四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定

目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应用NIH313细胞测定病毒滴度。将RevTet-On感染永生化大鼠星形胶质细胞,用有限稀释法挑选阳性细胞单克隆后扩大培养,每个克隆瞬时转染含萤光素酶报告基因的质粒pRevTRE-Lue,加入强力霉素48h后分别检测其萤光素酶活性值,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低的细胞株并检测其诱导表达的时效、量效关系。结果 RT-PCR结果显示逆转录病毒包装成功,病毒最高滴度为7．4×105CFU／ml。RevTet-On转染永生化大鼠星形胶质细胞后挑选出48个单克隆,瞬时转染pRevTER-Luc后筛选出1株高表达低背景细胞株, 其诱导表达值为876．1 RLU,背景表达值为42．5 RLU,诱导倍数为20．6。该细胞株在加入诱导因子强力霉素1 h后目的基因即开始表达,在24 h时达到高峰,在强力霉素浓度100-2 000 ng/ml的范围内, 其诱导表达活性与药物浓度呈剂量依赖性。结论含四环素调控系统的永生化大鼠星形胶质细胞株诱导活性可靠,可用于调控表达外源基因的研究。     

紧闭环路系统在新生儿麻醉中的应用

目的评价紧闭环路系统在新生儿麻醉中应用的安全性和有效性。方法53例新生生儿手术。在全身麻醉气管插管后。行机械定压模式呼吸通气30min，监测通气前后动脉血气值、SpO2、体温、PetCO2、气道压、呼吸频率、心电等参数。结果新生儿手术全身麻醉控制呼吸，根据PetCO2适当调节呼吸参数，采用定压呼吸模式，能够维持PaO2、PaCO2于正常范围。结论紧闭环路系统能安全有效地应用于新生儿手术。     

小儿骶管麻醉中不同镇静方法镇静效果的研究

目的　评价不同镇静方法在小儿骶管麻醉术中镇静的优缺点 ,从而找到一种较为理想的镇静方法。方法　选择 45例ASAⅠ～Ⅱ级在骶管麻醉下行择期下腹部、会阴短小手术的患儿 ,体重 9～ 2 4kg。随机分为氟芬合剂对照组 (I)组、咪唑安定 (M )组和异丙酚 (P)组 ,每组 15例。I组 :氟芬合剂 (芬太尼 2 μg/kg) ;M组 :静脉泵注咪唑安定 1.5～ 2 .0 μg/kg·min ;P组 :静脉泵注异丙酚 2 5～ 75 μg/kg·min。每组患儿术中镇静评分在 2～ 4分。 结果　I组镇静效果比M组和P组差 (P <0 .0 5 ) ,呼吸抑制和术后躁动发生率较高。清醒时间I组比M组和P组延长 ,M组比P组延长 (P <0 .0 5 )。结论　持续静脉泵注异丙酚或咪唑安定是小儿骶管麻醉术中较为理想的镇静方法。     

异丙酚对慢性神经痛大鼠脊髓诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 研究不同剂量异丙酚对慢性神经痛大鼠触诱发痛痛阈及其脊髓组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的影响。方法 Wistar大鼠40只,随机分为四组,Ⅰ组为空白对照;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组结扎左侧坐骨神经。术后第7天,Ⅰ、Ⅱ组腹腔注射生理盐水50 ml·kg-1,Ⅲ、Ⅳ组腹腔注射异丙酚50 ml·kg-1或75ml·kg-1,每天一次共6 d。在术后第6、10和12天,使用Von Frey法分别测定各组大鼠触诱发痛痛阈,比较不同剂量的异丙酚对大鼠痛阈的影响。术后第12天取L4-5和L5-6节段脊神经节和脊髓组织,采用半定量RT-PCR法,对各组大鼠脊髓组织iNOS mRNA表达进行检测。结果 术后第10和12天,Ⅲ、Ⅳ组大鼠双侧的痛阈值高于Ⅱ组(P<0.05);术后第12天,Ⅲ、Ⅳ组大鼠脊髓组织iNOS mRNA表达低于Ⅱ组(P<0.05)。结论 异丙酚通过抑制脊髓组织iNOS mRNA转录,降低其表达,而起到一定的抗伤害作用。     

氢化可的松对大鼠脊髓星形胶质细胞体外分泌TNF-α及释放EAAs的影响

目的观察氢化可的松对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞分泌TNF-α及释放EAAs的影响.方法体外纯化培养大鼠脊髓星形胶质细胞,分为正常对照(C组),LPS终浓度为0.1 mg/L(L1组);LPS终浓度为1 mg/L(L2组);LPS终浓度为1 mg/L及氢化可的松终浓度为10-6mol/L(HC1组),LPS终浓度为1mg/L及氢化可的松终浓度为10-5mol/L(HC2组).分别孵育0,1和2h后取细胞培养液,应用酶联免疫分析方法(ELASA)检测上清液中TNF-α的浓度;用高效液相色谱仪测定各组培养细胞在0,1和2 h时谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)的释放量.结果在1,2 h时,与C组相比,L1、L2组TNF-α分泌量,Glu,Asp释放量均显著升高(P＜0.05);与L2组比较,HC1,HC2组的TNF-α分泌量降低(P＞0.05和P＜0.05),HC1,HC2组的Glu,Asp释放量降低(P＜0.05).结论氢化可的松在体外抑制脊髓灰质星形胶质细胞分泌TNF-α及释放EAAs,抑制程度与浓度相关.     

