辛伐他汀降低脂质肾损害大鼠肾组织中骨调素表达

目的 观察高脂血症肾损害大鼠肾组织中骨调素（OPN）和单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）表达变化及辛伐他汀对其表达的影响。方法 将雄性wistar大鼠随机分为对照组，高脂组，辛伐他汀治疗组，每组10只。观察12周。实验监测尿蛋白量、血脂、肾功能及肾组织病理学改变；免疫组化技术检测肾组织MCP-1表达，用RT-PCR、免疫印迹检测OPN mRNA和蛋白表达。 结果 实验结束时，高脂模型组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白显著高于对照组（P＜0.01）；辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C、24h尿蛋白明显低于高脂组（P＜0.01），而 HDL-C则明显高于高脂组（P＜0.01）；高脂组大鼠肾小球系膜细胞增生，系膜区增宽，小管间质炎性细胞浸润，而辛伐他汀组病理改变较高脂组有所减轻；高脂组和辛伐他汀组大鼠肾组织中MCP-1、OPN mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.01）；而辛伐他汀组大鼠肾组织中上述指标的表达较高脂组有明显下调（P＜0.05）；肾组织中OPN蛋白表达与其MCP-1表达和尿蛋白量呈高度正相关。结论 辛伐他汀可能通过降低大鼠肾组织中OPN和MCP-1的表达，从而减轻小管间质巨噬细胞浸润，从而降低了高脂血症肾损害。     

AP-1活化在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨转录活化蛋白-1（activator protein-1，AP-1）在高糖诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（human kidney proximal tubular epithelial cell，HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。光镜、透射电镜观察细胞形态的改变，免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和细胞角蛋白（cytokeratin，CK）的表达，用凝胶电泳迁移率改变分析法（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变，RT—PCR法检测CKmRNA的表达，Westernblot检测α-SMA蛋白的表达。结果高糖作用48h后，HK2细胞由椭圆形贴壁生长变为长梭形，胞体拉长，透射电镜下，细胞表面微绒毛明显减少，胞质内粗面内质网丰富，而AP-1阻断组较高糖组明显减轻；EMSA结果分析表明，在高糖刺激下，AP-1结合活力较正常对照组增加79．22％（P〈0．05），而AP-1阻断剂可明显抑制AP—1的活化，较高糖组降低51．19％（P〈0．05）；免疫细胞化学和RT—PCR检测显示，高糖组和AP-1阻断组CKmR—NA和蛋白水平明显降低（P〈0．05），而AP—1阻断组显著高于高糖组（P〈0．05）；免疫细胞化学和Westernblot检测显示，高糖组和AP-1阻断组α—SMA蛋白表达明显高于正常组（P〈0．05），而AP-1阻断组显著低于高糖组（P〈0．05）。结论高糖能够导致肾小管上皮细胞AP-1活化，诱导其表型转化。     

免疫检查点抑制剂相关肾损伤发生情况及影响因素分析

目的探讨使用免疫检查点抑制剂(ICI)后出现肾功能生化指标异常患者肾损伤的发生特点及影响因素, 为临床治疗方案的选择提供参考。方法通过中国医院药物警戒系统检索山东第一医科大学附属省立医院2021年3月1日至2022年2月28日收治的使用我国自主研发ICI(卡瑞利珠单抗、信迪利单抗、替雷利珠单抗、特瑞普利单抗)进行治疗并出现估算肾小球滤过率(eGFR)<90 ml/(min·1.73 m2)和/或血肌酐(Scr)>105 μmol/L的肿瘤患者, 收集患者基本信息、肿瘤治疗方案、实验室检查结果及合并用药等信息。根据是否发生肾损伤将患者分为肾损伤组和非肾损伤组, 比较2组患者的临床特征, 采用二元logistic回归模型分析患者发生肾损伤的影响因素, 计算比值比(OR)及其95%置信区间(CI)。结果纳入分析的患者为222例, 男性170例, 女性52例;中位年龄67(36, 85)岁;使用卡瑞利珠单抗者144例, 信迪利单抗38例, 替雷利珠单抗31例, 特瑞普利单抗9例。222例患者中, 有29例(13.1%)患者发生肾损伤, 其中1级肾损伤26例, 2级3例;肾损伤发生时...     

