弓形虫CDPK5基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定

目的：筛选弓形虫（Tg）CDPK5基因序列的免疫多肽,将合成多肽免疫新西兰白兔制备多抗血清,并对其功能进行鉴定。方法利用生物信息学的方法分析确定Tg CDPK5序列免疫多肽,再用合成的多肽免疫新西兰白兔制备多抗。收集多抗血清,酶联免疫吸附测定（ELISA）测定多抗滴度,蛋白免疫印迹法（Western blot）鉴定免疫活性,免疫荧光实验分析Tg CDPK5的亚细胞定位。结果通过生物信息学分析,选择Tg CDPK5序列N端一段长17 bp的多肽序列作为免疫多肽;用合成的多肽免疫兔子,成功获得多抗血清。ELISA测定多抗血清效价为1∶640000;Western blot证明该多抗血清能特异性识别 Tg CDPK5（75．4×103）条带;免疫荧光实验结果表明,该多抗能特异性识别弓形虫内源Tg CDPK5蛋白。结论研究根据 Tg CDPK5序列信息的分析,获得Tg CDPK5序列免疫多肽,并制备兔源多克隆抗体。     

荧光定量PCR检测结核杆菌PncA基因突变研究

目的运用实时荧光定量PCR方法检测结核分支杆菌耐吡嗪酰胺(PZA)分离株PncA基因突变情况,从而探讨其水平与结核病的临床转归的相关性。方法用荧光定量PCR Taqman探针技术,以PncA基因片段设计引物,以突变发生率最高的47位(Thr→Ala)(PncA139)和85位(Leu→Pro)(PncA254)设计探针,10倍系列稀释含有目的基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,建立标准曲线。并用于检测临床105份标本(TB-DNA>103)pncA基因突变表达量。结果①63例PncA139点突变表达量>102,占60%;②31例PncA254点突变表达量>102,占30%;③PncA139位突变表达量>103的患者同时也出现PncA254位突变表现,且TB-DNA表达量均>106;④PncA139位突变的高拷贝组与低拷贝组突变率比较χ2为50.44,85位点χ2为20.97,P值均<0.005,比较差异亦有明显统计意义。结论 TB-DNA高拷贝且PncA基因突变是临床结核病患者病情反复,以致迁延不愈的原因之一。     

降钙素原在血流感染及局部细菌感染中的诊断作用

目的 探讨降钙素原(PCT)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)定量检测在血流感染及局部细菌感染中的临床应用价值,为感染性疾病的早期诊断提供依据.方法 采用回顾性研究,对本院临床确诊的97例细菌血流感染及103例局部细菌感染者的PCT、hs-CRP值进行分析.比较PCT、hs-CRP浓度在血流感染和局部细菌感染之间的差异,并与80例正常人的检测结果比较.结果 血流感染患者PCT水平为5.59(1.075～ 23.46) ng/mL,hs-CRP为85.3(55.4～ 147.7) mg/L;局部感染患者PCT水平为0.15(0.09～0.35)ng/mL,hs-CRP为37.5(15.3～75.3) mg/L.血流感染组、局部细菌感染组及正常对照组三者的PCT、hs-CRP比较差异有统计学意义(P＜0.05).PCT、hs-CRP诊断血流感染与局部细菌感染的受试者工作特征曲线下面积(ROC-AUC)分别为0.905、0.745.结论 PCT、hs-CRP都可用于血流感染和局部细菌感染的早期鉴别诊断,但是PCT的诊断价值更高.     

对医院中铜绿假单胞菌感染者的分布情况及该菌耐药性的调查分析

目的 :探讨医院中铜绿假单胞菌感染者的分布情况及该菌耐药性的情况,以期降低其耐药率,为临床上科学使用抗菌药物提供依据。方法 :对2011年1月~12月期间我院临床上分离出来的162株铜绿假单胞菌的分布情况及其耐药情况进行回顾性研究。我院采用Phoenix100全自动微生物仪对这162株菌株进行鉴定及药敏实验,并使用WHONET5.4对其耐药性进行分析。结果 :这162株铜绿假单胞菌大多分布在内科、外科、重症监护病房(ICU)、干部病房及传染科,主要是从痰液、尿液、分泌物、脓液、血液及咽拭子中检出的。用亚胺培南与阿米卡星治疗该菌感染者的疗效较好,二者的耐药率分别为3.7%与6.2%。结论 :铜绿假单胞菌在临床上的传染途径主要为呼吸道。该菌还可导致机体的其他部位发生感染。该菌具有多重耐药机制,故可引发耐药性。临床上在使用抗菌药物治疗由该菌所致的感染性疾病时,应以药敏检测的结果为依据,以降低耐药菌株的生长率。     

不同部位分离的铜绿假单胞菌的耐药性对比研究

目的分析住院患者中,铜绿假单胞菌的常见感染部位及相应的耐药情况,为临床的合理用药提供参考依据。方法回顾性分析本院2012年1月至2013年12月分离培养的铜绿假单胞菌的标本分布,并对不同部位分离的铜绿假单胞菌的耐药率进行统计分析。结果铜绿假单胞菌分离率以呼吸道标本最高,占74.1%,其次是中段尿和伤口分泌物。3种标本的铜绿假单胞菌对各种抗菌药物的耐药率差异具有统计学意义(P0.05)。呼吸道分离的铜绿假单胞菌的耐药率比较高,而伤口分泌物较低。结论铜绿假单胞菌以呼吸道感染最常见,耐药率最高。不同感染部位的铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药率有明显差异,应在临床上用药治疗时予以区别对待。