老年退变性腰椎滑脱症患者脊柱骨盆矢状面参数研究

目的分析比较≥65岁老年退变性腰椎滑脱症（degenerative lumbar spondylolisthesis,DLS）患者与同年龄段无滑脱人群的脊柱骨盆矢状面参数。方法选择2004年1月~2014年1月间于本院就诊,影像学资料完整,无峡部裂、椎体肿瘤,椎体结核、椎体压缩性骨折等疾病,且无腰椎手术史的≥65岁的DLS患者50例为滑脱组。以相同纳入标准选择50例年龄性别匹配的无腰椎滑脱的老年人为对照组。测量滑脱组患者腰椎滑脱椎间盘角和滑脱率均值,再测量并比较2组患者的腰椎前凸角（lumbar lordosis,LL）、骨盆入射角（pelvic incidence,PI）、骨盆倾斜角（pelvic tilt,PT）和骶骨倾斜角（sacral slope,SS）。滑脱组内再按性别分组比较各参数,并分别计算2组患者各参数间的相关性。结果滑脱组患者滑脱椎间盘角为7.4°±5.2°,滑脱率为（22.5±9.5）%。滑脱组患者的LL、PI、PT、SS均明显高于对照组。滑脱组内分性别比较时,滑脱参数和腰椎矢状面参数差异均无统计学意义。结论老年DLS患者较同龄无腰椎滑脱人群有着更大的LL、PI、PT、SS。性别因素可能对老年DLS患者的滑脱参数和主要脊柱骨盆矢状面参数无显著影响。     

甲状旁腺素通过磷脂酶C非依赖途径激活蛋白激酶C

目的利用基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术的检测PKC激活或PKC-delta激活的报告分子来确定PTH是否可以通过PLC非依赖途径激活PKC和PKC-delta。方法将表达PKC激活报告分子(CKAR)的质粒和表达PKC-delta激活报告分子的质粒转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并以此判断佛波酯(TPA)是否激活PKC和PKC-delta。将表达甲状旁腺素1型受体(PTHR1)的质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒共转染HEK293细胞,培养72h后通过共聚焦显微镜检测FRET的改变,并判断PTH(1-34)、G1R19(1-34)和0.1%的三氟乙酸(TFA)对PKC和PKC-delta的作用。结果在转染CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,TPA均使青色荧光与黄色荧光的强度之比(C/Y)增加。在共转染PTH1R质粒与CKAR质粒或PKC-delta质粒的HEK293细胞,PTH(1-34)和G1R19(1-34)均增加了C/Y的值,而0.1%TFA未引起C/Y的改变。结论 PTH与PTHR1结合后通过PLC非依赖途径激活PKC/PKC-delta。     

中国人骨质疏松症生存质量简明量表的编制与信效度

目的：设计一份简短实用的中国人原发性骨质疏松症患者的专用生存质量量表,评价该疾病的生存质量状况。方法以QUALEFFO-41问卷为蓝本,通过翻译、文化调适、条目筛选等过程,编制出16条目组成的中国人骨质疏松症生存质量简明量表（COQOL）,在量表考评阶段,选取2013年10月~2014年1月自愿接受骨密度检查的门诊或住院患者进行生存质量调查,144份评估结果通过统计学分析方法进行处理,完成量表的心理测量学考评。结果量表的重测信度、同质信度、内容效度、结构效度、效标效度评价结果良好。结论 COQOL量表在评价骨质疏松症患者的生存质量上有较好的信度、效度,具有潜在的临床推广价值。     

口腔专业医学生临床实习前后关注问题的调查与分析

目的调查和分析不同年级口腔医学专业学生的心理特点,了解其心理变化,为实习生的实习前辅导和在校学生的合理培养提供实证依据。方法对175名不同年级口腔专业学生以匿名问卷调查形式,就学生临床实习前后担心及关注问题,未来职业方向的选择等进行调查。结果大一（47％）、大三（43％）、大五（45％）的学生在未来均想从事口腔修复专业工作,30％及39％的大二和大四的学生希望从事口腔正畸专业工作;97％的学生在实习前最关注实习医院的带教教师水平,实习后79％的学生则认为实习医院最重要;67％的学生在实习前最担心患者对其治疗结果不满意,实习后51％的学生最担心影响考研。结论应重视提高教育者自身修养,根据实习前后的调查情况,引导学生结合个人兴趣及实践技能掌握情况选择正确的就业方向,同时鼓励学生开阔视野,不能只注重眼前利益,为将来走向医疗岗位为患者服务打好坚实的基础。     

后路经伤椎椎弓根螺钉固定在胸腰椎骨折治疗中的应用

目的探讨经伤椎椎弓根螺钉固定对胸腰椎骨折的复位和固定效果。方法对23例胸腰段单节段骨折采用后路经伤椎置入椎弓根螺钉治疗,观察术后伤椎椎体复位情况。结果23例均取得良好复位及固定效果,伤椎压缩百分比从术前(41.2±9.6)%到术后(4.2±4.8)%。随访1年复查X线片椎体高度无丢失,内固定无松动或断裂。结论经伤椎椎弓根螺钉固定治疗胸腰椎骨折可达到有效复位,获得良好固定效果。     

