Wistar大鼠成骨细胞粘弹性与相对增殖指数关系的实验研究

本文利用微管吸吮技术(Micropipetteaspirationtechnique),测量不同应变水平作用下Wistar大鼠成骨细胞的粘弹性.发现在细胞相对增殖指数最大时,细胞的粘弹性大于控制组,从细胞生物力学的角度证实细胞骨架参与细胞的增殖与分化过程.     

大鼠肺微血管内皮细胞培养及其粘弹性研究

为了建立肺微血管内皮细胞培养方法 ,研究肺微血管内皮细胞粘弹性。我们取大鼠肺周边组织 (宽度不应大于 1.5 mm) ,将组织剪成 1.5 mm× 1mm× 1mm的组织块 ,贴入无菌的 2 5 cm3培养瓶 ,每瓶 10～ 15块 ,同时加入含 2 0胎牛血清、肝素 90 U/ml、L-谷氨酰胺 4mmol、青霉素 10 0 U/ml和链霉素 10 0 μg/ml的 DMEM培养基 3ml,放入 37℃二氧化碳培养箱中静置培养 ;8h后翻转培养瓶 ,6 0 h后取出肺组织块 ,接着继续培养 2～ 4d后进行传代。最后消化分离肺微血管内皮细胞 ,用微管吸吮系统研究肺微血管内皮细胞粘弹性。结果显示 :肺微血管内皮细胞通过倒置相差显微镜观察 ,细胞呈鹅卵石镶嵌状排列 ,状如梭形或多角形 ,大小均匀 ,胞核清晰 ,呈卵圆形 ,胞浆丰富 ; 因子相关抗原免疫荧光染色呈阳性 ;肺微血管内皮细胞弹性模量 K1 =49.3± 9.2 Pa、K2 =73.2±2 4.8Pa、粘性系数 μ=19.2± 7.2 Pa.s。这些结果表明用组织块法培养肺微血管内皮细胞是可行的 ,肺微血管内皮细胞表现出较大的刚性     

大鼠血管平滑肌细胞形态和DNA合成对基底膜周期性应变的响应

目的：探索基底膜伸张应变与血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和重排的关系。了解融合和非融合细胞生长状况对应力作用的响应。方法：应用自行研制的基底膜伸张装置，模拟生理状况下血管平滑肌细胞受到的二维拉伸应变，通过基底膜伸张的单向循环加载方式，使膜上生长的细胞变形，结合显微形态观测。计算机图象处理，[甲基^3-氢]胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入实验，综合考查应变对VSMC形态变化和DNA合成的影响，结果：（1）加载30′-6h细胞辅展面积进行性增加，6-24h细胞铺展面积缩小；（2）非融合生长的细胞随细胞增殖和加载时间延长。细胞排布处于调整变化中；（3）融合生长的细胞，加载10h后，细胞排布趋于稳定并呈平行排列，且有舒缩活动，（4）与对照组比较加载24h^3H-TdR掺入明显升高。结论：未融合生长的细胞对应变刺激的响应以细胞增殖为主，融合生长的细胞对应变刺激的响应以细胞重排为主。并表现组织特异功能一收缩活动。     

人、Wistar大鼠、昆明小鼠成骨细胞粘弹性的测量

目的:测量人、Wistar大鼠、昆明小鼠成骨细胞粘弹性,并对测量结果进行比较.方法:利用微管吸吮技术(Micropipette aspiration technique),测量人、Wistar大鼠、昆明小鼠成骨细胞在负压作用下的变形,把成骨细胞简化成为标准粘弹性固体,通过相应的力学计算和计算机图像处理,获得成骨细胞的粘弹性.结果:人成骨细胞的刚度远大于鼠成骨细胞的刚度,Wistar大鼠成骨细胞的刚度则大于昆明小鼠成骨细胞的刚度,但二者属于同一数量级.     

体外细胞基底拉伸加载装置的研制与应用

目的：更好地模拟体内细胞所处的力学环境，适应细胞力学信号转导研究的需要。方法：研制了一种适于大面积细胞培养、拉伸，并可以控制时间、应变大小、方向、频率等的单轴双向细胞基底拉伸装置，并利用该装置对细胞基底膜施以拉格朗日应变为10％、频率为1Hz的周期加载。结果：细胞表面形态及内部骨架都发生了变化，细胞长轴取向趋向于与主应变方向垂直，应力纤维排布与细胞取向一致。结论：该装置为研究细胞对机械拉伸的响应提供了多种检测手段。     

不同基底静态加载方式对兔肌成纤维细胞(前体)表达α-SMA的影响

目的通过对不同分化阶段的兔肌成纤维细胞及前体施加不同的基底应变刺激,研究此过程中细胞表达α-SMA的时间剂量关系。方法选取异体蛋白植入法获得5 d和7 d的肌成纤维细胞(前体),培养于弹性膜上;利用基底静态拉伸对其分别施以应变从0%～3%和3%～6%的分段载荷及0%～6%的阶跃式载荷。结果 3 d阶段的肌成纤维细胞(前体)没有表达α-SMA;5～7 d阶段可以监测到α-SMA的表达;在10～15 d阶段则表达显著增强(P<0.01)。两种加载方式下,α-SMA的表达量均显著增加;分段加载作用下SMA的表达量更高。结论肌成纤维细胞(前体)α-SMA受基底静态拉伸后表达增加,且对不同的加载方式能做出不同的响应,提示在肌成纤维细胞的分化和愈伤反应过程中,力学因素扮演着十分重要的角色。     

兔胆囊上皮细胞的一种体外原代培养方法

以ＲＰＭＩ－１６４０为基础培养液，添加适量小牛血清、表皮生长因子等营养成分，在３７℃、５％ＣＯ２的湿润空气培养箱内培养兔胆囊上皮细胞，细胞经１０天左右形成融合单层，细胞形态呈卵圆状，单层可维持十天以上。