外源性p53对不同LET辐射诱导人黑色素瘤细胞系A375死亡途径的影响

目的 观察外源性P53蛋白对不同传能线密度(LET)射线辐照诱导肿瘤细胞凋亡和坏死的影响,并探讨其可能的机制。方法 人黑色素瘤细胞系A375(wild-type p53)经携带人野生型p53基因的腺病毒载体(AdCMV-p53)感染后分别给予X射线和碳离子束照射,采用克隆形成法测定细胞辐射敏感性,Hoechst 33258和吖啶橙-溴化乙锭双染荧光显微镜下观察细胞凋亡和坏死。结果1高LET辐照时,A375细胞和转导人野生型p53基因的A375细胞(A375/p53)的辐射敏感性没有明显差异;2虽然辐射诱导细胞凋亡比例的增加依赖于LET升高,但是无论高LET或低LET,外源性P53蛋白均可有效诱导细胞凋亡。3高LET辐照时,A375细胞的坏死细胞明显高于A375/p53细胞。结论 尽管高LET辐射对A375和A375/p53细胞的存活无明显影响,但是对细胞凋亡的诱导却部分依赖于P53蛋白的功能,P53蛋白可能在调节细胞死亡类型中发挥重要作用。这对临床应用高LET辐射联合p53基因治疗恶性黑色素瘤有一定参考意义。     

一氧化氮对人肝癌细胞SMMC-7721辐射敏感性的增强效应

目的:观察一氧化氮对肿瘤细胞SMMC-7721辐射敏感性的作用效果。方法:实验于2005-06/09在兰州大学生命科学学院和中科院近代物理研究辐射医学实验室进行。处于对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,在用X射线照射前4h,换入含有0.1mmol/L硝普钠(一氧化氮的前体)的培养液,与对照组(不加硝普钠)一起,在200cGy/min的剂量率下,分别照射0,1,2,4,6,8Gy,换为正常培养液培养。用集落形成法计算细胞的存活率,用吖啶橙/溴乙啶双染法检测细胞的死亡情况,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:①存活曲线细胞存活率随照射剂量增加而减少,硝普钠组细胞的克隆形成率低于对照组(2Gy时,P<0.01)。②细胞死亡百分率(坏死细胞与凋亡细胞总数/总细胞数):与照射剂量呈正相关,硝普钠组高于对照组(P<0.05)。对照组从(9.95±3.53)%(0Gy)逐渐升至(58.74±3.46)%(6Gy),而硝普钠组则从(18.53±12.02)%(0Gy)迅速升至(61.57±9.53)%(2Gy)。③细胞周期检测结果:对照组细胞经过X射线照射后,出现了G2/M期阻滞[从0Gy时(12.50±5.76)%逐渐增加到8Gy(40.36±2.74)%],而硝普钠组细胞在低剂量时主要表现为G0/G1期阻滞[0Gy:(16.06±7.19)%;2Gy:(17.93±0.92)%],而G2/M期阻滞仅在高剂量时明显[8Gy时为(50.10±3.93)%,P<0.05]。结论:经硝普钠产生的一氧化氮,通过与X射线协同作用,减少了肝癌细胞SMMC-7721的细胞存活率,促进细胞死亡,阻止细胞被阻滞至G2/M期,是一种有效的辐射增敏剂。     

单细胞电泳观察重离子辐照人肝癌细胞所致DNA损伤

目的 研究重离子对肿瘤细胞DNA的损伤程度，为重离子治癌的临床应用积累必要的基础数据。方法 用80MeV／u氖离子射线诱发SMMC-7721细胞DNA辐射损伤，利用单细胞凝胶电泳(single cell gelelectrophoresis，SCGE)实验方法处理细胞，并对结果进行统计分析。结果 氖离子辐照以剂量依赖的方式引起SMMC-7721细胞DNA迁移长度的增加，且拖尾长度与剂量呈线性正相关；同时，拖尾的细胞数(即损伤的细胞数)在剂量大于2Gy时100％细胞损伤。结论 重离子射线对DNA有强致损效应。     

