支气管哮喘治疗体会

哮喘的治疗，《丹溪心法》有“哮喘专注于痰”，并提出“未发以扶正气为主，既发以攻邪气为急”的治则，至今仍具有指导意义。     

人血管内皮细胞生长因子基因克隆、表达与纯化

目的研究人血管内皮细胞生长因子121(hVEGF121)基因在pET-24a(+)中的表达,获得高效表达、具有生物学活性的rhVEGF121。方法提取人原髓白血病细胞(HL60)总RNA,RT-PCR扩增hVEGF121基因,经DNA序列分析后,克隆于高效原核表达载体pET-24a(+),并转化到大肠杆菌B121(DE3)中,经IPTG诱导表达,超滤复性,DEAESephamseFastFlow阴离子交换和SephacryS-100分子筛色谱纯化后,以HUVEC测定其生物学活性。结果SDS-PAGE结果显示,目的蛋白质以包涵体形式存在,表达量达菌体总蛋白质的20%,纯化后rhVEGF121纯度达95%以上,生物学活性检测证实,具有刺激HUVEC增殖的功能。结论在原核系统中实现了hVEGF121的高效表达。     

VEGF与TNFR联合治疗股骨头坏死实验研究

目的 探讨应用血管内皮细胞生长因子(VEGF)与肿瘤坏死因子受体(TNFR)联合治疗股骨头坏死的治疗效果.方法 新西兰兔30只,26只兔耳缘静脉注射马血清,臀肌注射醋酸泼尼松龙,制造激素性股骨头坏死动物模型.动物随机分为4组:A组:VEGF/TNFR 治疗组;B组:VEGF治疗组;C组:对照组;D组:正常对照组.治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体及TNFR至股骨头.于治疗后,应用ELISA法测血清中TNF-α浓度的变化,病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化.结果 VEGF/TNFR治疗组,TNF-α浓度及活性明显降低,HE染色结果 :VEGF/TNFR治疗组可见软骨细胞修复性增生,骨髓腔造血组织出现增生,栓塞的血管旁边出现新生的血管.结论 VEGF/TNFR联合治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复.     

重组人血管内皮细胞生长因子工程菌高密度发酵工艺研究

目的建立人血管内皮细胞生长因子(BL21/pET-24a/hVEGF121)工程菌的高密度发酵工艺.方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、诱导时间及补料进行优化.结果采用M9复合培养基、活化至对数生长期时诱导4 h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,可使菌体量提高至68 g/L,rhVEGF121的表达量达菌体蛋白总量的23%.结论该发酵工艺提高了工程菌的产量和rhVEGF121的表达水平.     

预刺激淋巴细胞的伸瘤运动

目的对淋巴细胞的伸瘤现象进行描述，并探讨伸瘤的一些影响因素及伸瘤运动与淋巴细胞功能的关系：方法分离外周血淋巴细胞．用PHA、IL-2、a—CD3、PHA＋IL-2预刺激后与口腔上皮癌细胞混合作用于倒置显微镜下直接观察淋巴细胞的粘（伸）瘤情况；取混合细胞经冷丙酮固定并Gimasa染色后在镜下观察淋巴细胞与瘤细胞作用情况，并于1、2、4、6h，取混合淋巴细胞于扫描电镜下观察伸瘤运动的发生、发展变化结果与未预刺激组比较．PHA组能提高粘瘤指数，IL-2．a-CD3、PHA＋IL-2均能提高淋巴细胞的粘（伸）瘤指数，以PHA＋IL-2对粘（伸）瘤率的提高作用最为显著．电镜下发现在粘（伸）瘤运动过程中，外周血淋巴细胞的形态也发生变化：结论淋巴细胞预刺激能促进伸瘤运动的发生．伸瘤运动可能是淋巴细胞的一种杀伤方式．     

角质细胞生长因子-2的发酵及纯化工艺研究

目的研究重组人角质细胞生长因子 2 (rhKGF 2 )工程菌的高密度发酵和提纯工艺。方法通过增加培养基营养成分 ,发酵过程补加葡萄糖 ,获得高产率菌体。细菌裂解液经硫酸铵沉淀、分子筛、肝素亲和色谱和离子交换色谱等方法进行纯化 ,电泳分析结果。结果每 1L发酵液可获得菌体 12 .2g ,表达率达 2 8.7%。纯化后rhKGF 2纯度达 97%。结论rhKGF 2工程菌可获得高密度发酵。纯化工艺适用于rhKGF 2的大量制备     

SA/hIL21双功能融合蛋白的表达、纯化及生物学活性检测

目的 制备链亲和素(SA)标记的人白细胞介素21融合蛋白(SA-hIL-21),检测其生物学活性.方法 构建hIL21-SA-pET21及pET24a-SA-hIL21质粒,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达两种双功能融合蛋白,并利用镍金属螯合层析柱(Ni-NTA)纯化,之后透析复性,Western blotting进行鉴定,最后利用MTT法检测hIL21-SA及SA-hIL21融合蛋白与抗CD3单克隆抗体(anti-CD3)共刺激人外周血淋巴细胞的增殖活性,流式细胞仪分析两种融合蛋白对生物素化的MB49肿瘤细胞的锚定修饰效率.结果 hIL21-SA及SA-hIL21重组融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体蛋白的30%,经复性后hIL21-SA及SA-hlL21具有了双重活性,即不仅可以与抗CD3单抗共刺激淋巴细胞的增殖,而且具有了SA介导的高效结合已生物素化的MB49肿瘤细胞表面的功能(表面修饰效率95.18%,96.91%).结论 本实验成功研制了具有双重活性的hIL21-SA及SA-hlL21融合蛋白,两种融合蛋白的双功能活性无显著性差异,该项研究为SA/hIL21双功能融合蛋白应用于肿瘤疫苗以及肿瘤局部治疗奠定了基础.     

双管喉罩在ICU应用的可行性研究

双管喉罩(PLMA,食管引流型喉罩)是目前最新颖、复杂、精巧的一代特殊喉罩,在加强喉罩通气功能的同时又能够防止反流和误吸.它的主要特点是增加了一根引流管,既能与气道相通又能与食管相通,对胃肠道起到密封和引流作用,较普通喉罩更安全和更具临床适应性.PLMA具有独特的优势和特点,深受广大麻醉工作者青睐,第三代喉罩在临床麻醉中的应用已有研究报道,在ICU患者的应用报道甚少,个别ICU患者应用PLMA的病例报道也缺乏可比性[1～3].本研究就ICU患者对PLMA和气管插管(TI)的应用情况进行了观察和比较,探讨PLMA在ICU用的可行性.     

扶正排毒通肠汤治疗恶性肿瘤化疗毒副作用60例

目的:观察扶正排毒通肠汤对减轻化疗毒副作用,提高生活质量,促进肿瘤消退的临床疗效.方法: 120例恶性肿瘤化疗病人随机分为服中药组和对照组各60名.两组根据病情选用"铂类"加"氟尿嘧啶"或加"亚叶酸铂"等药物为基础进行化疗;服药组在化疗期间加服扶正排毒通肠汤.结果:治疗4个疗程后,服中药组60例中显效39例,有效13例...