大鼠肺微血管内皮细胞培养及其粘弹性研究

为了建立肺微血管内皮细胞培养方法 ,研究肺微血管内皮细胞粘弹性。我们取大鼠肺周边组织 (宽度不应大于 1.5 mm) ,将组织剪成 1.5 mm× 1mm× 1mm的组织块 ,贴入无菌的 2 5 cm3培养瓶 ,每瓶 10～ 15块 ,同时加入含 2 0胎牛血清、肝素 90 U/ml、L-谷氨酰胺 4mmol、青霉素 10 0 U/ml和链霉素 10 0 μg/ml的 DMEM培养基 3ml,放入 37℃二氧化碳培养箱中静置培养 ;8h后翻转培养瓶 ,6 0 h后取出肺组织块 ,接着继续培养 2～ 4d后进行传代。最后消化分离肺微血管内皮细胞 ,用微管吸吮系统研究肺微血管内皮细胞粘弹性。结果显示 :肺微血管内皮细胞通过倒置相差显微镜观察 ,细胞呈鹅卵石镶嵌状排列 ,状如梭形或多角形 ,大小均匀 ,胞核清晰 ,呈卵圆形 ,胞浆丰富 ; 因子相关抗原免疫荧光染色呈阳性 ;肺微血管内皮细胞弹性模量 K1 =49.3± 9.2 Pa、K2 =73.2±2 4.8Pa、粘性系数 μ=19.2± 7.2 Pa.s。这些结果表明用组织块法培养肺微血管内皮细胞是可行的 ,肺微血管内皮细胞表现出较大的刚性     

高强度聚焦超声阻滞腰交感神经节对周围动脉闭塞动物模型外周血5-羟色胺及前列腺素E2的影响

目的 使用高强度聚焦超声(HIFU)对犬周围动脉闭塞模型进行腰交感神经节阻滞,观察对外周血5-羟色胺(5-HT)及前列腺素E2(PGE₂)的影响,探讨其治疗缺血性疼痛的可能机制。 方法 26只杂种家犬随机分为3组: HIFU疗组(A组),非治疗组(B组),正常对照组(C组)。A组和B组在无菌条件下制作后肢缺血模型, A组术后2周用HIFU阻滞第2~6腰交感神经节,B组不予处理。A组和B组每次随机选2只犬在治疗0周(造模后2周)、治疗后1周、2周、1个月、2个月、4个月分别抽血检测血5-羟色胺及前列腺素E2。 结果 A组和B组在治疗0周外周血5-HT和PGE₂含量与C组相比,均明显升高且差异有统计学意义(P<0.05)。A组治疗1周后外周血5-HT及PGE₂浓度呈逐渐下降趋势,而B组则总体呈现增高趋势。两组治疗1周后各时间点外周血5-HT及PGE₂比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 慢性周围动脉闭塞缺血致痛可使犬外周血5-HT和PGE₂含量升高,HIFU阻滞腰交感神经节缓解疼痛的机制可能与降低外周血5-HT和PGE₂含量有关。     

相变纳米液滴和微泡增强HIFU在体模中所致凝固性坏死的对比

目的 对比研究相变纳米液滴-包裹相变温度29℃的全氟戊烷的脂质纳米液滴(L-PFP)和微米级微泡(SonoVue)增强HIFU在体模中的消融效果.方法 分别将0.3 ml的生理盐水、L-PFP和SonoVue各自加入到100 ml的蛋清体模中,制成对照组、L-PFP组、SonoVue组.然后在B超引导下进行HIFU定点辐照,声功率100 W、辐照时间10 s、辐照深度14 mm.比较3组辐照前后凝固性坏死的体积和能效因子(EEF).结果 辐照后即刻,B超图像上3组的靶区均出现强回声,L-PFP组强回声范围最大;HIFU在体模中形成的凝固性坏死体积为L-PFP组 >SonoVue组 >对照组(P <0.05);3组的EEF为对照组 >SonoVue组 >L-PFP组(P <0.05).HIFU辐照过程中L-PFP组的开始温升速度和最高温度均大于SonoVue组.结论 与微米级微泡相比,相变脂质纳米液滴的对HIFU辐照的增效效果更加明显.     

