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微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度为21~23 nt的单链非编码小RNA。在真核生物中miRNA主要通过与编码蛋白质基因的信使RNA(mRNA)配对结合,在转录后水平抑制基因表达。越来越多的证据表明,miRNA与氧化应激特别是辐射生物效应相关,miRNA有可能成为放射病治疗的潜在新靶点。本文概述电离辐射诱导miRNA的研究进展。 相似文献
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目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195. 相似文献
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DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用。方法:用Flag抗体Western印迹检测,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c-ret;用HA/myc抗体Western印迹检测,HA-ret TK myc-LZPR免疫共沉淀蛋白复合物;荧光蛋白标记的亚细胞定位。结果:PTC1可以与ATM激酶相互作用,此作用不依赖于电离辐射,且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素(wortmannin)所抑制,而野生型RET蛋白则不能同ATM结合;缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域,构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示,PTC1以弥散形式分布于细胞质内。结论:胞浆蛋白PTC1可能借债某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位,介导了细胞的恶性转化机制。 相似文献
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目的 克隆并鉴定低剂量辐射射诱导基因,为探讨低剂量辐射生物学效应分子机理提供有益信息。方法 0.5Gyγ射线照射人胚肺细胞后,用抑制消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridizaation,SSH)构建低剂量辐射诱导EST库。用反向Northern杂交法对库中SEST片段进行筛选,挑取阳性克隆测序,并在GenBank序列数据中进行同源性比较。结果 得到受照后表达升高90个EST序列,代表21个基因的转录产物,部分基因的功能已明确。从功能上分析,这些基因产物的生物学作用涵盖了细胞周期、信号转导、细胞骨架、代谢、蛋白合成等几个重要的细胞生物学代谢反应过程,显示出细胞对低剂量辐射反应过程的多样性。另外,实验还获得4个新cDNA序列。结论 利用抑制消减杂交技术,从辐射前后HEL细胞中,得到低剂量辐射诱导EST片段,它们与细胞周期、增殖、代谢、信号转导、应激反应等相关,这些基因可能在细胞的低剂量辐射效应中起到重要作用。 相似文献
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目的探讨不同缺氧条件对HepG2细胞中miR-210表达水平的影响。方法采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件诱导HepG2细胞,利用实时定量PCR技术检测不同缺氧模式诱导前后HepG2细胞miR-210等表达变化。结果 3种缺氧模式均可以诱导HepG2细胞miR-210表达上调,其表达与CoCl2及Na2SO3的浓度有剂量依赖关系。结论 CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件均可以有效诱导HepG2细胞中miR-210的表达上调,3种模型均可用于缺氧诱导miRNA研究,同时进一步证明miR-210表达上调是由于细胞缺氧所致。 相似文献
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目的 建立ret基因重排的分析方法,提示中国人甲状腺乳头状癌中是否存在原癌基因ret重排及重排类型。方法 应用RT—PCR方法对65例甲状腺乳头状癌石蜡切片标本进行ret基因重排检测,并对扩增结果进行测序鉴定。结果 在提取RNA成功的38例甲状腺乳头状癌(PK)标本中,有71%发生ret重排,其中10.5%表达RTC1;5.3%表达PTC3;5.3%表达PTC4,以PTC1发生的频率较高。仅1例表达PTC2与PTC3/PTC4混合型重排,中国人PTC可能与ret和H4及ELE1重排激活相关。结论 中国人PTC组织中存在4种重排,且以PTC1较为常见。单一标本中有多种重排形式并存,PTC1 3重排形式10例、3例PTC1 4、1例PTC2 3 4、1例PTC1 4、4例PTC1 3 4,单一标本中多种重排形式并存的比例高达50%,但与癌症的恶性程度、转移等无必然联系。 相似文献
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肝癌是常见的恶性肿瘤之一,其病程快且预后很差.其发生是一个多因素多步骤协同的复杂过程.近来的研究报道,肝癌发生分子机制与类胰岛素生长因子体系信号通路异常相关,类胰岛素生长因子是一种多功能细胞增殖调控因子,他在胚胎发育、中枢神经系统发育及肿瘤细胞增殖等方面具有重要的生物学功能.类胰岛素生长因子的生物学活性受到包括类胰岛素... 相似文献
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目的探讨乙肝肝硬化患者外周血血浆中甲胎蛋白(AFP)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和白蛋白(ALB)mRNA的表达水平及其临床意义。方法采用实时定量PCR方法检测了38例健康人血浆及38例乙肝肝硬化患者血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达水平,并分析其表达与临床检测指标间的相关性。结果 AFPmRNA、PKM2 mRNA及ALB mRNA的表达在肝硬化患者血浆和健康人血浆中存在明显差异,结果具有统计学意义(P〈0.01)。AFP mRNA和PKM2 mRNA的表达与临床检测指标没有显著相关性,ALB mRNA与γ-谷氨酰基转移酶及血清白蛋白具有相关性。与甲胎蛋白相比,检测的3种血浆mRNA在乙肝肝硬化患者中的高表达更明显。结论检测外周血血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达对肝病的临床诊断及治疗具有指导意义。 相似文献