2种苯并呋喃衍生物对肝癌细胞的毒性及活性氧机制

目的:比较离舌橐吾Ligularia veitchiana(Hemsl.)Greenm的2种苯并呋喃衍生物5,6-二甲氧基-2-异丙基-苯并呋喃(5,6-dimethoxy-2-isopropenyl-benzofuran,化合物1),5-乙酰基-6-甲氧基-2-异丙基-苯并呋喃(5-acetyl-6-methoxy-2-isopropenyl-benzofuran,化合物2)对人肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02的毒性,并分析其可能机制。方法:用台盼蓝排染法检测化合物细胞毒性、用DCFH-DA荧光分光光度计法检测细胞活性氧含量、用钼酸铵比色法检测过氧化氢酶活性。结果:化合物1和2对L02的IC50分别为(171.2±3.3)mg·L-1和(79.0±4.1)mg·L-1,高于对HepG2的IC50(84.2±6.5)mg.L-1和(65.2±1.9)mg·L-1,表明肿瘤细胞比正常细胞对化合物更加敏感。用化合物1和2 IC50处理细胞48 h,测得HepG2细胞活性氧分别是对照组的1.6倍和3.2倍;L02细胞活性氧分别是对照组的1.2倍和1.8倍。化合物1和2处理后,HepG2细胞过氧化氢酶活力分别从对照组的(17.2±1.7)U·mg-1下降到(12.8±0.4)和(6.4±0.1)U·mg-1;L02细胞过氧化氢酶活力分别从对照组的(17.7±1.2)U·mg-1下降到(14.3±1.5)和(8.6±0.5)U·mg-1;HepG2过氧化氢酶活力降低幅度大于L02。结论:2个化合物对HepG2的毒性和活性氧的增幅均大于L02,同时HepG2过氧化氢酶活力降幅也大于L02。据此推测2个化合物细胞毒性与活性氧有关。     

三种瘤细胞对重离子和γ射线的辐射敏感性

目的：比较体外培养的瘤细胞对重离子和γ射线的辐射敏感性，方法：以人肝癌SMMC－7721，宫颈癌HeLa和小鼠黑色素瘤B16细胞为材料，用集落形成法研究了细胞经γ射线和重离子处理后的存活情况，结果：细胞经γ射线处理后均表现为有肩区的存活曲线，属多靶击中模型，细胞经重离子处理后表现为无肩区的存活曲线，属单靶击中模型，在细胞存活分数为50％和10％时得到SMMC－7721，HeLa,B16细胞的RBE值分别为3．40，2．76，4．67和1．88，1．53，2．22，结论：在相同剂量下，重离子能更有效地杀灭瘤细胞。γγ     

γ射线照射人正常肝细胞染色体损伤的修复

目的研究人类正常肝细胞经γ射线诱导染色体损伤的动态修复。方法应用早熟染色体凝集技术对人类正常肝脏细胞经γ射线照射导致的染色体损伤后48h内的动态修复过程进行研究。结果照射后原初染色单体断裂和等点染色单体断裂数随着照射剂量的增加而增多，染色单体断裂显著多于等点染色单体断裂；经过24h的继续培养，这两种类型的损伤都有不同程度的修复，约50％染色单体断裂得到修复，而等点染色单体断裂的修复率最多为15％；经过48h的照射后培养，染色体损伤的水平与24h相比没有显著差异。结论肝细胞经γ射线照射后染色体损伤的主要形式是染色单体断裂，易于修复；虽然等点染色单体断裂数量较少，但修复困难。提示等点染色体断裂是细胞经γ射线照射后死亡和癌变的一个重要因素。     

γ射线外照射诱发人体外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的研究γ射线外照射诱导正常人血淋巴细胞DNA损伤的剂量效应关系。方法以正常人体外周血淋巴细胞为材料,采用单细胞凝胶电泳技术(Single cell gel electrophoresis,SCGE,又称彗星电泳),研究了不同剂量γ射线外照射诱导正常人血淋巴细胞DNA瞬时损伤的情况。结果0、0.1、0.5、12、和3 Gyγ射线外照射淋巴细胞后,彗尾DNA含量(y)与受照剂量(x)关系为y=-1.1063x2 10.398x 3.5362,Olive矩(y)与受照剂量(x)关系为y=-0.0345x2 3.5282x 0.6542。结论γ射线外照射正常人血淋巴细胞DNA有明显的损伤作用,所致原初损伤与受照剂量呈良好的线形平方关系,单细胞凝胶电泳技术有望成为新一代生物剂量计。     