相变高分子微球增效高强度聚焦超声消融裸鼠骨肉瘤

目的制备相变高分子微球,观察其增效高强度聚焦超声(HIFU)消融裸鼠骨肉瘤模型的效果。方法制备包裹液态氟碳的高分子微球,检测其形态、结构、粒径电位及相变条件;建立裸鼠骨肉瘤模型,随机分为空白组(不予处理)、对照组(注射生理盐水)和实验组1、2、3(注射稀释倍数分别为5、10、20倍的Pct-MP溶液),处理后立即用海级星对肿瘤进行辐照。于辐照后即刻和72h提取标本并观察坏死面积、行HE染色,并对72h提取的标本的坏死周边组织进行细胞增殖和凋亡测定。结果成功制备相变高分子微球;HIFU辐照后即刻提取的标本,实验组1、2的坏死面积与对照组差异均有统计学意义(P均0.05),但与实验组3的差异无统计学意义(P0.05);72h后提取的标本,实验组1、2的坏死面积进一步扩大、与辐照后即刻提取的标本的差异有统计学意义(P均0.05)。HIFU辐照72h后,实验组1、2、3与对照组间坏死周边组织的凋亡和增殖指数差异均有统计学意义(P均0.05)。结论在骨肉瘤裸鼠模型中,自制相变高分子微球能够增强HIFU对于骨肉瘤的消融效果,增强作用与微球浓度有关。     

高强度聚焦超声消融不同T2WI信号子宫肌瘤疗效差异的组织病理学研究

目的从组织病理角度探讨导致高强度聚焦超声(HIFU)消融T2WI低、等、高信号子宫肌瘤疗效差异的原因。方法收集手术摘除的子宫肌瘤标本44个,对患者术前行MR T2WI检查,根据T2WI信号强度将肌瘤分为低信号、等信号、高信号三类。术后收集标本行HE、苦味酸-天狼猩红染色,并进行组织平滑肌细胞计数、胶原纤维含量定量分析。结果 44个肌瘤标本中,T2WI低信号肌瘤7个,等信号肌瘤9个,高信号肌瘤28个,其组织平滑肌细胞计数分别为195.66±28.92、223.17±36.88、261.03±59.88,胶原纤维含量分别为(64.29±8.40)%、(55.22±10.38)%、(50.11±11.50)%,低信号肌瘤组织平滑肌细胞计数、胶原纤维含量与高信号肌瘤的差异均有统计学意义(P均0.01),但等信号肌瘤组织平滑肌细胞计数、胶原纤维含量与高、低信号肌瘤间的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论 T2WI低、等、高信号子宫肌瘤组织平滑肌细胞数、胶原纤维含量的差异,可能是导致HIFU消融疗效差异的重要原因。     

HIFU消融不同T2WI信号子宫肌瘤疗效差异的组织声学性质

目的探讨HIFU消融T2WI低、等、高信号子宫肌瘤组织声衰减和声速的差异。方法收集经手术切除的子宫肌瘤标本45个。对患者术前行MR检查,根据T2WI信号强度将肌瘤分为低信号、等信号、高信号3种类型。采用插入取代式脉冲传输法测量肌瘤标本的声速和声衰减。结果 45个子宫肌瘤标本中,T2WI低信号肌瘤7个,等信号肌瘤9个,高信号肌瘤29个,其组织声速分别为(1 597.86±15.17)m/s、(1 586.70±10.83)m/s、(1 576.57±10.06)m/s,低、等信号肌瘤组织与高信号肌瘤组织比较差异均有统计学意义(P均0.05);声衰减分别为(4.03±1.34)dB/cm、(2.54±1.17)dB/cm、(1.04±0.66)dB/cm,低和等信号肌瘤组织与高信号肌瘤组织、低信号肌瘤组织与等信号肌瘤组织比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 T2WI低、等、高信号子宫肌瘤组织声速、声衰减的差异可能是导致HIFU消融子宫肌瘤疗效差异的重要原因。     