足细胞损伤与糖尿病

糖尿病。肾病(DN)是糖尿病的严重并发症和患者主要死亡原因之一，出现持续性蛋白尿则提示病情不可逆转，直至终末期。肾病。DN有3种主要组织病理学改变：肾小球基底膜(GBM)增厚，。肾小球内细胞外基质聚积，结节性。肾小球硬化(K-W性损害)。其中细胞外基质聚积被视为DN的关键性改变。近年研究发现，足细胞损伤在DN的发展中起着重要的作用。我们就足细胞损伤与的DN关系作综述。     

P38MAPK在脂多糖引起的腹膜间皮细胞损伤中的作用

目的探讨脂多糖(LPS)引起人腹膜间皮细胞(HPMC)损伤中分泌MCP-1以及LPS、P38MAPK、MCP-1三者之间可能存在的关系。方法体外培养永生化人腹膜间皮细胞(HPMC),随机分为正常对照组、LPS作用24 h组、LPS作用48 h组、特异性P38MAPK阻断剂SB203580+LPS作用24 h组、SB203580+LPS作用48 h组;Western blot法检测各组MCP-1和磷酸化P38MAPK蛋白表达水平;Real-time PCR法检测各组MCP-1 mRNA表达水平。结果 1.10 mg/L LPS刺激使HPMC的MCP-1 mRNA和蛋白质表达均较正常对照组增加(P0.05)。10 mg/L LPS作用48 h后MCP-1 mRNA和蛋白质表达水平均高于24 h组(P0.05);Western blot结果显示,与正常组对比,10 mg/L LPS作用使磷酸化P38MAPK蛋白水平明显升高(P0.05)。10 mg/L LPS作用48 h与作用24 h对比升高不明显(P0.05);经5μmol/L SB203580预处理30 min后再予以LPS刺激与单纯LPS刺激相比较,MCP-1蛋白质和mRNA均明显降低(P0.05);SB203580预处理后再予以LPS分别刺激24 h和48 h 2组相比较,MCP-1蛋白及mRNA水平差异不明显(P0.05)。结论 LPS通过磷酸化P38MAPK,导致MCP-1表达水平升高,诱发腹膜间皮细胞的损伤。     

白细胞介素-1受体相关激酶1在脂多糖诱导的足细胞损伤中的作用及其机制

目的 探讨白细胞介素(IL)-1受体相关激酶1(IRAK1)在脂多糖(LPS)诱导的足细胞损伤中的作用及其机制。方法 将体外培养的永生化人足细胞分为5组：正常对照组(control组)、LPS组、LPS+空载转染组(LPS+si-NC组)、LPS+IRAK1干扰质粒转染组(LPS+si-IRAK1组)、LPS+肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)干扰质粒转染组(LPS+si-TRAF6组)。采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测5组足细胞IRAK1和TRAF6蛋白及其mRNA的相对表达水平;采用免疫荧光检测5组足细胞紧密连接蛋白(ZO)-1、结蛋白(Desmin)的定位及相对表达水平;采用Western Blot检测5组足细胞IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、人核因子(NF)-κB抑制蛋白(IKB)α、NF-κB(p65)、磷酸化NF-κB(p-p65)蛋白的相对表达水平;采用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测IRAK1和TRAF6结合情况。结果 LPS组足细胞IRAK1、TRAF6蛋白及mRNA相对表达水平...     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的建立阿霉素肾病模型,探讨罗格列酮对阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin的表达的影响。方法21只大鼠随机分为3组。阿霉素肾病组和罗格列酮组大鼠予0.1%阿霉素溶液7 mg·kg~(-1)一次性尾静脉注射,罗格列酮组次日予罗格列酮5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,每日1次,共8 wk。另外2组每日予等量自来水灌胃。检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血清清蛋白、血脂、肾功能及肾脏病理改变,并检测肾组织nephrin和TCFβ_1的表达。结果给药后2、4、6、8 wk,罗格列酮组大鼠24 h尿蛋白定量明显低于阿霉素肾病组(P<0.05),8 wk时其血清清蛋白高于阿霉素肾病组[(26.7±s 2.6)g·L~(-1)vs(21±4)g·L~(-1),P<0.05],血三酰甘油和胆固醇水平低于阿霉素肾病组(P<0.05)。与阿霉素肾病组比较,罗格列酮组大鼠肾组织中nephrin蛋白表达增高19%(P<0.05),而TGFβ_1蛋白表达明显降低(P<0.01),肾脏病理损害也明显减轻。结论罗格列酮可上调阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin表达,减少尿蛋白排泄,抑制其TGFβ_1表达,从而减轻肾组织病理损害。     

