RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究

目的：通过RNA干扰（RNAi）技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞（CRL-1444）高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用.方法：设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4）,以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株（CRL-1444）内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法（Woundhealing法）检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na＋-K＋-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na＋-K＋-ATPase活性的影响.结果：荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71％（P＜ 0.01）;siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17％（P＜ 0.01）;siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义（P＞ 0.05）.CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义（P＞0.05）.划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜ 0.01）.Na＋-K＋-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na＋-K＋-ATPas活性低于siRNA-con对照组（P＜ 0.05）和空白对照组（P＜0.01）.结论：RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平;特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na＋-K＋-ATPase活性明显降低.     

原发性高血压患者血浆ADMA浓度外周循环内皮祖细胞数量的变化

目的探讨原发性高血压（EH）患者血浆非对称性二甲基精氨酸（ADMA）浓度、外周循环内皮祖细胞（EPCs）数量的变化及两者之间的关系。方法选取停止服用降压药至少2周以上并排除冠状动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病的原发性高血压患者46例,对照组25例为健康体检者。采用反相高效液相色谱法（RP—HPLC）测定血浆ADMA含量,流式细胞术分析外周循环EPCs。结果EH组血浆ADMA浓度[（0.363±0．029）μg/ml]显著高于对照组[（0．319±0．022）μg／ml]（P〈0．01）。EH组外周循环EPCs数量[（0．368±0．121）％]显著低于对照组[（0．588±0．139）％]（P〈0．01）。血浆ADMA浓度与外周循环EPCs数量呈负相关关系（r=-0．706,P〈0．01）。结论EH患者血浆ADMA浓度升高,外周循环EPCs数量减少,两者之间呈负相关关系。EH患者循环EPCs数量下降部分原因可能是由于血浆ADMA水平升高所致。