重度创伤患者外周血单个核细胞HLA-DR的表达与创伤后免疫功能障碍的关系

为了探讨创伤后机体细胞免疫、体液免疫及红细胞免疫功能障碍与外周血单个核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达率之间的关系，本文选择了３０例重度复合伤病人。在住院治疗期间，连续观察了患者受伤当日、伤后第３、１０、２０ｄ及出院前一天外周血单个核细胞ＨＬＡＤＲ表达率的变化及其与细胞免疫、体液免疫及红细胞免疫功能状况之间的相关性，发现创伤病人自受伤当日至出院前外周血单个核细胞膜上ＨＬＡ－ＤＲ表达率的变化无统计学意义（Ｐ＞０．０５），提示创伤后免疫功能障碍不是由于外周血单个核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达异常所致。     

环杓关节脱位与气管插管术

杓状软骨脱位是气管插管术较为少见的并发症[1] 。我院于 2 0 0 1年实施气管内全身麻醉 80 0 0例 ,共发生杓状软骨脱位 5例。本文将探讨气管内插管所致杓状软骨脱位的病因、类型、诊断与治疗。资料与方法5例因气管内插管所致环杓关节脱位病人的一般资料详见表 1。下面摘录 2例典型病例。例 1　女 ,5 7岁 ,因左上腹不适入院。术前诊断胃癌 ,肝、肾、心、肺等重要脏器功能正常。选择气管内全身麻醉 ,以芬太尼 5 μｇ/ｋｇ、咪唑安定 0 0 5ｍｇ/ｋｇ、丙泊酚 2ｍｇ/ｋｇ、维库溴铵 0 4ｍｇ/ｋｇ、琥珀胆碱 2ｍｇ/ｋｇ快速诱导后 ,喉镜显露良…     

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ及Cα表达的变化

目的 评价慢性神经收缩损伤（CCI）和脊神经结扎（SNL）模型大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ及Cα表达的变化，以探讨其在神经病理性疼痛中枢敏化中的作用。方法 24只SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和SNL组，CCI组于左肢制备CCI模型，SNL组于左肢制备SNL模型。分别于术前2d、术后2、4、7d行机械痛阈和辐射热痛阈测定。术后7d测痛后大鼠灌注固定，采用免疫组化法检测脊髓背角蛋白激酶Cγ、Cα和Fos蛋白的表达。结果 与假手术组相比，CCI组和SNL组术后4、7d机械痛阈和辐射热痛阈降低，术后7d脊髓背角蛋白激酶Cγ、Cα和Fos蛋白表达增加（P〈0．05）。与CCI组相比，SNL组机械痛阈、辐射热痛阈在各时间点差异无统计学意义，蛋白激酶Cα和Fos蛋白表达差异亦无统计学意义（P〉0．05），而蛋白激酶Cγ表达升高（P〈0．05）。结论 神经病理性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶Cγ及Cα表达的增加，可能是产生中枢敏化的机制之一。     

吸入麻醉与全凭静脉麻醉用于乳腺癌根治术的比较

目的:对比全凭静脉麻醉下置入喉罩进行高频喷射通气与静吸复合麻醉机械通气两种不同方法用于乳腺癌根治术的特点。方法:60例择期乳腺癌根治术患者随机分为静脉麻醉与吸入麻醉2组,每组30例,静脉麻醉组采用静脉注射泵作全凭静脉麻醉,保留患者自主呼吸,置入喉罩行高频喷射通气;吸入麻醉组采用快速静脉诱导,气管插管,作机械通气,用异氟醚维持麻醉。观察两组麻醉对循环、呼吸、动脉血气值、苏醒时间的影响及术后恶心、呕吐、躁动、过度镇静等不良反应。结果:两组在麻醉时间、手术时间、停药至拔管时间差异无显著性(P>0.05),所有患者静脉注射异丙酚后血压心率显著降低(P<0.01),插管后又明显升高,但静脉麻醉组显著低于吸入麻醉组(P<0.05),两组动脉血气值在通气30min后差异亦无显著性(P>0.05),术后在苏醒室观察2h,哭闹、烦躁、恶心,吸入麻醉组明显多于静脉麻醉组,静脉麻醉组易引起过度镇静,两组间差异有显著性(P<0.05)。结论:全凭静脉麻醉高频喷射通气与静吸复合全麻机械通气相比效果满意,苏醒同样快,并发症少,但易致过度镇静。     

紧闭环路系统在新生儿麻醉中的应用

目的:评价紧闭环路系统在新生儿麻醉应用中的安全性有效性。方法:53例新生儿手术,在全身麻醉气管插管后,行机械定压模式呼吸通气30min,监测通气前后动脉血气值、SpO2、体温、PetCO2、气道压、呼吸频率、心电等参数。结果:新生儿手术全身麻醉控制呼吸,根据PetCO2适当调节呼吸参数,采用定压呼吸模式,能够维持PaO2、PaCO2于正常范围。结论:紧闭环路系统能安全有效地应用于新生儿手术。