荧光定量PCR检测Rh阴性孕妇外周血浆游离DNA中胎儿RhD血型

目的 探讨荧光定量PCR(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术对Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行非创性产前诊断胎儿RhD血型的可行性.方法 选取78份妊娠11～40周、B超确诊为单胎的Rh阴性孕妇血浆.采用9个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)多态性位点及Y染色体性别决定区基因(sex-determining region Y chromosome,SRY)确定胎儿DNA的存在;运用FQ-PCR技术对血浆中游离胎儿DNA进行RHD基因外显子5、7、10和内含子4定量分析,以确定胎儿RhD血型的基因型;其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析,回顾性评价胎儿基因定型结果的准确性.结果 78份标本中,41份检测到SRY基因,平均浓度为(214.7±120.9)拷贝/ml,产后证实皆为男性.70份FQ-PCR基因定型结果与血清学结果相符,另有5份确定为假阳性,3份基因定型结果不可确定,检测结果总符合率为90%(70/78).5份假阳性标本通过检测RHD1227A等位基因鉴定了4份RhD放散型,FQ-PCR最终结果准确率达到95%(74/78).结论应用FQ-PCR方法进行非创性胎儿RhD血型检测可用于新生儿溶血病的预防和诊断.     

肺腺癌细胞总RNA转染树突状细胞诱导特异性CTLs的体内抗肿瘤效应研究

目的探讨人肺腺癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DCs)诱导抗原特异性的细胞毒T细胞(CTLs)对移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 1)从外周血单个核细胞(PBMCs)中诱导DCs,提取人肺癌细胞A549总RNA,用于电转染DCs,转染后的DCs与自体T细胞混合培养,诱导抗原特异性的CTLs;2)实验分为转染RNA的DCs组、转染PBS的DCs组和未转染DCs组,流式细胞术(FCM)鉴定T细胞表型,3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力;3)建立肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型,过继回输CTLs,比较肿瘤体积,计算抑瘤率,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2、COX-2和VEGF的表达,并用全自动图像分析系统分析其平均光密度值(MOD)。结果 1)转染RNA的DCs和自体T细胞共育诱导的CTLs的CD8+T细胞大幅度上调,表达率(79.29±2.18)%明显高于转染PBS的DCs组CD8+T细胞(26.10±1.76)%和未转染DCs组CD8+T细胞(25.58±2.73)%(P0.05);2)转染RNA的DCs显著刺激了自体T细胞增殖,3H-TdR渗入所得的cpm值:阳性对照组为17 105±130,转染RNA的DCs组为7 759±493,转染PBS的DCs组为2 611±161,未转染DCs组为2 248±332(P0.05);3)成功建立肺癌裸鼠移植瘤模型,实验结束时,转染RNA组裸鼠荷瘤体积(540±99)mm3明显小于转染PBS组(1 572±147)mm3和未转染组(2 043±395)mm3(P0.05);4)转染RNA组和转染PBS组的抑瘤率分别为68.53%和8.62%;5)转染RNA的DCs诱导的CTLs能显著上调Bax的表达(转染RNA组MOD值为335±105),显著下调Bcl-2、COX-2和VEGF的表达(转染RNA组MOD值分别为146±47、122±33和128±58)。结论人肺腺癌细胞总RNA转染DCs诱导的抗原特异性CTLs对肺腺癌裸鼠移植瘤的生长产生抑制作用。     

ABO血型不合供者外周血造血干细胞的采集

目的研究ABO血型不合供者外周血造血干细胞的采集方法,探讨不去除红细胞和/或血浆进行造血干细胞移植的安全性。方法 29例异基因外周血干细胞移植供者与受者HLA配型为全相合或1～3位点不合,其中ABO主要不合13例,次要不合7例,ABO血型相合9例。采用CS-3000Plus血细胞分离机的干细胞采集程序对ABO血型不合供者的外周血造血干细胞进行采集,不去除红细胞和/或血浆,直接回输给受者。结果 ABO血型主要不合、次要不合及血型相合的供者每次采集的外周血干细胞(PBSC)产品终体积为(59.11±1.19)ml,单个核细胞(MNC)采集物、MNC比例、CD34+细胞、RBC含量三组间的差异无统计学意义。结论应用CS-3000Plus血细胞分离机采集ABO血型不合供者外周血造血干细胞,不仅对供者安全,而且采集产品中造血干细胞浓度较高,血型不合的红细胞污染较少,不需要去除红细胞和血浆,可安全地用于ABO血型不合的受者。     