甲状旁腺素受体真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立

目的构建小鼠甲状旁腺素受体（PTHR）及其突变受体（DSEL）全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达PTHR及
DSEL的HEK293细胞系,以应用于甲状旁腺素（PTH）模拟肽活性药物筛选及其信号通路的研究。方法通过双酶切、胶回收方
法分别纯化目的片段(PTHR、DSEL基因)和质粒pcDNA3.1（+）,二者分别由DNA限制性内切酶EcoRⅠ与Not Ⅰ双酶切,经T4
DNA Ligase连接的方法将PTHR、DSEL基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1（+）中,采用测序方法及DNA限制性内切酶EcoR
Ⅰ与Not Ⅰ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1（+）-PTHR、pcDNA3.1（+）-DSEL及空质粒pcDNA3.1
（+）分别转染至HEK293细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,、RT-PCR及ELISA检测转染细胞PTHR、DSEL的表达情况。结果重
组质粒经基因测序及DNA限制性内切酶EcoRⅠ与Not Ⅰ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1（+）-PTHR、pcDNA3.1（+）- DSEL
构建正确。重组体经脂质体法转染HEK293 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,ELISA检测到PTHR、DSEL基因在
重组质粒表达载体pcDNA3.1（+）-PTHR、pcDNA3.1（+）-DSEL转染的HEK293中成功表达。RT-PCR方法检测到PTHR、DSEL
基因在转录水平的表达。ELISA方法检测到重组质粒转染的HEK293中,加入甲状旁腺激素刺激后,PLC、cAMP蛋白表达量远高
于空质粒pcDNA3.1（+）转染的HEK293中PLC、cAMP的表达。结论成功构建了稳定高表达PTHR、DSEL的HEK293细胞,该
稳定转染细胞系的建立为进一步研究甲状旁腺素受体下游信号通道的分子机制以及筛选其模拟肽作用的活性奠定了实验基础。
     

甲状旁腺激素通过非依赖PLC的PKC途径抑制成骨细胞的凋亡

目的观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路（PTH/nonPLC/PKC）是否会对成骨细胞（MC3T3-E1）的凋亡以及 细胞数量具有影响。方法培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状 态,随机分为5 组：按100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH （1-34）+1 μmol/L Go6983,1 μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数 试剂盒（CCK-8）和Caspase-Glo® 3/7试剂盒（caspase-3）检测细胞的细胞数量与凋亡。结果CCK-8检测结果显示,［Gly1, Arg19］ hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异, 48 h［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,可以明显提高细胞的数量（P<0.05）。进一步的研究发现在 ［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组添加抑制剂Go6983 后,细胞数量增多的效应消失（P<0.05）。Caspase-3 检测凋亡结果显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡（细胞凋亡受到抑制）,但是差 异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,前者可以明显抑制细 胞凋亡（P<0.05）,给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论PTH的nonPLC/PKC信号转导通路可能在长时间 （48 h）作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。     

共育体系中成骨细胞和破骨细胞生物学特性观察

目的建立成骨细胞和破骨细胞的体外共育体系,观察在此体系中成骨细胞和破骨细胞生物学特性的变化,探讨成骨细胞和破骨细胞间的相互作用。方法取髂骨松质骨,Ⅱ型胶原酶消化,分次获得成骨细胞和破骨细胞。建立培养上清相通但二者互不接触的成骨细胞-破骨细胞共育模型。以细胞增殖(MTT法)、碱性磷酸酶(ALP)活性代表成骨细胞的成骨活性,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性、骨吸收陷窝面积代表破骨细胞的破骨能力,检测共育对成骨细胞和破骨细胞生物学特性的影响。结果成骨细胞呈饱满的梭形,ALP染色阳性;破骨细胞呈多核,TRAP染色阳性,可以吸收骨质形成骨陷窝。当成骨细胞与破骨细胞共育后,其MTT法OD值(0.60±0.08)较单独培养时(0.36±0.03)明显提高(P=0.000);其ALP活性(23.37±2.48)u/mg较单独培养时(18.33±0.34)u/mg明显提高(P=0.000)。破骨细胞与成骨细胞共育后,形成骨吸收陷窝的平均面积犤(6.55±0.34)×10-2犦μm2较单独培养时犤(5.15±0.17)×10-2犦μm2明显增大(P=0.000)。结论共育体系中成骨细胞和破骨细胞的功能相互促进,为骨组织代谢的体外研究提供了可靠的模型。     

白细胞介素-18在骨关节炎滑膜细胞中的表达及意义

目的 了解白细胞介素(IL)-18在骨关节炎(OA)患者和非OA患者滑膜细胞中表达的差异.方法 取OA患者(22例)与非OA患者(8例)关节滑膜组织,分别原代培养滑膜细胞,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测2组滑膜细胞培养上清液中IL-18蛋白的表达水平,采用免疫细胞化学方法 定性观察IL-18在2组滑膜细胞问表达的差异,统计学处理采用t检验.结果 ELISA检测OA患者细胞培养上清液中IL-18的含量为(63.9±21.4)pg/ml, 非OA患者细胞培养上清液中IL-18的含量为(17.7±1.5)pg/ml,2组比较差异有统计学意义(t=10.044,P<0.01);免疫细胞化学方法 显示在OA患者滑膜细胞中IL-18蛋白的表达呈阳性.胞质为棕黄色深染,而在非OA患者滑膜细胞中胞质淡染.结论 IL-18在OA关节滑膜细胞中表达上调, 提示IL-18可能直接参与了OA的发病过程.