用的活性奠定了实验基础。
     

甲状旁腺激素通过非依赖PLC的PKC途径抑制成骨细胞的凋亡

目的观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路（PTH/nonPLC/PKC）是否会对成骨细胞（MC3T3-E1）的凋亡以及 细胞数量具有影响。方法培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状 态,随机分为5 组：按100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH （1-34）+1 μmol/L Go6983,1 μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数 试剂盒（CCK-8）和Caspase-Glo® 3/7试剂盒（caspase-3）检测细胞的细胞数量与凋亡。结果CCK-8检测结果显示,［Gly1, Arg19］ hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异, 48 h［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,可以明显提高细胞的数量（P<0.05）。进一步的研究发现在 ［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组添加抑制剂Go6983 后,细胞数量增多的效应消失（P<0.05）。Caspase-3 检测凋亡结果显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡（细胞凋亡受到抑制）,但是差 异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,前者可以明显抑制细 胞凋亡（P<0.05）,给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论PTH的nonPLC/PKC信号转导通路可能在长时间 （48 h）作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。     

食管癌加速康复外科肠内营养时机的真实世界研究

目的 比较真实世界中食管癌患者在加速康复外科理念下给予肠内营养的不同时机对患者术后恢复情况的影响。 方法 采用便利抽样的方法选取 2020 年 4 月至 2021 年 4 月于中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院胸外科行加速康复外 科治疗的食管癌患者为研究对象。 最终共纳入食管癌患者 102 例,其中 51 例患者术后完全清醒后 2~ 6 h 给予肠内营养(简称 2 h 组),51 例患者术后 24 h 内给予肠内营养(简称标准组)。 应用 R 语言及 Matchlt 包将两组患者进行倾向性评分匹配。 比 较两组患者术后肠道功能恢复、口渴状况、营养状态、不良反应及并发症发生率。 结果 两组患者差异无统计学意义,具有可 比性(P>0. 05)。 2 h 组患者首次排气时间和排便时间均早于标准组(P<0. 05)。 2 h 组患者口渴痛苦评分(TDS)和口渴数字 评分(NRS)均小于标准组患者(P>0. 05)。 2 h 组患者前白蛋白含量高于标准组(P<0. 05)。 两组患者消化道不适情况及并发 症发生情况差异无统计学意义(P>0. 05)。 结论 食管癌患者加速康复外科术后清醒后 2 ~ 6 h 给予肠内营养可促进胃肠功能 恢复,改善患者口渴情况和营养指标,同时具有较好安全性。     

甲状旁腺激素（1-34）对小鼠肺癌骨转移瘤生长的影响

目的通过建立肺癌骨转移小鼠模型,探讨甲状旁腺激素（PTH）（1-34）对小鼠肺癌骨转移瘤生长的影响。方法将30只4~
6周龄BALB/c雌性小鼠,用人肺癌A549细胞悬液骨内注射的方法制作胫骨近端肺癌骨转移模型,7 d后X线确定模型建立,随
机分成3组,一组注射甲状旁腺素（PTH）（1-34）（40 mg/kg）作为观察组,一组注射等量溶解剂作为空白对照组,一组注射环磷酰
胺作为阳性对照组,每2 d测体质量一次及观察右后肢瘤体生长情况,给药28 d后处死小鼠,所有小鼠行X线及显微CT检查观
察肿瘤形态、大小,CT检测胫骨局部骨密度及肿瘤体积,HE染色及免疫组织化学法观察肿瘤形态及性质,检测血清碱性磷酸酶
浓度了解成骨情况。所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析,体质量以均数±标准差表示,ALP、肿瘤体积及CT数据分析采
用单因素方差分析做整体检验,两两比较采LSD-t检验,P<0.05被认为差异有统计学意义。结果观察组小鼠体质量变化曲线
与对照组组间差异无显著性（P>0.05）,X线及显微CT可见观察组及对照组均出现明显的骨破坏缺损,环磷酰胺组骨皮质相对
完整,轻度骨破坏,CT数据分析观察组及对照组肿瘤体积大小组间差异无显著性（P>0.05）,环磷酰胺组肿瘤体积明显小于前两
组,组间有显著性（P<0.05）,而观察组骨量大于对照组,低于环磷酰胺组,3组组间差异有显著性（P<0.05）,病理学显示溶骨性病
变为主的混合性骨质破坏,观察组及对照组骨结构破坏严重,肿瘤细胞填充明显,免疫组化显示腺瘤,两组差异相似,观察组
ALP浓度大于对照组及环磷酰胺组,观察组与对照组及环磷酰胺组相比,组间差异有显著性（P<0.05）。结论间歇性小剂量注
射甲状旁腺激PTH（1-34）不促进小鼠肺癌骨转移瘤的生长,但增加骨转移瘤灶周围的骨量。
     

