2015年湖北省武汉市5岁以下儿童病毒性腹泻病原学研究

目的 调查2015年湖北省武汉市＜5岁儿童病毒性腹泻的流行病学特征。 方法 收集2015年武汉市儿童医院＜5岁全部腹泻患儿粪便标本及相关临床信息,采用酶联免疫吸附试验检测A组轮状病毒（RV）,PCR方法检测肠道腺病毒（AdV）,反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测诺如病毒（NoV）、札如病毒（SaV）、B组和C组轮状病毒及星状病毒（AstV）,利用巢式RT-PCR对轮状病毒进行G/P基因分型。 分析病毒性腹泻病原分子流行特征。 结果 2015年武汉市＜5岁全部腹泻患儿3 009例,病毒性腹泻病例流行季节以RV最为明显, 9— 11月病例数占阳性病例数的50.3%;NoV的流行高峰在9 — 10月,占阳性比例的40.9%。 AdV占2.0%、AstV占1.8%,SaV、B组和C组RV未检出。 病毒性腹泻的发病年龄主要为＜2岁婴幼儿。 RV毒株G型与P型血清型分型结果显示,G型与P型组合则主要以G3P［8］和G1P［8］为主,构成比分别为37.4%和17.9%。 结论 武汉市儿童病毒性腹泻病例携带的病原体具有多样性,以RV为主,主要流行株为G3P［8］。      

γ-干扰素释放试验在肺结核和肺外结核诊断中的应用

目的:探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)在肺结核和肺外结核诊断中的应用价值。方法:收集273例结核病患者与45例健康体检者肝素钠抗凝全血,采用国产IGRA试剂检测其血浆γ-干扰素含量,同时与结核菌素皮肤试验(TST)结果进行平行分析比较;采用抗酸染色(AFB染色)法对结核病患者痰液标本进行染色。结果:国产的IGRA试剂和TST实验的敏感性分别为85.35%和72.53%,特异性分别为86.54%和53.33%,阳性预测值分别为97.08%和90.41%,阴性预测值分别为52.94%和24.24%,准确性分别为85.22%和69.81%。两种方法对肺结核的检出率分别为85.71%(180/210)和74.76%(157/210),二者相比较,差异有统计学意义(χ2=7.943,P<0.01);两种方法对肺外结核的检出率分别为84.13%(53/63)和68.25%(43/63),二者相比较,差异也有统计学意义(χ2=4.375,P=0.036);但两种方法各自对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异。210例肺结核患者中AFB阳性73例,AFB阴性者137例,其中AFB阳性肺结核患者中IGRA阳性率为89.04%(65/73),AFB阴性肺结核患者阳性率为83.94%(115/137);肺外结核63例患者AFB均阴性,IGRA阳性率为84.13%(53/63)。结论:IGRA比TST对诊断结核病有较高的敏感性与特异性,尤其是对AFB阴性的肺结核和肺外结核有80%以上的检出率,有很好的临床应用前景。     

人β2-微球蛋白的可溶性表达和纯化鉴定

目的:制备高纯度人β2-微球蛋白(β2m),为其结构和功能研究奠定基础。方法:选用两种不同的表达载体p ET15b和p ET21b,表达人β2m;联合使用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、高压液相色谱等方法,纯化人β2m;采用SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS质谱方法,鉴定人β2m。结果:使用改造过的N端组氨酸标签载体p ET15b,在原核表达菌株E.coli 2 BL21(DE3)中,实现了人β2m稳定高效的可溶性表达;联合多种分离纯化方法,获得了色谱纯的人β2m,纯度达99%以上,质谱鉴定正确。结论:实现了人β2m的可溶性表达和制备,为进一步研究MHCⅠ类分子的结构和在免疫系统中的重要作用奠定基础。     

湖北地区儿童急性呼吸道感染病原体研究

目的了解湖北地区儿童急性呼吸道感染(ARI)的病原谱,为临床抗感染及病原体检测提供依据。方法收集947例拟诊断为ARI患儿的血清标本,采用间接免疫荧光法检测其中9种常见病原体的IgM抗体。结果 947例患儿中抗体阳性882例,阳性率为93.1%,其中≤1、1~3、3~6、>6岁各年龄组阳性率分别为87.5%、94.3%、97.0%、96.9%,各组间差异有统计学意义(P<0.05);9种病原体中肺炎支原体阳性率最高,其他依次为乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、甲型流感病毒、嗜肺军团菌血清Ⅰ型、Q热立克次体、肺炎衣原体;混合感染718例,占81.4%,主要是两种的病原体混合感染。结论湖北地区引起儿童急性呼吸道感染的病原体的主要是肺炎支原体、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒;混合感染比较普遍,主要是肺炎支原体和乙型流感病毒的混合感染;病原体感染在各年龄组中存在差异。     

HCV5’UTR靶向性人工M1GS核酶的胞内抗病毒活性

目的基于大肠埃希菌核糖核酸酶P的催化性RNA亚基(M1 RNA),人工构建一种抗丙肝病毒(HCV)的新型靶向性核酶,并进一步鉴定其胞外靶向切割活性及胞内抗病毒作用。方法首先采用计算机软件对HCV基因组保守区———5’非翻译区(5’UTR)的序列与结构进行分析,以确定候选靶位。针对靶位的侧翼序列,设计与之互补的引导序列(GS),然后通过PCR将其共价连接至M1 RNA的3’末端,从而构建靶向性的M1GS核酶。结果针对HCV 5’UTR第67位的胞嘧啶成功构建了一种M1GS核酶———M1GS-HCV/C67。该人工核酶不仅在体外可对靶RNA片段产生特异性切割,在HCV感染的宿主细胞内也能够显著抑制HCV核心蛋白的表达(P<0.05),并使上清液HCV RNA的拷贝数减少约800倍(P<0.01)。结论 M1GS-HCV/C67这种新型靶向性核酶具有良好的体外抗HCV活性,其成功构建为HCV感染的治疗研究提供了另一种潜在途径。