siRNA抑制FANCF基因增加肺癌细胞对顺铂的敏感性

目的: 研究抑制FA/BRCA途径中的范可尼贫血相关蛋白F（FANCF）基因在增加人肺腺癌CALU-1细胞株对顺铂敏感性中的作用。方法: 设计靶向于FANCF基因的3条siRNAs(FANCF-siRNAs),用脂质体转染试剂将其分别转染于CALU-1肺癌细胞株,RT-PCR检测转染后24 h FANCF mRNA的变化;筛选转染效率最高的siRNA片段。蛋白质印迹法检测经顺铂处理的CALU-1细胞株转染siRNA前后FANCF蛋白表达及FANCD2蛋白单泛素化水平;免疫荧光法测定胞核中FANCD2蛋白核聚小体的形成;CCK-8法测定转染siRNA前后的细胞增殖率变化。结果： 与转染前比较,CALU-1肺癌细胞株转染FANCF-siRNA后FANCF蛋白表达明显下降,FANCD2蛋白单泛素化水平和核聚小体形成降低,细胞增殖率显著下降。结论： 应用siRNA转染技术沉默FANCF基因可明显增加肺癌细胞对顺铂的敏感性,提示在肺癌靶向治疗策略中,FA/BRCA途径中的FANCF基因很可能是一个潜在的分子靶标。     

siRNA沉默FANCD2基因增加肺癌A549/DDP细胞对顺铂化疗的敏感性

目的: 研究siRNA沉默FANCD2基因后人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株对顺铂(DDP)耐药性的变化。方法:合成针对FANCD2基因的siRNA(FANCD2 siRNA),采用脂质体将其分别转染肺癌A549细胞株和A549/DDP耐药细胞株。CCK-8法测定经DDP处理的A549和A549/DDP细胞株转染siRNA前后的细胞增殖率变化;免疫印迹法测定2种细胞株转染siRNA前后FANCD2蛋白单泛素化水平;免疫荧光测定胞核中FANCD2蛋白核聚小体的形成。结果：经DDP处理的A549/DDP细胞增殖率,FANCD2蛋白单泛素化水平及核聚小体形成程度明显高于A549细胞。转染FANCD2-siRNA后,A549和A549/DDP细胞的FANCD2蛋白单泛素化水平和核聚小体形成明显降低,细胞增殖率显著下降。结论： 应用siRNA转染技术沉默FANCD2基因可抑制FA/BRCA途径的DNA修复功能,从而增加肺癌细胞对DDP的敏感性,部分逆转耐药肺癌细胞株对DDP的耐药性。