脑瘫丸对神经细胞损伤修复及缺氧缺血幼鼠认知功能障碍的影响

BACKGROUND： Hypoxia and ischemia induce neuronal damage, decreased neuronal numbers and synaptophysin levels, and deficits in learning and memory functions. Previous studies have shown that lycium barbarum polysaccharide, the most effective component of barbary wolfberry fruit, has protective effects on neural cells in hypoxia-ischemia. OBJECTIVE： To investigate the effects of Naotan Pill on glutamate-treated neural cells and on cognitive function in juvenile rats following hypoxia-ischemia. DESIGN, TIME AND SETTING： The randomized, controlled, in vivo study was performed at the Cell Laboratory of Lanzhou University, Lanzhou Institute of Modern Physics of Chinese Academy of Sciences, and Department of Traditional Chinese Medicine of Gansu Provincial Rehabilitation Center Hospital, China from December 2005 to August 2006. The cellular neurobiology, in vitro experiment was conducted at the Institute of Human Anatomy, Histology, Embryology and Neuroscience, School of Basic Medical Sciences, Lanzhou University, and Department of Traditional Chinese Medicine of Gansu Provincial Rehabilitation Center Hospital, China from March 2007 to January 2008. MATERIALS： Naotan Pill, composed of barbary wolfberry fruit, danshen root, grassleaf sweetflag rhizome, and glossy privet fruit, was prepared by Gansu Provincial Rehabilitation Center, China. Rabbit anti-synaptophysin, choline acetyl transferase polyclonal antibody, streptavidin-biotin complex kit and diaminobenzidine kit （Boster, Wuhan, China）, as well as glutamate （Hualian, Shanghai, China） were used in this study. METHODS： Cortical neural cells were isolated from neonatal Wistar rats. Neural cell damage models were induced using glutamate, and administered Naotan Pill prior to and following damage. A total of 54 juvenile Wistar rats were equally and randomly assigned into model, Naotan Pill, and sham operation groups. The left common carotid artery was ligated, and then rat models of hypoxic-ischemic injury were assigned to the model and Naotan Pill groups. At 2 days following model induction, rats in the Naotan Pill group were administered Naotan Pillsuspension for 21 days. In the model and sham operation groups, rats received an equal volume of saline. MAIN OUTCOME MEASURES： Neural cell morphology was observed using an inverted phase contrast microscope. Survival rate of neural cells was measured by MTT assay. Synaptophysin and choline acetyl transferase expression was observed in the hippocampal CA1 region of juvenile rats using immunohistochemistry. Cognitive function was tested by the Morris water maze. RESULTS： Pathological changes were detected in glutamate-treated neural cells. Neural cell morphology remained normal after Naotan Pill intervention. Absorbance and survival rate of neural cells were significantly greater following Naotan Pill intervention, compared to glutamate-treated neural cells （P 〈 0.05）. Synaptophysin and choline acetyl transferase expression was lowest in the hippocampal CA1 region in the model group and highest in the sham operation group. Significant differences among groups were observed （P 〈 0.05）. Escape latency and swimming distance were significantly longer in the model group compared to the Naotan Pill group （P 〈 0.05）. CONCLUSION： Naotan Pill exhibited protective and repair effects on glutamate-treated neural cells. Naotan Pill upregulated synaptophysin and choline acetyl transferase expression in the hippocampus and improved cognitive function in rats following hypoxia-ischemia.     

染色体畸变与人肿瘤细胞辐射敏感性关系的研究进展

放疗是治疗癌症的有效手段之一，然而各种肿瘤甚至同种肿瘤的不同病人其疗效却有很大差异，其中重要的影响因素就是肿瘤细胞的辐射敏感性。如果能在放疗前预知其敏感性的高低，则可大大地改善放疗方案的制定和决策，从而有针对性的提高各个病人的疗效。目前，常用低剂量照射后的细胞存活率(如SF2)判断辐射敏感性，但这种方法需要的时间较长，而且活检细胞体外培养不易成功，     

不同LET碳离子对哺乳动物细胞的生物学效应

目的 研究不同传能线密度（LET）的重离子对体外培养细胞存活率,微核率和染色体畸变的效应,方法 用集落形成法研究细胞的存活情况。观察统计细胞微核率和染色体结构的变化。结果 （1）细胞存活：不同LET碳离子引起细胞失活效应由大到小的顺序依次为125,200,700keVμm。（2）细胞微核：相同剂量下,200kgV/μm碳离子所致微核率高于700keV/μm时的结果。（3）染色体畸变;可看到多种染色体结构变异。结论 在本实验中,LET为125kgV/μm的碳离子引起的失活效应最大,200kgV/μm碳离子引起的微核率离于700keV/μm碳离子引起的微核率。