精氨酸代琥珀酸合成酶⁃1对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨精氨酸代琥珀酸合成酶-1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法：利用siRNA和慢病毒载体在胰岛β-TC6细胞中分别敲低和过表达ASS1;5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′- deoxyuridine,EdU)和CCK-8检测细胞增殖能力;Annexin V-PI流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(terminal dUTP nick-end labeling assay,TUNEL)检测细胞凋亡水平;Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(B-cell leukaemia-2,Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白 (Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase3)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase- 3)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、细胞核增殖抗原(Ki67)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)的表达水平;RT-qPCR检测AIF、Ki67和mTOR mRNA水平。结果：①与对照相比,敲低ASS1后,胰岛β细胞EdU阳性率和CCK-8细胞增殖活力降低,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率升高。胰岛β细胞内AIF表达量明显升高,Bax/Bcl-2比值下降,Caspase-3活性降低。②过表达ASS1后,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率均较对照组降低,伴随胰岛β细胞内Ki67和mTOR表达量升高。但胰岛β细胞EdU阳性率和CCK-8细胞增殖活力无明显变化。结论： ASS1 过表达可能激活 mTOR 信号通路促进胰岛β细胞增殖;ASS1 表达降低时,胰岛β细胞可通过 AIF 途径启动细胞凋亡。 ASS1可能在胰岛β细胞的增殖和凋亡中发挥一定调控作用。     

一种小鼠胰岛经门静脉肝内移植方法及疗效评价

目的 介绍一种糖尿病小鼠经门静脉到肝内胰岛移植的方法并进行移植前后的血糖、口服糖耐量、免疫组化等评价。方法 采用Balb/c小鼠,将分离纯化的小鼠胰岛培养6 h后,用自制的移植工具进行糖尿病模型小鼠的肝门静脉插管和输注胰岛,移植胰岛量为（320±30）IEQ,对移植前后的小鼠血糖进行测定,在移植后第10天进行糖耐量试验,并取受体小鼠肝脏,进行HE染色和免疫组化分析,观察胰岛细胞团在肝内的存活情况。结果受体小鼠胰岛移植后血糖均能长期维持正常,糖耐量试验结果显示与正常小鼠无统计学差异（P =0.81）,组织学结果显示胰岛细胞在小鼠肝内存活良好。结论 采用本方法可建立小鼠胰岛经门静脉移植到肝内的模型,为下一步进行胰岛移植相关药物筛选及免疫学等方面研究奠定了基础。     

微囊化胰岛移植联合肾动脉重建缓解糖尿病肾病大鼠早期肾脏病变

目的：建立微囊化胰岛移植联合肾动脉重建大鼠模型,并观察该模型对糖尿病肾病（DN）大鼠早期肾脏病变的疗效。方法：SD大鼠单次大剂量腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。实验分为3组：①DN组;②微囊组（采用微囊化胰岛腹腔移植）;③联合组（进行微囊化胰岛移植联合肾动脉重建）。各组观察4周后,收集24 h内所有尿液,检测尿蛋白总量,并随机检测各组血糖。收集各组肾脏和肾动脉分别进行PAS染色和HE染色,并观察结果。结果：微囊化胰岛移植联合肾动脉重建可以降低大鼠血糖,明显减少尿蛋白。肾脏PAS染色提示联合组和微囊组均可以减轻肾小球硬化,但2组差异无统计学意义。联合组和微囊组肾动脉内膜增厚不显著。结论：微囊化胰岛移植联合肾动脉重建可以显著减轻早期DN病变。     

门静脉输注胰岛至大鼠肝脏去细胞支架的结果考察

目的 考察经门静脉移植后的胰岛细胞团在肝脏血管中停留的位置及栓塞部位细胞团的相关情况。方法 取成年SD大鼠,从门静脉在体灌注去污剂十二烷基硫酸钠溶液使肝脏去细胞化,再输注经二苯基硫卡巴腙染色后的大鼠胰岛,在体视显微镜和倒置显微镜下观察去细胞后的肝脏内部的血管和胰岛在肝脏内的栓塞情况。结果 大鼠肝脏在体去细胞后,可得到完全透明、清晰的肝脏支架,肝内血管分支丰富,经灌注（800±250）IEQ胰岛细胞团后,胰岛主要栓塞在大鼠肝脏边缘血管末梢,有时一个血管末梢栓塞有多个细胞团。结论 本方法模拟大鼠门静脉内胰岛移植,呈现了胰岛在肝脏内血管的驻留情况,有利于进一步研究改进胰岛在肝内移植后的存活和功能发挥。