常见病原真菌鉴定基因芯片方法的建立

目的 建立临床常见的病原真菌的基因芯片检测体系.方法 选取8种临床常见真菌,包括白色假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、土曲霉、黄曲霉、米根霉和烟曲霉.根据真菌ITS区设计引物和探针,进行扩增和芯片制备.通过将待检真菌的PCR产物变性后与点布探针的芯片杂交,观察并分析荧光信号强度,进行对真菌的快速检测.并选取临床真菌阳性标本和细菌阳性标本共25份进行验证.结果 25份临床阳性标本的芯片检测结果显示,10份细菌阳性的标本,经真菌基因芯片检测,全部为阴性,无荧光信号.其余15份真菌标本中,12份临床真菌阳性标本均鉴定出芯片中的某一种真菌的结果.另外采用克柔假丝酵母菌人为制备的3份待检样本,经检测,芯片中8种真菌位点无荧光信号,为阴性,仅有真菌通用探针得到荧光信号,表明该标本中有真菌存在,但无法确认是哪一种.结论 本研究建立的基因芯片可对常见病原真菌进行快速准确的鉴定,为基因芯片应用于临床奠定了基础.     

8种深部真菌DNA微阵列鉴定方法的建立及应用

目的 建立一种能快速鉴定临床常见8种深部真菌的DNA微阵列.方法 选取临床常见的8种真菌,包括白色假丝酵母、光滑假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、土曲霉、黄曲霉、烟曲霉和米根霉.利用通用引物扩增真菌ITS区,生物素标记目的基因.针对扩增靶序列的可变区段设计探针,以尼龙膜为载体,建立DNA微阵列.采用所建立的DNA微阵列对45株临床真菌分离株进行检测.结果 应用DNA微阵列技术成功地对8种临床常见真菌菌种进行了检测,检测时间可缩短至8 h.白色假丝酵母、光滑假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、米根霉、黄曲霉以及土曲霉的探针的检测特异度高,无非特异性反应;烟曲霉的检测探针与黄曲霉之间有微弱非特异性反应,但是不影响鉴定结果.45例临床真菌分离株的DNA微阵列鉴定结果与临床检出结果完全一致.结论 该研究建立的DNA微阵列技术可在8 h内快速、准确地检测临床常见深部感染真菌菌种,具备应用于临床辅助诊断的前景.     

非那雄胺联合维生素B_2治疗良性前列腺增生症疗效观察

目的：观察非那雄胺联合维生素B2治疗良性前列腺增生症（BPH）的疗效。方法：选择老年BPH 100例,随机分为观察组和对照组各50例。对照组采用非那雄胺治疗,观察组采用非那雄胺联合维生素B2治疗。观察两组用药前和用药3个月、6个月及12个月后症状评分（IPSS）、最大尿流率、前列腺体积等变化情况。结果：治疗3个月后,观察组IPSS分值、最大尿流率均显著优于对照组（P〈0.05）;两组前列腺体积差异不显著（P〉0.05）。6个月后,两组IPSS分值、最大尿流率及前列腺体积均差异不显著（P〉0.05）。12个月后,两组IPSS分值、最大尿流率差异显著（P〈0.05）,前列腺体积差异不显著（P〉0.05）。结论：非那雄胺联合维生素B2治疗BPH较单纯用非那雄胺疗效好。     

结核病诊断性血清学特异抗原的筛选和鉴定

目的 筛选和鉴定结核病患者血清抗体特异性识别的结核分枝杆菌抗原。方法 于改良罗氏培养基中培养结核分枝杆菌标准株H37Rv 4周,收集菌体,通过冰浴超声法提取结核分枝杆菌菌体抗原。收集2013年2—7月湖南省结核病防治所首次入院的30例初治结核病患者的血清,以及收集2013年7月湖南省人民医院检验科接收的20名健康体检者的血清。通过饱和硫酸铵沉淀法提取纳入的20例结核病患者的血清IgG,从结核分枝杆菌菌体抗原中免疫共沉淀血清学抗原,以纳入的其余10例结核病患者血清免疫印迹(Western blot,WB)验证其免疫反应性;从十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶上切割阳性反应的蛋白质条带,通过串联质谱技术进行鉴定。结果 免疫共沉淀获得1条相对分子质量为16000(16kDa)、能被结核病患者血清抗体特异性识别的蛋白质条带;经串联质谱鉴定,获得结核分枝杆菌热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)16.3、糖基转移酶蛋白、铁调控Lsr2蛋白前体等3种蛋白抗原。结论 采用免疫共沉淀偶联质谱技术获得3种结核分枝杆菌血清学抗原,可为结核病血清学诊断性抗原的选择进一步提供依据。     

应用基因芯片快速检测临床常见细菌

目的 应用基因芯片对临床常见的8种致病细菌进行检测.方法 选取8种临床常见的致病细菌,包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌、荧光假单胞菌、宋内志贺菌.以16S rRNA基因为目的基因,白行设计通用引物系列扩增目的片段,针对高变区域设计探针,建立基因芯片检测体系,并对所选细菌...