葛根素磷脂复合物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察葛根素磷脂复合物（Puerarin—phospholipidComplex,PPC）对大鼠局灶性脑缺血再灌损伤的影响。方法：大脑中动脉栓塞法（MCAO）制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,采用“5分法”进行神经症状评分,用盐酸2,3,5-三苯基四氮唑（TIC）染色法测定脑梗死百分比,用分光光度法测定脑组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）的活性及丙二醛（MDA）的含量。结果：葛根素磷脂复合物能明显改善脑缺血再灌注后大鼠神经症状,明显减小脑梗死百分比,提高缺血脑组织SOD、GSH—Px活性,降低MDA含量。结论：葛根素磷脂复合物对大鼠缺血再灌注损伤大脑具有显著的保护作用,其作用优于等剂量的葛根素,具有良好的新药开发前景。     

去势延迟雄性小鼠骨折愈合

目的观察去势雄性小鼠骨折愈合的情况,探讨男性骨质疏松骨折愈合过程。方法40只7周龄C57BL/6J雄性小 鼠,其中8只作为基线组,32只随机分为对照组与去势组,小鼠去势后1周建立右股骨中段骨折模型。术后2周和4周,测量 血清睾酮浓度,骨折端骨密度（BMD)。骨折愈合情况通过显微CT和组织学切片显示。结果去势后小鼠血清睾酮浓度明显 下降;术后4周,与对照组相比,去势组BMD明显降低。三维重建图像显示去势组骨痂改建差于对照组。病理切片可见去势 组初级骨小梁少于对照组,骨痂重建差于对照组。结论去势延迟的骨折的愈合,表现在骨折区骨量减少以及骨改建延迟, 本研究为男性骨质疏松骨折的研究提供了动物模型。     

甲状旁腺素受体真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立

目的构建小鼠甲状旁腺素受体(PTHR)及其突变受体(DSEL)全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达PTHR及DSEL的HEK293细胞系,以应用于甲状旁腺素(PTH)模拟肽活性药物筛选及其信号通路的研究。方法通过双酶切、胶回收方法分别纯化目的片段(PTHR、DSEL基因)和质粒pcDNA3.1(+),二者分别由DNA限制性内切酶EcoRⅠ与NotⅠ双酶切,经T4DNA Ligase连接的方法将PTHR、DSEL基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(+)中,采用测序方法及DNA限制性内切酶EcoRⅠ与NotⅠ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL及空质粒pcDNA3.1(+)分别转染至HEK293细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,、RT-PCR及ELISA检测转染细胞PTHR、DSEL的表达情况。结果重组质粒经基因测序及DNA限制性内切酶EcoRⅠ与NotⅠ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL构建正确。重组体经脂质体法转染HEK293 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,ELISA检测到PTHR、DSEL基因在重组质粒表达载体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL转染的HEK293中成功表达。RT-PCR方法检测到PTHR、DSEL基因在转录水平的表达。ELISA方法检测到重组质粒转染的HEK293中,加入甲状旁腺激素刺激后,PLC、cAMP蛋白表达量远高于空质粒pcDNA3.1(+)转染的HEK293中PLC、cAMP的表达。结论成功构建了稳定高表达PTHR、DSEL的HEK293细胞,该稳定转染细胞系的建立为进一步研究甲状旁腺素受体下游信号通道的分子机制以及筛选其模拟肽作用的活性奠定了实验基础。