变异胰岛素基因在HepG2细胞系中的表达

目的了解变异的胰岛素基因(insulin/furin)在HepG2细胞系中表达及活性胰岛素的产生情况。方法构建含有insulin/furin的表达质粒p(G1RE)3BP-11×furin并转染HepG2细胞,RT-PCR和放射免疫分析法从mRNA和蛋白质水平观察转染后HepG2细胞中insulin/furin的表达和胰岛素的产生情况。结果HindⅢ和EcoR V双酶切验证质粒p(G1RE)3BP-11×furin,切下260bp和4700bp两个片段,回收260bp片段测序证实为insulin/furin;RT-PCR检测转染后的HepG2细胞有insulin/furin的表达,DNA测序证实为insulin/furin;培养基中可检测到胰岛素。结论含insulin/furin的真核表达质粒p(G1RE)3BP-11×furin转染HepG2细胞,insulin/furin成功地在HepG2细胞中表达,并产生有生物活性的胰岛素。     

Establishment and characterization of two cell lines derived from human transitional cell carcinoma.

Two continuous cell lines derived from the neoplastic urothelium had been maintained in culture for more than two years. The first cell line derived from the urothelium of a fusion papillocarcinoma on the left lateral wall of the bladder was designated as TBC-1 and grown in vitro for more than 150 generations. The second cell line derived from the urothelium of a papillocarcinoma in the left renal pelvis was designated as TPC-1 and grown in vitro for more than 100 generations. Characterization studies made on both cell lines showed that the cells had a rapid doubling time, exhibited mul-tilayering and produced tumors in sc of BALB / c. Tumor nodules that produced sc of BALB / c kept similar cellular and pathological features to those of the primary biopsy specimens under light and electron microscopes. TPC-1 cell line exhibited a three-dimensional structure of transitional epithelium on the nylon-mesh disk which was coated with a layer of rat tail collagen. Both TBC-1 and TPC-1 cell lines formed colonies     

phIFN-α-2 B穿梭质粒在卡介苗中的表达

目的建立一种新型、具有分泌hIFN-α-2B功能的卡介苗(BCG),为膀胱癌的治疗提供更合理的方法。方法利用基因工程技术构建出穿梭质粒phIFN-α-2B,转导至BCG内形成重组hIFN-α-2B-BCG,采用PCR、测序方法进行鉴定,ELISA方法对其表达情况进行检测。结果穿梭质粒phIFN-α-2B所插入的序列完全正确,可以转导入BCG内形成重组hIFN-α-2B-BCG。细菌外hIFN-α-2B浓度可达997.2pg/ml。结论利用基因工程技术构建了phIFN-α-2B穿梭质粒并转导入BCG内,构建出rBCG-hIFN-α-2B。重组BCG可将hIFN-α-2B分泌性表达到细菌外,为其应用于膀胱肿瘤的治疗提供了实验依据。     

阿奇霉素治疗小儿支气管肺炎150例疗效观察

支气管肺炎为小儿最常见的肺炎，在我国以细菌性肺炎常见，近几年支原体肺炎也逐渐增多。从2001年1月～2003年10月，在我院儿科应用阿奇霉素治疗支气管肺炎150例，疗效显著，现报道如下。     

葡萄糖、胰岛素调节(G1RE)3BP-1启动子活性的体外研究

 目的 探讨葡萄糖、胰岛素对(G1RE)3BP-1启动子活性的影响及意义.方法 采用脂质体转染法将含有(G1RE)3BP-1启动子的真核表达质粒p(G1RE)3BP-1Luc转染至人肝癌细胞系-HepG-2细胞中,6 h后分别加入不同浓度的葡萄糖、胰岛素,孵育48 h后,分别检测其报告基因荧虫素酶的活性.结果 荧虫素酶的活性随着培养基中葡萄糖的浓度增高而增加,随着培养基中胰岛素浓度的增多而减少.结论 (G1RE)3BP-1启动子在肝细胞中受葡萄糖的正调控、受胰岛素的负调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行.     

肾上腺内、外功能性副神经节瘤—嗜铬细胞瘤(附13例报告)

在可治性高血压病例中,功能性副神经节瘤(嗜铬细胞瘤)不可勿视。但由于其临床症状多变,从病理学区分良、恶困难,因     

静脉滴注吉他霉素致小儿急性肝炎一例

急性肝炎引是由于感染肝炎病毒而引起的肝脏疾病,病程不超过6个月.在我国,最常见的急性肝炎是急性乙型肝炎,表现为现低热、全身疲乏无力、食欲减退,伴有恶心、呕吐、厌油腻、肝区不适及尿黄等.笔者静脉滴注吉他霉素致小儿急性肝炎1例,现报告如下.     

逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞

目的：以牛生长激素(bGH)为模型，建立逆转录病毒载体转移系统，体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS，以获得bGH表达。方法：将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLC-MDR相应酶切位点，获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转洒重组质粒进入包装细胞PA317，筛选长春新碱抗性克隆株，收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS，筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3／bGH和2BS／bGH。结果：RT－PCR分析表明基因转染组的3T3／bGH细胞和2BS／bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带，而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达，而作为对照的3T3／mdr细胞和NIH／3T3细胞均无此蛋白表达。结论：应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞，该系统易筛选，转染效率较高。     

c-Ha-ras癌基因反义RNA抑制膀胱癌细胞生长及粘附的研究

目的 研究降低ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因表达对膀胱癌细胞生长和粘附的影响。方法 将反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因导入膀胱癌细胞系ＴＢＣ－１细胞株，筛选阳性细胞克隆。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定外源基因整合情况，荧光分光光度法检测ｃ－Ｈａ－ｒａｓ表达，绘制生长曲线，体外检测细胞粘附率。结果 筛选出细胞克隆ＴＢＣ－ｎｅｏ和ＴＢＣ－ａｎｔｉｒａｓ，放射自显影显示只有ＴＢＣ－ａｎｔｉｒａｓ有外源性ｃ－Ｈａ－ｒａｓ杂交带