CDA-2抑制肺癌生长的炎症机制研究

目的探究尿多酸肽（CDA-2）抑制肺癌生长的作用及炎症机制。方法通过给雌性C57BL/6小鼠尾静脉注射LLC细胞,建立小鼠肺癌模型。采用肿瘤计数和测量大小评价CDA-2对肺肿瘤增殖的影响;收集经CDA-2治疗过的小鼠肺支气管肺泡灌洗液（BALF）并分离肺泡巨噬细胞,采用白细胞分类计数、电泳迁移位移试验（EMSA）、ELISA试验,研究CDA-2抑制肿瘤的作用机制。结果与对照相比,CDA-2明显抑制小鼠肺肿瘤的生长,肿瘤数和肿瘤尺寸显著下降（P〈0.05）。经CDA-2处理后支气管肺泡灌洗液（BALF）的巨噬细胞中的NF-κB与靶DNA结合的活性被强烈的抑制。此外,CDA-2处理显著减少BALF中各种炎性细胞的数量（P〈0.05）,以及炎症因子TNFα,IL-6,KC在肺组织中的表达（P〈0.05）。结论 CDA-2能抑制肺肿瘤的生长,通过抑制髓系细胞中NF-κB的活性,减少肺部炎症,可能是CDA-2抑制肺癌的生长的机制。     

维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响

背景与目的：维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline,DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并观察其对A549细胞增殖的作用。方法：采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段,利用LR重组系统构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后,感染A549细胞;采用有限稀释法筛选稳定株;使用细胞免疫荧光和蛋白［质］印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果;CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果：成功构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,包装后测得其活性滴度为1.0×10⁸ TU/mL;慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×10⁹ VP/mL;RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达,并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后,A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107 vs 2.099±0.162,P<0.05)。结论：本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株;RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。     

苯基乙酰对小鼠移植性肺癌的抑制作用及其机制

目的观察苯基乙酰(PG)对肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法选择C57BL/6小鼠40只,尾静脉注射肺癌LLC细胞建立肺癌模型。随机将成模小鼠分为PG组、PBS组各20只,PG组腹腔内注射800 mg/kg PG,PBS组腹腔内注射等量PBS,连续10天。两组各随机取5只,计数肺肿瘤个数、测量肿瘤最大直径;各随机取5只,采用Western blotting法观察肺癌组织Bcl-2、Bcl-XL、细胞凋亡抑制蛋白1(c IAP1)、Survivin、增殖细胞核抗原(PCNA)表达。剩余小鼠收集支气管肺泡灌洗液(BALF),取5只小鼠的BALF,检测炎症细胞(包括WBC总数及分类)及炎症因子(TNF-α、IL-6、趋化因子);剩余小鼠的BALF,采用电泳迁移位移试验观察NF-κB DNA结合活力。结果与PBS组比较,PG组肺肿瘤个数和肿瘤最大直径明显减少或降低(P均<0.05)。Western blotting结果显示,PG组Bcl-2、BclXL、c IAP1、Survivin及PCNA表达均明显下调,BALF中巨噬细胞中NF-κB与靶DNA结合活性明显被抑制。与PBS组比较,PG组可显著降低BALF中各种炎性细胞数量及炎症因子水平(P均<0.05)。结论 PG能明显抑制小鼠肺癌的生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制巨噬细胞中NF-κB活性、减轻肺部炎症反应有关。     

前列腺素E受体在抑制人肺巨噬细胞炎性反应中的作用

<正>前列腺素E2(PGE2)是花生四烯酸的环氧合酶-2代谢产物,在不同组织中具有多种生物功效;而这些功能主要由4种特异的膜G蛋白偶联前列腺素E受体(EP1、EP2、EP3和EP4)调控发挥作用[1]。PGE2具有抑制肺巨噬细胞释放炎性因子的作用[2],但究竟通过哪个EP受体信号通路调控尚不清楚。因此,本研究拟以原代培养的人肺巨噬细胞为研究对象,利用新型EP受体激动剂和拮抗剂研究EP受体信号     