HepG2细胞外泌体冲击树突状细胞介导的抗肿瘤作用

目的：分析来源于肝癌HepG2细胞外泌体的免疫原性物质,为基于树突状细胞（DCs）的肝癌免疫治疗寻找合适的肿瘤抗原提供思路。方法：用透射电镜和Western blot方法鉴定肝癌HepG2细胞外泌体的形态和蛋白表达;用终浓度为8 μg/mL的外泌体冲击DCs,流式细胞术检测DCs表面分子的变化;将外泌体冲击的DCs与T淋巴细胞共培养5 d,采用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）荧光染色法检测淋巴细胞增殖,Annexin-V/PI双染法检测淋巴细胞对肿瘤的杀伤效应。结果：肝癌HepG2细胞的外泌体表达CD63、CD81标志性蛋白,同时携带大量的肿瘤抗原甲胎蛋白（AFP）和热休克蛋白HSP70、HSP90,不表达细胞蛋白calnexin。与未成熟DCs组比较,外泌体冲击DCs后上调其表面分子如CD83、CD80、CD86的表达（P < 0.01）;且可促进T淋巴细胞增殖（P < 0.01）,增加T细胞介导的肿瘤特异性和非特异性杀伤效应（P < 0.01）。结论：肝癌HepG2细胞外泌体可能携带大量肿瘤抗原,刺激DCs成熟,可能是基于DCs的肝癌或其他肿瘤免疫治疗潜在的抗原谱。     

2724例O型孕妇产前IgG抗-A(B)效价与新生儿ABO溶血病发生的关系

目的研究血型为O型的孕妇产前IgG抗-A(B)效价,以预防新生儿溶血病的发生。方法采用抗人球蛋白法检测2 724例丈夫为非O型的O型孕妇IgG抗-A或抗-B效价,分娩时取脐静脉血进行红细胞4项试验:血型、直接抗人球蛋白试验、游离抗体检测、释放试验。结果 2 724份血清中IgG抗-A(B)效价≥1∶64者634例,异常检出率为23.27%;丈夫为A型、B型、AB型者,IgG抗-A(B)异常检出率分别为26.25%、19.98%、23.44%。当孕妇IgG抗-A(B)效价为64、128、256、≥512时,新生儿脐血血清学检验结果阳性率分别为8.00%、64.15%、100.00%、100.00%。结论孕妇IgG抗-A(B)效价与新生儿红细胞致敏呈正相关,是产前预测母子血型不合引起HDN的有效方法。及早发现,及时治疗,可减少由于母婴血型不合引起的溶血病。     

TrkA-siRNA增强人乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨靶向抑制TrkA基因表达后,人乳腺癌细胞MCF-7对化疗药物紫杉醇敏感性的变化.方法 8 μmol/L紫杉醇作用于乳腺癌MCF-7亲本细胞株和TrkA-siRNA转染细胞株24、48小时后,MTT法检测细胞增殖抑制效应,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3的活化.倒置显微镜观察细胞株生长的形态学变化.结果 紫杉醇作用24、48小时后,其对TrkA-siRNA细胞株的生长抑制均高于MCF-7亲本细胞株(P＜0.05),且48小时抑制率高于24小时(P＜0.05).Western blot结果显示,caspase-3蛋白在紫杉醇作用24小时后被激活,其在TrkA-siRNA细胞株中的表达高于MCF-7亲本细胞株(P＜0.05).结论 TrkA-siRNA能增加乳腺癌细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性.     