生物医学工程专业“4+1”本硕融合培养模式研究

重庆医科大学于2018年与英国邓迪大学探索生物医学工程专业“4+1”本硕融合培养模式，从教育模式、课程对接与学分互认、合同签订与宣传、过程考核与管理、学位授予等多方面进行探讨。该项目于2019年正式签约，同年低年级学生参加“邓迪大学暑期夏令营”项目，2020年高年级学生正式进入该融合培养项目。通过第一批学生的反馈来看，生物医学工程专业“4+1”本硕融合培养模式能够从不同角度引导学生，有利于拓宽学生国际视野，为生物医学工程专业人才培养注入强劲的力量。     

高强度聚焦超声对裸鼠皮下人胶质瘤的治疗作用

目的 通过研究高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对裸鼠皮下人胶质瘤模型作用后的病理转归,探讨其治疗胶质瘤的有效性和安全性.方法 选取24只裸鼠,建立裸鼠皮下人胶质瘤模型,随机分为对照组和实验组.用频率9.7 MHz,焦距4.5 mm,声强2500 W/cm2的HIFU连续作用20 s,于急性期(＜3 d)、亚急性期(4～14 d)、慢性期(15～30 d)观察各组肿瘤的生长情况;行2,3,5一三苯基氯化四氮唑(triphenyl tetrazolium choloride,TYC)染色、组织学切片及电镜检查.结果 24只裸鼠全部成瘤,接种20 d后肿瘤体积为(166.56±9.23)mm3,在HIFU作用7 d后,实验组肿瘤体积倍增时间(tumor volume doubling time,TD)与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).TTC染色显示胶质瘤的生物学焦域为(66.12±2.52)mm3.HE染色示照射区即刻就发生凝固性坏死,并随观察时间的延长坏死越明显;在亚急性期和慢性期可以观察到明显的交界区形成,且在照射区、交界区之间形成锐利的边界.电镜示细胞超微结构出现典型的凝固性坏死改变.结论 在本试验设定参数及声学剂量情况下,HIFU能够准确、完全杀灭照射区胶质瘤,有望成为治疗胶质瘤的新途径.     

病理性瘢痕与细胞因子

随着细胞生物学、生物化学和分子生物学领域对病理性瘢痕的研究不断深入，人们对细胞因子在瘢痕形成中的作用已逐步得到重视，有关病理性瘢痕发生机制与细胞因子间关系的研究已有大量报道，但机制尚未完全明了。现就近年来涉及的部分研究进展概述如下。     

高强度聚焦超声与无水乙醇毁损腰交感神经节对犬后肢动脉闭塞病变影响的比较研究

目的：用无水乙醇和高强度聚焦超声（HIFU）阻滞后肢动脉闭塞犬腰交感神经节，比较两种处理方式对后肢皮肤温度、神经节形态结构及脊髓P物质影响的差异。方法：27只杂种犬制作后肢缺血模型，术后2周随机分为3组（各组n=9）：对照组（A组），HIFU治疗组（B组），乙醇治疗组（C组）。A组不予处理，B组和C组分别用HIFU和无水乙醇阻滞腰交感神经节。各组在造模前、治疗前（造模后2周）、治疗后1周分别检测肢体皮肤温度、神经节形态结构及脊髓P物质含量的变化。结果：（1）三组造模后与造模前相比皮肤温度均显著降低（P〈0．05），治疗后B、C两组回升。（2）镜下B组所有神经元细胞出现坏死；C组大部分神经元坏死。（3）SP免疫阳性反应物集中分布在脊髓背角Ⅰ、Ⅱ层，造模后各组脊髓腰段SP的平均光密度（OD）值与造模前相比均显著升高（P〈0．01），治疗后B、C两组脊髓腰段SP的OD值较治疗前显著降低（P〈0．05），组间无显著差异（P〉0．05），结论：高强度聚焦超声和无水乙醇均可有效阻滞腰交感神经节，两种方法在对后肢动脉闭塞犬后肢皮肤温度、脊髓P物质改变方面影响无显著差异，而HIFU对神经节破坏更彻底。