纳洛酮对缺血再灌注海马细胞线粒体功能保护作用的研究

目的观察缺血再灌注期间海马细胞内游离钙离子、线粒体膜电位的变化以及纳洛酮对细胞的保护作用。方法20只新西兰大白兔随机分成4组对照组、缺血组、再灌注组、纳洛酮组,每组5只,然后以荧光染色流式细胞仪检测各实验组海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位的变化。结果缺血组、再灌注组海马细胞内游离钙离子浓度显著高于对照组和纳洛酮组;其线粒体膜电位则低于对照组和纳洛酮组;再灌注组游离钙离子浓度明显高于缺血组;其线粒体膜电位则低于缺血组;对照组与纳洛酮组间各指标无显著差异。结论纳洛酮对缺血再灌注引起的海马细胞内钙离子浓度升高有抑制作用,对线粒体膜电位下降有一定的保护作用。     

以激光扫描共聚焦显微镜三维重建肾小球系膜细胞

为进一步研究肾小球系膜细胞的结构与功能，利用激光扫描共聚焦显微镜对体外培养的人肾小球系膜细胞进行断层扫描及三维重建，并与普通荧光显微镜的图像进行了比较。结果表明，共聚焦显微镜可以清晰地显示系膜细胞的立体形态以及纤维连接蛋白在细胞质内不同层面的分布状况及分布强度，这为从立体结构方面对系膜细胞深入研究提供了一个新的方法。     

冬虫夏草对5／6肾切除大鼠肾脏病理改变的影响

冬虫夏草对５／６肾切除大鼠肾脏病理改变的影响程庆，于力方，师锁柱，陈香美ＥＦＦＥＣＴＯＦＣＯＲＤＹＣＥＰＳＳＩＮＥＮＳＩＳＯＮＲＥＮＡＬＨＩＳＴＯＬＯＧＩＣＡＬＣＨＡＮＧＦＳＩＮ５／６ＮＥＰＨＲＥＣＴＯＭＩＺＥＤＲＡＴ￥ＣｈｅｎｇＱｉｎｇｌｉ；ＹｕＬ...     

尿毒症患者自然杀伤细胞活力变化

自然杀伤细胞(Natural Killer Cell)简称NK细胞是1973年由Takasugi最先从正常人外周血中分离到的免疫细胞,它在形态上酷似淋巴细胞但它具有自发性细胞毒性,识别靶细胞不受HLA制约,无抗原特异性,无记忆性反应,在T细胞生长因子及PHA、ConA刺激下增殖。在干扰素影响下,细胞毒性迅速扩大。在IL-2作用下,NK细胞能产生干扰素。NK细胞也是体内的自我调节细胞,能抑制B细胞产生免疫球蛋白。NK细胞在体外对多种人体肿瘤细胞株显示出明显的细     

利用荧光探针JC-1检测心肌细胞线粒体膜电位的改变

利用荧光探针JC－1观察大鼠心肌细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化。用过氧化氢（H2O2）诱导心肌细胞凋亡，在凋亡早期，利用新型荧光探针JC－1标记细胞线粒体，在FACS Calibur流式细胞仪上检测JC－1荧光强度的变化，用Annexin-V/PI双染色法鉴别凋亡和坏死的心肌细胞。结果显示，在正常大鼠心肌细胞中，线粒体维持较高的膜电位，JC－1在线粒体内形成聚合物，发出红色荧光。H2O2导致线粒体膜电位下降，JC－1聚合物分解成单体，红色荧光强度减弱。提示JC－1结合流式细胞仪是一种理想的检测线粒体膜电位的手段。     

高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响

有文献报道高温诱导细胞凋亡有两个独特的模型: 慢死亡和快死亡.慢死亡是指细胞受热后,在失去再生能力之前能够维持生理活动几天.快死亡是指细胞受热后几天内发生的死亡,其特征是细胞脱离其培养表面.关于快死亡的机制可能与热诱导细胞凋亡有关[1].目前随着对凋亡机制研究的深入,已从细胞质膜转向线粒体.线粒体是促进能量转换、参与细胞凋亡的重要细胞器.由于细胞膜上各种生物泵的作用,使细胞膜内外维持着不同梯度的离子浓度,产生了线粒体膜电位.几乎所有诱导剂引起的各种类型的细胞凋亡均出现线粒体膜电位下降,提示线粒体膜电位下降为早期凋亡[2] .本文建立一种高温诱导ECV-304细胞凋亡的方法,并应用流式细胞仪采用AV-FITC/ PI 双染法和荧光探针JC-1 法,对高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响进行分析.     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生的实验研究

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况。方法：从６月龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：①经１０－８、１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激４８ｈ后，系膜细胞的ＡＴ１受体ｍＲＮＡ表达均有升高，并呈一定的浓度依赖性；而ＡＴ２受体ｍＲＮＡ仅在１０－５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激下才有微弱表达。②１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ能明显促进系膜细胞产生ＦＮ和ＦＮ的ｍＲＮＡ表达的上调，并与ＡｎｇⅡ刺激浓度呈正相关。结论：ＡｎｇⅡ刺激后可使系膜细胞的ＡＴ１受体基因表达和ＦＮ的产生明显增加，并呈一定的浓度依赖性，而ＡｎｇⅡ高浓度可以使ＡＴ２受体表达上调     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物-1、-2及凝血酶调控的研究

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI 1640培养12 h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2 mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5 HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2 mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

用微分离方法培养肾皮质近曲肾小管和髓质集合管上皮细胞及其生物学特征的研究

在肾间质发病过程中 ,各段肾小管上皮细胞受到的侵害和发挥的作用不同。为了探讨不同节段肾小管上皮细胞的生物学特征 ,作者利用微分离的方法在解剖显微镜下获取肾脏皮质近曲小管和髓质集合管进行体外培养 ,分别得到了纯净的近曲小管和集合管上皮细胞。通过细胞免疫组化和耐高渗实验方法对该两种细胞进行区分和鉴定 ,利用 EL ISA和细胞株依赖方法检测了该两种上皮细胞表达血管紧张素 IIAT- 1受体和分泌白细胞介素 - 6( IL-6)的情况。结果 :近曲小管上皮细胞 AT- 1受体的分布和分泌 IL- 6的量均显著高于集合管上皮细胞 ;在血管紧张素II刺激下 ,近曲小管上皮细胞产生的 IL- 6明显增加 ,而集合管上皮细胞则无明显改变。结论 :近曲小管和集合管上皮细胞在炎症介质的产生上具有不同的生物学特征