脂肪细胞通过TNF-α-p38 MAPK信号通路促进内皮细胞ICAM-1表达

目的血管内皮细胞功能紊乱是腹膜透析患者心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)发生的重要原因。本研究模拟腹膜透析液的高糖环境,观察高糖作用下脂肪细胞对微血管内皮细胞细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)表达的影响,探讨腹膜透析患者内皮功能紊乱导致CVD发生的可能机制。方法体外诱导3T3-L1分化成为脂肪细胞。将实验所用内皮细胞分成6组,分别是:对照组,高糖组,高渗组,对照脂肪细胞组(普通培养基培养脂肪细胞所得上清干预内皮细胞),高糖脂肪细胞组(高糖培养脂肪细胞所得上清干预内皮细胞)及高渗脂肪细胞组(高渗培养脂肪细胞所得上清作干预内皮细胞)。细胞增殖检测试剂盒检测b End.3增殖能力。酶联免疫吸附试验检测脂肪细胞高糖、高渗作用后上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达量的改变。Western blot法检测脂肪细胞条件培养基对内皮细胞ICAM-1表达量的影响,及加用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路阻断剂SB203580作用于内皮细胞后ICAM-1表达量的变化。结果与对照组相比,高糖培养液直接干预内皮细胞或培养脂肪细胞后干预内皮细胞均可以促进内皮细胞增殖(高糖组/对照组:1.600±0.104比1.000±0.000,t=9.954,P=0.010;高糖脂肪细胞组/对照脂肪细胞组:1.563±0.181比1.213±0.097,t=2.945,P=0.042)。高糖可显著促进脂肪细胞TNF-α的表达(2515.313±277.434比788.683±167.267,t=9.232,P=0.001)。高糖培养脂肪细胞的上清显著促进内皮细胞ICAM-1表达(1.533±0.058比1.133±0.153,t=4.243,P=0.013),该作用可被p38 MAPK信号通路阻断剂SB203580部分抑制(0.850±0.111比1.124±0.108,t=-3.053,P=0.038)。结论高糖培养脂肪细胞后,可通过TNF-α-p38 MAPK信号通路促进内皮细胞ICAM-1表达,可能和腹膜透析患者内皮细胞功能紊乱及CVD发生有关。     

狼疮肾炎患者循环miRNA表达谱研究及循环miR-130b-3p的临床意义

目的分析处于不同进展阶段的狼疮肾炎(LN)患者循环miRNA的表达变化并探讨其可能存在的临床意义。 方法本研究共94份血清标本,包括58例LN患者和36名健康体检者(作为对照组)。挑选出其中性别、年龄匹配的12份血清标本用于循环miRNA表达谱筛选,包括早期LN组4份(CKD 1～3期),晚期LN组4份(CKD分期4～5期)及对照组4份作为芯片组,使用miRNA PCR芯片检测血清miRNA变化;剩余50例LN患者(40例早期LN患者、10例晚期LN患者)及32名对照者血清样本作为验证组,用于验证miRNA表达谱筛选结果;以Nanodrop 2000检测血清总RNA抽提浓度;选择miR-130b-3p和miR-1233-3p作为验证对象;进行Spearman相关性分析。 结果芯片组结果显示,与对照组相比,早期LN组中7个表达上升的miRNA差异具有统计学意义,分别是：miR-1233-3p (P＝0.019)、miR-130b-3p (P＝0.021)、miR-18a-3p (P＝0.021)、miR-628-3p (P＝0.023)、miR-1260b (P＝0.030)、miR-1539 (P＝0.041)和miR-378e (P＝0.047);晚期LN组分别与对照组及早期LN组比较,未发现表达上调大于2倍或者上调差异具有统计学意义的miRNA。验证组结果显示：晚期LN组患者分别与对照组、早期LN组比较,血清总RNA浓度下降(U＝4.5,P<0.001;U＝18.0,P<0.001);早期LN组与对照组比较,血清中miR-130b-3p表达升高[IQR 16.2(8.7,42.7)与9.6(4.8,17.4), U＝405.5,P＝0.008];晚期LN组分别与对照组及早期LN组比较,MiR-130b-3p和miR-1233-3p表达均下降(U＝69.0、P＝0.008,U＝46.0、P<0.001;U＝80.0、P＝0.019,U＝70.0、P＝0.002);相关性分析显示循环miR-130b-3p的相对表达量与24 h尿蛋白(r＝0.404,P＝0.010)、肾脏慢性活动指数(r＝0.389,P＝0.013)、甘油三酯(r＝0.376,P＝0.017)呈正相关。 结论严重肾功能衰竭患者可能存在循环miRNA广泛表达下调,循环miRNA-130b-3p在早期LN患者中表达升高并与肾脏损伤和血脂调节异常相关,在LN发生发展中可能起作用。