银杏内酯A、B混合物抑制永久性大脑中动脉栓塞大鼠神经细胞JNK凋亡途径

目的 研究银杏内酯A、B混合物（GKAB）对永久性大脑中动脉栓塞（pMCAO）大鼠神经元的保护作用及相关分子机制。方法 取雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、pMCAO模型组和GKAB处理低、中、高剂量组。除假手术组（仅分离动脉而不阻断）外,其余4组均采用阻断右侧大脑中动脉的方法制备大鼠pMCAO模型。GKAB处理低、中、高剂量组于术后10 min分别经舌下静脉注射GKAB 12.5、25、50 mg/kg,假手术组、pMCAO模型组给予中剂量组药物等容量的生理盐水。用药12 h后,采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡率,免疫组织化学法检测神经细胞磷酸化JNK（p-JNK）表达,蛋白质印迹法检测脑组织中p-JNK、Bcl-2、Bax、细胞色素C（Cyt C）、caspase-9、caspase-3以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与假手术组相比,pMCAO模型组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK表达水平均增加（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均升高（P<0.01）,Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达均降低（P<0.01）;给予GKAB处理后,与pMCAO模型组比较,GKAB处理低、中、高剂量组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK水平均降低（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达也呈下降趋势（P<0.01）,而Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达呈升高趋势（P<0.01）,并表现出一定的剂量依赖性。与假手术组相比,pMCAO模型组神经细胞胞质Cyt C表达升高,线粒体Cyt C表达降低（P<0.01）;与pMCAO模型组比较,GKAB低、中、高剂量组神经细胞胞质Cyt C表达逐渐降低,线粒体Cyt C表达逐渐升高（P<0.05,P<0.01）。结论 GKAB可抑制pMCAO大鼠脑神经细胞凋亡,其机制可能与其抑制JNK磷酸化、抑制JNK信号通路的激活、阻断线粒体凋亡途径有关。     

香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制研究

背景与目的：香烟烟雾诱导的炎性反应可显著促进肺肿瘤的生长,本研究通过体内外实验明确香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制。方法：利用尾静脉注射鼠Lewis肺癌细胞方法建立小鼠肺癌模型,然后采用香烟烟雾对其进行刺激,诱发炎性反应。免疫组化方法检测小鼠和人肺肿瘤组织中CD68、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和无磷酸化β-catenin的表达。采用Transwell^®插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和人肺癌细胞株A549细胞。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达及磷酸化的GSK-3β和Akt蛋白的表达。结果：免疫组化结果显示,香烟烟雾刺激肺肿瘤负荷小鼠后,其肿瘤组织中巨噬细胞CD68⁺、TNF-α和无磷酸化β-catenin的表达均明显高于对照组。肺癌患者肿瘤组织中,CD68和TNF-α的阳性表达均明显高于正常组织。肺腺癌和鳞癌的无磷酸化β-catenin的染色阳性率分别为68.9%和62.2%,其阳性率与患者吸烟与否及肿瘤分期有关,差异有统计学意义(P均＜0.05),并且CD68⁺的细胞数在无磷酸化β-catenin染色阳性的标本中显著升高(P＜0.01)。Western blot检测结果显示,不同浓度香烟抽提物(cigarette smoke extract,CSE)刺激共培养细胞后,A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达随着CSE浓度的增加而显著上升。在加入TNF-α中和抗体后,A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达被抑制。用TNF-α处理A549细胞后,磷酸化的GSK-3β和Akt蛋白在2 h后表达增加,4 h后无磷酸化β-catenin蛋白表达也开始上调。结论：香烟烟雾诱导肺肿瘤组织中巨噬细胞释放炎性反应因子TNF-α,进而通过Akt/GSK-3β途径激活肿瘤细胞中Wnt/β-catenin信号通路。     

艾瑞德免疫分析仪C反应蛋白检测项目的性能评价

目的对检测C反应蛋白的艾瑞德干式免疫分析仪进行性能验证,确保其结果的准确、可靠。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)推荐的EP5-A2文件进行精密度验证,参考EP15-A2文件进行正确度的验证,参考EP6-A2文件进行线性范围的验证,参考CLSI C28-A2文件进行参考区间的验证,参考常规检测方法进行携带污染率的验证。结果全血高、低浓度批内精密度分别为3.29%、3.68%,总精密度分别为4.91%、5.26%;参考区间为0~10mg/L;线性回归方程Y=1.070 2 X+0.448 4,r=0.979;线性范围为2.5~160.0mg/L;携带污染率小于1%。结论艾瑞德免疫分析仪具有良好的精密度、准确度,较宽的线性范围、较快的检测速度等优点,适用于临床检测。