PLK1靶向β-catenin介导慢性肾脏病炎症状态下足细胞转分化

目的探讨慢性肾脏病微炎症状态下PLK1(polo-like kinase 1)在足细胞上皮-间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制。方法以条件永生化小鼠足细胞系为研究对象进行分组:正常对照组;脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导组;PLK1 shRNA组(PLK1 shRNA+LPS)及Scramble shRNA组(Scramble shRNA+LPS)。利用Real-time PCR、Western blot检测足细胞中PLK1、结蛋白(desmin)mRNA及蛋白表达水平;Western blot检测PLK1对β-链蛋白(β-catenin)的作用;Western blot检测EMT相关分子E-钙粘素(E-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达;Western blot检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的水平;Transwell迁移实验检测足细胞迁移能力。结果 LPS诱导炎症状态下,足细胞PLK1 m RNA及蛋白表达升高伴随β-catenin上调,同时,GSK-3β表达降低,vimentin呈现高表达,而E-cadherin呈现低表达;PLK1 shRNA转染足细胞可特异性敲低PLK1表达,下调β-catenin,伴随GSK-3β表达增加,逆转足细胞EMT的发生;且炎症状态下,足细胞Desmin表达增加;Transwell显示足细胞迁移能力增强。结论 LPS刺激可导致足细胞PLK1高表达,其可能通过负向调控β-catenin降解复合物(axin/GSK-3/APC)从而稳定β-catenin的表达,继而下调Vimentin,导致足细胞损伤及EMT的发生。     

Snail 在AP-1介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的：探讨Snail 在AP-1介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用及对细胞外基质分泌的影响。 方法：将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。细胞免疫化学法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,ELISA法测定培养液上清中纤连蛋白（FN）的浓度变化,用凝胶电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变, RT-PCR法检测vimentin mRNA和Snail mRNA的表达,Western blotting检测E-cadherin的表达。结果：高糖作用HK2细胞48h后,高糖组FN浓度较正常对照组显著增加(P<0.05),而AP-1阻断组浓度显著低于高糖组(P<0.05);高糖能够刺激AP-1结合活性,AP-1阻断剂可显著抑制AP-1的活化;高糖组Snail mRNA表达水平较正常对照组显著增加（P<0.05）,而AP-1阻断组其水平显著低于高糖组（P<0.05）;与正常对照组相比,高糖组E-cadherin蛋白表达明显降低（P<0.05）,而AP-1阻断组其水平显著高于高糖组（P<0.05）;高糖组vimentin mRNA和蛋白水平明显高于正常对照组（P<0.05）,而AP-1阻断组显著低于高糖组（P<0.05）。结论：高糖可导致肾小管上皮细胞AP-1活化,诱导Snail表达而下调E-cadherin,同时导致vimentin蛋白的表达、细胞外基质FN的分泌增加,诱导其表型转化,参与糖尿病肾病的纤维化进程。     

UCP2通过调控mTOR对LPS诱导的HK2细胞自噬产生影响

目的探讨线粒体解耦联蛋白2(uncouplingprotein2,UCP2)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肾小管上皮细胞(HK2细胞)自噬中的作用机制。方法以HK2细胞为研究对象,采用不同质量浓度LPS(0,0.1,0.5,1,5μg/ml)干预不同时间(0,12,24,48 h),Western blot检测HK2细胞UCP2蛋白水平变化。并将HK2细胞分为4组:正常对照组,LPS组(LPS induced),UCP2shRNA组(UCP2 shRNA+LPS)和UCP2 scramble组(UCP2 scramble+LPS),LPS为1μg/ml,24 h。利用Real-time PCR和Western blot检测HK2细胞UCP2 mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)表达变化,Western blot检测线粒体融合蛋白2(Mfn2)、Drp1,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B,凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved-Caspase-3以及mTOR的蛋白表达水平。结果 Western blot结果显示,1μg/ml LPS处理的HK2细胞,在12 h和24 h UCP2蛋白的水平较对照组明显增加(P0.05);0.1,0.5和1μg/ml的LPS刺激24 h,UCP2水平与对照组相比逐渐增加。使用1μg/ml的LPS刺激24 h,免疫荧光和Western blot发现,UCP2, Drp1较对照组明显增加,Mfn2表达减少(P0.05),而转染UCP2 shRNA后,可显著抑制UCP2, Drp1水平的增加以及Mfn2水平的降低(P0.05)。同时,Western blot发现LPS组自噬相关蛋白Beclin-1,LC3B,促凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3明显增加(P0.05),抗凋亡相关蛋白Bcl-2水平降低(P0.05),而转染UCP2 shRNA后,Beclin-1,LC3B,Bcl-2表达水平降低,Cleaved-Caspase-3水平进一步增加(P0.05)。Western blot结果显示转染UCP2 shRNA组p-mTOR水平较正常组和LPS组明显增加(P0.05);而mTOR蛋白水平各组间无统计学差异(P0.05)。结论 UCP2在LPS诱导的HK2细胞损伤中通过自噬发挥保护作用。