转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究

目的探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法利用密度梯度离心法从血细胞分离机新鲜采集的外周富集血中分离出单个核细胞(PBMCs),贴壁获得单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)进一步诱导为树突状细胞(DCs),同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗,并与T细胞混合培养诱导扩增细胞毒性T淋巴细胞(CTLs);实验分为转染A549细胞总RNA的DC组、未转染DC组和转染空脂质体DC组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。结果1)转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高,CD40在3组的表达率分别为(69.01±7.67)%、(19.28±3.51)%和(39.62±2.72)%;CD80在3组的表达率分别为:(74.39±6.46)%、(15.48±3.03)%和(25.70±2.92)%;CD83在3组的表达率分别为:(81.79±4.61)%、(13.29±2.34)%和(31.42±1.97)%;HLA-DR在3组的表达率分别为:(76.53±5.13)%、(49.23±4.05)%和(29.94±3.53)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P<0.05),3组IL-12分别为(543.24±68.33)、(77.11±27.65)和(167.78±31.84)pg/ml;3组IFN-γ分别为:(122.95±32.84)、(41.06±10.97)和(56.08±15.96)pg/ml;3)3H-TdR掺入试验所得的cpm,3组分别为(7437±720)、(3 807±476)和(4 543±719),阳性对照组为:16 739±91,差异有统计学意义(P<0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DC组的特异性杀瘤活性(58.54±8.27)%,明显高于未转染组(36.03±4.03)%和转染空脂质体组(33.47±8.21)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人肺腺癌细胞A549总RNA转染的DC疫苗体外诱导的特异性抗肿瘤免疫能力显著增强,有望为肺腺癌的治疗提供新的手段。     

血浆置换疗法在痛风性关节炎治疗中的应用

目的观察治疗性血浆置换治疗痛风性关节炎的临床疗效。方法采用血浆置换法治疗17例痛风性关节炎患者,比较置换前后患者血尿酸（UA）、C-反应性蛋白（CRP）、血沉（ESR）的变化及临床症状的改善。结果17例患者经血浆置换后血尿酸、C-反应蛋白、血沉明显降低（P〈0.01）;临床症状明显好转,关节红、肿、热、痛症状消失。结论血浆置换结合药物治疗痛风性关节炎的疗效显著。     

尿微量蛋白在原发性高血压肾损害早期诊断中的意义

目的探讨尿微量蛋白在诊断原发性高血压早期肾损害中的意义。方法采用免疫速率散射比浊法检测患者尿白蛋白(Alb)、转铁蛋白(TRF)、免疫球蛋白(IgG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-微球蛋白(β2-MG)。结果与正常对照组比较,原发性高血Ⅰ期组尿Alb、TRF、α1-MG均明显升高(P＜0.05),而尿IgG、β2-MG无显著差异;原发性高血压Ⅱ期组尿Alb、TRF、α1-MG显著升高(P＜0.01),尿IgG、β2-MG明显升高。结论尿微量蛋白检测可作为诊断原发性高血压早期肾损害的参考指标,其中以Alb、TRF、α1-MG较敏感。     

846例泌尿生殖道支原体感染及药敏结果分析

目的了解本院门诊患者泌尿生殖道支原体的感染及抗生素的耐药情况,为临床治疗生殖泌尿支原体感染提供依据。方法回顾性分析2013年8月至2018年5月本院846例患者泌尿生殖道支原体分离培养鉴定及药敏试验,取男性尿道分泌物或前列腺液、精液,女性阴道、外阴分泌物或宫颈分泌物标本,于一次性试管中送检标本。结果 846例患者支原体感染阳性率为41.3%,其中单纯解脲支原体(Uu)阳性率为22.5%(190/846),单纯人型支原体(Mh)阳性率为3.2%(27/846),Uu+Mh混合阳性率为15.6%(132/846),Uu+Mh混合感染率明显高于Mh单纯感染,差异有统计学意义(P0.05)。支原体感染阳性患者以20～岁为主,男性患者感染率为6.6%,女性患者感染率为34.6%,女性患者支原体感染率为男性患者的5.24倍,差异有统计学意义(P0.05)。单纯Uu感染时,交沙霉素、美满霉素、强力霉素和克拉霉素的用药敏感性达80%;单纯Mh感染时,美满霉素、强力霉素和交沙霉素敏感率较高;Uu和Mh混合感染时,耐药率增加,仅强力霉素和美满霉素对其有较好的疗效,敏感率大于50%。结论 Uu在泌尿生殖道感染的阳性率要高于Mh,强力霉素和美满霉素对泌尿生殖道支原体的感染有较好的治疗作用,临床应根据支原体药敏试验合理选择抗生素,从而大大减少耐药性产生。